역 피펫팅 기법: 정의 및 사용 시기
피펫팅은 산업이나 어플리케이션에 관계없이 대부분의 실험실에서 표준 관행입니다. 그러나 모든 공통점에도 불구하고 고려해야 할 여러 가지 변형이 있습니다. 여기에는 피펫 유형, 채널 수, 피펫팅 기법 등이 포함됩니다.
올바른 피펫팅 기술은 정확하고 반복 가능한 액체 처리 결과를 보장하기 위한 가장 중요한 기술입니다. 이 기술은 일반적으로 분주되는 액체의 특성과 사용자가 선택한 액체를 흡인하고 분주하는 방식에 따라 결정됩니다. 가장 일반적인 방법 중 하나는 역 피펫팅 기법입니다. 여기에서는 역 피펫팅의 작동 방식, 사용 시기, 역 피펫팅이 필요한 이유에 대해 설명합니다.
역 피펫팅이란 무엇인가요?
정방향 피펫팅은 표준 기술로 간주되며 대부분의 수용액에 이상적입니다. 순방향 피펫팅에서는 목표 용량을 흡인하여 분주하고 별도의 블로우아웃 단계를 사용하여 플런저를 두 번째 정지까지 눌러 팁을 완전히 비웁니다.
역방향 피펫팅 기술에서는 피펫이 선택한 용량을 더한 초과 용량을 흡인합니다. 분주 후 초과 용량은 팁에 남아 있다가 폐기됩니다.
기계식 피펫을 사용한 역 피펫팅
- 피펫의 양 조절
- 피펫 팁 콘에 팁을 끼웁니다.
- 조작 버튼을 두 번째 정지까지 누릅니다.
- 액체 표면 바로 아래에 팁을 놓고 조작 버튼을 부드럽게 놓아 시작 위치로 돌아가게 합니다. 1초간 기다립니다.
- 액체에서 팁을 조심스럽게 빼냅니다.
- 작동 버튼을 첫 번째 정지까지 부드럽게 눌러 원하는 양을 주입합니다. 팁에 남아있는 액체는 이송에 포함되지 않아야 합니다.
- 조작 버튼을 두 번째 정지까지 눌러 남은 액체를 버립니다.
전자 피펫을 사용한 역 피펫팅
전자 피펫으로 역 피펫팅을 수행할 때 피펫에 의해 피스톤 위치가 제어됩니다. 사용자는 작동 버튼을 눌러 흡인 및 분주 작업을 시작합니다.
역 피펫팅은 언제 사용해야 하나요?
공기 변위 피펫은 증류수로 보정되지만 실험실 작업은 증류수와 완전히 다른 특성을 가진 액체로 가득합니다. 일부 액체 특성은 피펫팅된 용적의 정확도에 영향을 미칠 수 있습니다. 전달되는 부피에 영향을 줄 수 있는 주요 특성으로는 휘발성 액체 또는 용매, 점성이 높은 액체, 따뜻하거나 차가운 액체 온도, 거품이 나는 액체 및 세제 함유 액체(표면 장력이 낮은 액체) 등이 있습니다. 역 피펫팅은 다음과 같은 까다로운 액체를 처리할 때 선택하는 방법입니다:
- 휘발성 액체 – 에탄올 및 아세톤과 같은 액체와 용제는 증기압이 높기 때문에 액체가 떨어지기 쉽습니다. 휘발성 액체를 역 피펫팅하면 남은 증발이 총 목표 용량을 분주하는 데 미치는 영향을 제거하여 드립핑을 줄일 수 있습니다. 추가로 증발하는 액체는 초과분에서 빠져나가므로 피펫팅 성능에 영향을 미치지 않습니다.
- 점성 액체 - 글리세롤 및 기타 점성 액체는 느리게 움직이는 특성과 팁 표면에 달라붙어 피펫팅이 까다로울 수 있습니다. 이는 정확도와 반복성을 방해할 수 있습니다. 역 피펫팅을 사용하면 팁에 남아있는 과도한 양보다 부착량이 줄어들고 전체 목표 용량이 분주되므로 정확도가 향상됩니다.
- 오일 - 오일을 역방향 피펫팅하면 오일이 플라스틱에 막을 형성하기 때문에 정방향 피펫팅에 비해 더 정확하고 재현성 있는 분주 작업이 가능합니다. 오일의 부착은 정방향 피펫팅의 정확도를 떨어뜨립니다. 역방향 피펫팅에서는 플라스틱에 부착된 오일이 여분의 부피에서 빠져나와 정확도가 향상됩니다.
- 발포제 - 단백질이나 세제가 포함된 용제 및 액체는 거품이 생기기 쉽습니다. 거품이 발생하는 액체를 취급할 때 정방향 피펫팅은 거품 형성을 유발할 수 있으므로 권장하지 않습니다. 역방향 피펫팅을 사용하면 원하는 양을 정확하게 분주하기 위해 블로우아웃할 필요가 없으며 거품이 쌓이는 것을 방지할 수 있습니다.
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