B-Cells
침습성 병원체에 대항하는 항원 특이적 면역글로불린을 생산하는 B 세포는 인체 적응면역체계의 핵심 요소입니다. B 세포의 활성과 확산이 항체가 분비되도록 하는데 있어 핵심적인 요소이긴 하지만, 과도하게 연속적인 자극이 이루어지면 B 세포 백혈병, 또는 호지킨성, 비호지킨성 림프종과 같은 림프종의 원인이 되기도 합니다.
싸토리우스 Incucyte® 실시간 세포분석 시스템을 사용하면 활성, 클러스터링, 항체 내재화 등과 같은 B 세포 핵심 기능성 뿐 아니라, 세포 사멸에 의한 B 세포암 케이스에서의 세포 사멸 평가, 면역세포 살해 분석까지 효율적으로 수행할 수 있습니다.
활성, 클러스터링
비부착 B 세포주의 증식 - B 세포주인 WIL-2NS의 증식은 위상대조 이미지 상에서 증식된 세포주를 정량 함으로써 확인할 수 있습니다. 이 때, 시작시점의 세포 컨플루언스는 배양 밀도에 비례하며, 측정된 세포 컨플루언스는 각 웰에 정해진 세포 수를 일정하게 분주하고 위상대조 알고리즘으로 정량 함으로써 밸리데이션 할 수 있습니다. 이후 세포가 투과화(permeablized)되고 세포 내 ATP 양이 결정되면 2차 판독 결과가 도출되고, 이와 같이 도출된 세포 컨플루언스(%)와 세포 수(또는 세포 내 ATP 양)간에는 매우 뚜렷한 상관관계가 나타나게 되어 있습니다.
세포 사멸 (Annexin V Green)
세포 독성 시험 이후 B 세포 사멸의 확인 - 싸토리우스 Incucyte® Annexin V Green 시약에 부형제와 캄토테신(1µM)을 각각 노출시킨 시점으로부터 24시간 이후에 WIL2-NS B 림프구 세포의 대표 이미지를 취하여 분석하였으며, Incucyte® Annexin V Green 시약에 의해 발현되는 녹색 형광점이 증가한 것으로, 캄토테신이 유도한 외부화된 포스파티딜세린의 증가가 캄토테신 노출 시간과 캄토테신 농도에 비례함을 입증할 수 있습니다.
면역세포 살해
백혈병 세포의 항체의존성세포독성(ADCC) 확인 - NucLight® Red 핵 마커를 발현하는 Ramos B 림프구의 혼합 위상 이미지와 형광 이미지를 처리되지 않은 면역세포, 그리고 대조군인 IL-2 (10 ng/ml)과 IL-12 (10 ng/mL), 실험군인 리툭산 (15 ng/mL ~ 100 ug/mL)으로 각각 처리한 면역세포에서 확인, 대조한 자료입니다. 여기서, 세포 독성은 붉은 형광점이 소실된 정도로 판단하였습니다.
항체 내재화의 정량
임상 환경에서 사용되는 리툭산의 내재화 - B 세포 유사 Raji 세포 (웰 당 30,000개 세포)를 싸토리우스 Incucyte® FabFluor로 라벨링한 리툭산 (10 ng/mL ~ 10 µg/mL)으로 처리한 후, 총 12시간에 걸쳐 20배율 HD 위상 이미지와 적색 형광 이미지를 매 30분 마다 각각 캡쳐한 결과를 바탕으로 도출한 결과로, 좌측 그래프의 세로 축은 정규화된 적색 형광부의 비율 (적색 형광부 / HD 위상부), 가로 축은 경과 시간이며 그래프 형성에 참조된 모든 데이터는 주사 전자 현미경(SEM)으로 최소 4개 이상의 웰을 관찰한 결과의 평균 값입니다.