CRISPR/Cas를 사용한 유전자 편집: 타깃 세포 분리와 단일 세포 클로닝을 위한 완벽한 툴, CellCelector

CRISPR-Cas9 유전체 편집은 유전적으로 세포를 조작하는 기술입니다. 비특이적으로 DNA를 절단하는 효소인 Cas9 핵산분해효소와 Cas9 핵산분해효소를 잘라야 할 DNA의 위치로 안내하는 합성 가이드 RNA로 세포를 핵산전달감염시킵니다. 그러면 이중가닥이 파괴되며 세포의 자체적인 복구 시스템이 활성화됩니다. 복구 템플릿을 첨가하면 상동재조합 복구(HDR)를 통해 복구 과정에서 서열을 삽입해 유전자 치환(knock-in) 돌연변이를 유도할 수 있습니다. 복구 템플릿이 없으면 비상동말단연결(NHEJ)에 의해 복구가 이루어집니다. NHEJ는 복구된 유전자의 서열을 교란하는 작은 결손이나 삽입을 초래해 유전자 적중(knock-out) 돌연변이를 발생시키는 경우가 많습니다.

그러나 CRISPR-Cas9 편집의 결과는 세포마다 다를 수 있어 세포 군집의 이질성이 발생할 수 있습니다. 많은 실험 환경에서는 세포가 균일한 유전적 배경을 가져야 합니다. 그러려면 원하는 유전자형을 가진 세포의 단일 세포 클로닝이 필요합니다.

CellCelector는 이 용도에 완벽한 솔루션입니다. Probiogen AG와의 협력으로 개발된 새로운 단일 세포 클로닝 기술, HT-NIC는 단일 세포 희석 단계를 통해 세포를 서로 완벽히 분리하여 단클론성을 제공하는 등, 제한희석법과 같은 일반적인 클로닝 기술과 비교해 다양한 장점을 가지고 있습니다. 그러나 많은 세포는 단일 세포 희석을 견디지 못하므로 세포 간 의사소통의 부재로 인해 많은 세포가 손실될 수 있습니다. 싸토리우스는 새로운 솔루션으로 이 문제를 해결했습니다. 또한, 시간과 비용을 크게 줄이고 통합 단클론성 및 생존성 입증으로 HT-NIC 기술의 장점을 살렸습니다.