세포 주기를 분석하는 이유

이미지 기반 측정으로 다양한 종류의 세포에 대해 여러 차례의 세포 분열에 걸친 세포 주기를 추적할 수 있습니다. 배양기의 안정적인 배양 환경, 그리고 세포 건강과 형태를 해치지 않는 싸토리우스의 비교란성 Incucyte^® 세포 주기 렌티바이러스 시약으로 생리학적 관련성을 유지합니다.

그림 1. 자동 이미지 획득 및 통합 분석 기능으로 여러 차례의 세포 분열에 걸친 이미지 기반 세포 주기 측정 결과 생성 - Incucyte^® 세포 주기 Green/Red 렌티바이러스에 감염된 HeLa 세포는 G1에서 적색 형광을, S/G2/M에서 녹색 형광을 나타냅니다(A). 노란색 세포는 G1에서 S로 진행 중이고, 형광을 나타내지 않는 세포는 M에서 G1으로 진행 중입니다. Incucyte^® 세포별 분석법을 사용해 세포 주기를 정량화하면 황색 마스킹을 통한 정확한 마스킹(B)과 적색 및 녹색 형광을 통한 분류(C&D)가 가능합니다. 패널 E는 세포 주기 기간을 정량화한 것입니다. Incucyte^® 세포 주기 Green/Red 렌티바이러스로 핵산전달감염된 HeLa 세포를 티미딘(2.5mM)으로 24시간 동안 처리해 세포 성장을 S/G2/M 단계에서 정지시켰습니다. 성장이 재개되면 세포는 동시 분열을 겪습니다(M-G1-S/G2/M). 데이터에 따른 세포 주기의 길이는 17시간(고점 간 간격)입니다. 데이터는 웰 6개의 평균 ±SEM을 나타냅니다.

그림 2. 비교란성 시약으로 생세포 내 직접 측정 결과 생성 - Incucyte^® 세포 주기 Green/Red 렌티바이러스를 안정적으로 세포에 첨가하면 교란이 발생하지 않습니다. 옆 이미지는 부모 또는 핵산전달감염 MDA-MB-231 세포의 동일한 형태를 보여줍니다. 이미지 분석 결과 세포 성장에는 어떠한 영향도 발생하지 않았습니다.

Incucyte의 접근성 높은 토털 솔루션으로 빠른 시간 안에 정답을 찾아낼 수 있습니다. 고정과 리프팅이 필요 없는 간편한 생세포 라벨링 프로토콜을 사용해 보세요. 쉬운 특수 소프트웨어 툴을 사용해 96웰 또는 384웰 플레이트로 데이터를 자동 획득하고 분석할 수 있습니다. 또한, Incucyte^® 세포별 분석 소프트웨어 모듈은 세포 주기의 동역학적인 단계별 분포 변화를 쉽게 그래프로 작성할 수 있게 도와줍니다.

그림 3. Incucyte^® 세포 주기 렌티바이러스 퀵 가이드 - 고정과 리프팅 없이 간편한 라벨링 프로토콜을 통해 안정적으로 형광 유비퀴틴화 기반 세포 주기 지표(FUCCI)를 발현시킵니다.

Incucyte^® 세포 주기 렌티바이러스 시약과 세포별 분석 기술을 결합해 세포 주기의 각 단계를 개별적으로 추적하여 약물의 처치 효과를 평가하거나 약물로 유도한 세포 주기 억제와 세포 분화의 관련성을 연구해 보세요.

그림 4. 약물이 세포 주기의 단계별 분포에 미치는 시간에 따른 영향 측정 - 시스플라틴 또는 플루러유러실(5FU) 처리 후 HT1080 섬유육종 세포의 시간에 따른 분열 과정을 연구했습니다.  세포 주기의 각 단계는 Incucyte^® 세포 주기 Green/Red 렌티바이러스를 발현하는 HT1080 세포로 결정했습니다.  이미지는 세포별 분석 소프트웨어를 사용해 분석했고, 하위 군집은 녹색 및 적색 형광을 바탕으로 분류했습니다.  마이크로플레이트 뷰(상단) 화면은 시스플라틴과 5FU를 처리한 뒤 30시간에 걸쳐 나타난 G1 단계(적색 군집), S/G2/M 단계(녹색 군집), G1-S 단계(주황색 군집)의 농도와 시간에 따른 영향을 매개체 대조군과 비교해 나타낸 것입니다.  처리 24시간 이후 측정한 농도반응곡선(하단)을 보면 시스플라틴 처리 후 G1 단계의 세포 군집이 감소했고, S/G2/M 단계의 세포는 증가했으며, G-S 단계의 세포는 유사분열 교란 효과로 인해 감소했음을 알 수 있습니다.  5FU 처리 후에는 G1 단계의 세포 군집이 증가했고, S/G2/M 및 G1-S 단계의 세포는 DNA 합성에 대한 영향에 따라 감소했음을 알 수 있습니다. 값은 웰 6개의 평균 ±SEM을 나타냅니다.

그림 5. 세포 주기 억제가 세포의 형태 및 기능에 미치는 영향 관찰 - 안정적으로 Incucyte^® 세포 주기 Green/Red 렌티바이러스를 발현하는 THP-1 단핵구를 매개체나 100nM의 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA)로 처리한 뒤 세포별 분석 소프트웨어로 분석했습니다. PMA는 세포 분화를 유도해 세포 주기가 G1 단계에서 정지했습니다(A). 분석 결과 매개체로 처리한 대조군과 비교해 확산 부재(B), G1 단계인 적색 세포의 비율 증가, S/G2/M 단계인 녹색 세포의 감소(C)가 나타났습니다. PMA로 처리한 세포는 영역 또한 넓었는데(D), 이는 형태 변화와 함께 대식작용이 증가했음을 나타냅니다. 대식작용은 Incucyte^®용 pHrodo^® Red 세포 라벨링 키트로 라벨링한 세포자멸 Jurkat 세포의 사멸세포 제거(efferocytosis) 작용으로 측정했습니다(E).