실시간 라이브 세포 분석을 통한 호중구 기능 측정

표면 접촉 매개 세포 이동 관련 측정. ClearView 멤브레인의 낮은 기공 밀도는 세포가 생물학적으로 관련된 표면을 가로질러 화학 유인제를 향해 이동해야 한다는 것을 보장합니다. 코팅되지 않은 ClearView 멤브레인에 시드된 호중구는 화학 유인제인 IL-8 및 fMLP 쪽으로 이동하지 못했지만(왼쪽), Matrigel 코팅 멤브레인에 시드된 호중구는 명확한 화학 접촉성 프로파일을 보였습니다(오른쪽). 이러한 데이터는 이 모델에서 인테그린 및/또는 세포 표면 수용체와 기질과의 상호작용이 호중구 화학 주성에서 중요한 역할을 한다는 것을 시사합니다. 반면, Corning^® Transwell^® 소모품을 사용한 호중구 이동 연구에서는 코팅이 필요하지 않았으며(데이터 표시되지 않음), 이는 Corning^® Transwell^® 시스템에서는 Transwell^® 필터를 통한 호중구의 활성 이동이 없음을 시사합니다.

NETosis 시각화 및 정량화. HL-60 세포를 DMSO(1.25% v/v)와 ATRA(0.1 μM)를 사용하여 호중구 유형으로 분화시켰습니다. 생성된 다핵 dHL-60 세포를 PMA를 사용하여 자극했습니다. 자극 후 ~2시간이 지나면 핵이 응축되기 시작합니다. HD 위상 및 형광 이미지는 세포질이 핵질과 혼합되어 핵이 더 이상 위상 이미지에서 보이지 않기 때문에 호중구 NETosis의 특징적인 형태를 보여줍니다. 핵 내용물은 원형질막으로 이동하여 방출됩니다.

동역학 데이터는 외부 DNA에 결합하는 Incucyte^® 세포독성 그린 시약으로 감지된 PMA 유도 신생세포증(NETosis)을 보여줍니다.

분화에 따라 식세포 기능이 결정됩니다.. HL-60 세포를 0.1 µM atRA 및 1.2% DMSO에 5일 동안 노출시켜 호중구로 분화시켰습니다. 그런 다음 세포를 시드하고 Incucyte^® pHrodo^® 그린 바이오입자를 추가했습니다. 분화된 HL-60 세포의 식세포 능력을 평가했습니다. 데이터는 순진한 세포와 분화된 HL-60 세포 사이에 현저한 차이를 보여주며, 분화된 세포는 식세포 작용을 나타내는 형광 영역이 크게 증가했습니다.

일차 호중구에 의한 식균 작용. 그런 다음 말초 혈액에서 추출한 일차 호중구를 시드하고 Incucyte^® pHrodo^® 그린 바이오입자를 추가했습니다. 1차 호중구는 식균력이 뛰어나 생체 입자를 포식하여 형광 신호가 증가합니다.

차별화 추적. 위상 이미지는 미분화된 HL-60 세포와 호중구 유사 세포로 분화된 HL-60 세포의 형태 차이를 RPMI + 10% FBS 배지에 1.25% DMSO와 1µM ATRA를 첨가하여 보여줍니다. 동역학 데이터는 HD 위상 합류에 의해 감지된 세포 증식의 차이를 보여줍니다.

PMN의 세포 모양(편심) 변화. 전혈에서 채취한 PMN을 마트리겔에 씨를 뿌린 후, 인큐사이트 FabFluor-488 표지된 CD11b 항체 및 Opti-녹색 배경 억제제와 함께 CSCL8의 농도를 증가시켜 인큐사이트 생세포 분석 시스템으로 이미징하고 위상 및 녹색 형광 이미지를 캡처했습니다. 시간 경과에 따른 세포 모양과 CD11b 발현의 변화를 정량화하는 데 사용된 Incucyte 세포별 분석 소프트웨어.