종양침윤림프구: 연구 목적

그림 1. iQue^® 고성능 유세포분석 플랫폼을 사용한 종양침윤림프구의 시험관 내 분석 과정을 나타낸 도식

• 자극에 대한 반응으로 나타나는 면역세포 침윤을 정량화합니다.
• 침윤성 세포와 비침윤성 세포의 활성화 프로파일에서 관찰되는 표현형 차이를 파악해 종양 미세환경의 효과를 식별합니다.

그림 2. (A) 유방암 구상체에 대한 CD3 양성 PBMC 침윤의 농도에 따른 증가 

BT474(세포 4,000개/웰)의 구상체를 72시간 동안 형성시키고, PBMC(20,000개/웰)와 CD3/CD28 Dynabead를 첨가했습니다. PBMC를 CD3/CD28 Dynabead로 활성화하면 농도에 따라 CD3 T세포가 유방암 구상체로 침윤합니다. 비드 밀도가 가장 높으면(20K) PBMC가 종양 구상체를 파괴하기 시작하고, 구상체가 공격을 받으면서 침윤이 감소합니다. 각 데이터 포인트는 평균 ±SEM, n=8을 나타냅니다.

(B) 및 (C)에서는 비침윤성 세포와 비교해 침윤성 세포의 활성화 표지자 발현이 높게 나타남을 확인할 수 있습니다. 비침윤 세포는 T세포 활성화 세포 및 사이토카인 프로파일링 키트(TCA)를 사용해 채취하고 라벨링했습니다. 그 다음, 구상체를 탈리하고 침윤 세포를 라벨링했습니다. 침윤 세포는 D69(초기), CD25(중기), HLA-DR(후기) 활성화 표지자가 훨씬 높게 나타납니다. 각 데이터 포인트는 평균 ±SEM, 반복실험 8회를 나타냅니다.

그림 3. 간질세포에 의해 조절되며 세포 유형에 특이적으로 나타나는 T세포의 종양 구상체 침윤 

(A) A549, SKOV-3, 또는 BT474(세포 5,000개/웰) 구상체를 72시간 동안 형성시킨 뒤 미리 활성화(CD3/CD28 Dynabeads^®)한 PBMC(25,000개/웰)를 첨가했습니다. 데이터는 암 유형당 3명의 공여자를 나타냅니다. CD3 침윤은 암 유형에 따라 달라집니다. (B) 역시 암 유형에 따라 다르게 나타나는 CD8:CD4 비를 보면 처리 결과와 병리학적 완전반응의 가능성을 알 수 있습니다. (C) BT474를 단독으로, 또는 CCD1068SK 섬유모세포와 1:1로 혼합한 뒤 72시간 동안 구상체를 형성시키고 미리 활성화한 PBMC와 함께 시딩했습니다. 섬유모세포를 포함시키면 CD3 양성 세포의 구상체 침윤이 크게(60% 이상) 감소합니다.

여러 플레이트의 데이터를 병렬로 획득 및 분석해 빠르게 답을 얻어냅니다.

그림 4. 통합 iQue Forecyt^® 소프트웨어를 통한 신속 분석과 데이터 처리 시간 단축 

TCA 키트에는 설정만 하면 자동으로 분석이 완료되는 사전 정의된 게이팅 템플릿이 포함되어 있습니다. 게이팅은 양성 군집(녹색) 및 음성 군집(적색)을 정의해 조절할 수 있으며, 플레이트 뷰 결과는 자동으로 업데이트됩니다. 업데이트된 플레이트 뷰는 간단한 위저드 기능을 사용해 농도반응곡선으로 변환할 수 있습니다.

샘플링 속도가 빨라 반복실험 횟수를 늘릴 수 있기 때문에 가변성 높은 생물학적 특성과 관련된 문제를 줄일 수 있습니다.

그림 5. 구상체 탈리 후 iQue^® 고성능 유세포분석 플랫폼으로 CD3 세포 침윤을 정량화해 반복실험 횟수의 영향 평가 

높은 처리량을 자랑하는 iQue^®를 사용하면 획득 시간을 유지하면서 반복실험 횟수를 늘릴 수 있어 가변성 높은 생물학적 영향을 신속하게 연구할 수 있습니다.

96웰 플레이트

• 반복실험 4회(매 4회 세척, 매 4회 교반, 5초 sip) - 21분 32초
• 반복실험 8회(매 8회 세척, 매 4회 교반, 5초 sip) - 19분 08초