검증 실험을 위한 정확한 세포 계수

그림 1. 모든 표준/맞춤형 플레이트, 튜브, 바이알로 세포를 분리할 수 있는 CellCelector

정확한 수의 세포를 분리할 수 있는 CellCelector 플랫폼 공정은 다음과 같은 순서로 이루어집니다. (i) CellCelector S200 ULA 나노웰 플레이트에 원하는 나노웰당 세포 숫자에 따른 밀도로 세포를 시딩합니다. (ii) 나노웰의 세포를 자동 스캔하고 계수합니다. (iii) 원하는 수의 세포를 포함한 나노웰을 자동 선별합니다. (iv) 조작자가 목록을 검증합니다. (v) 선택한 세포를 도착 튜브/웰까지 자동으로 옮깁니다. 이동 과정은 전체 추적됩니다(그림 2).

그림 2. 정확한 수의 세포를 자동 분리하는 CellCelector 공정

나노웰 플레이트에 단일 부유 세포를 시딩하면 세포가 랜덤으로 나노웰에 포착됩니다. 이상적으로는 표준적인 푸아송 분포에 따라 완벽하고 균일한 단일 부유 세포 시딩이 이루어집니다. 오른쪽은 나노웰에 주어진 수(k)의 세포가 랜덤으로 포착될 확률(p)을 식으로 나타낸 것입니다. λ는 나노웰당 시딩되는 세포의 평균 수를 나타냅니다. 그림 3은 다양한 밀도로 시딩한 S200 24웰 나노웰 플레이트의 이론적인 웰당 세포 분포와 실제 측정 분포를 보여줍니다. 이 방법을 사용하면 나노웰에 필요한 수의 세포가 포착될 확률을 최대화하기 위해 24웰 플레이트의 각 웰에 시딩해야 하는 세포의 수를 계산할 수 있습니다.

그림 3. 나노웰당 1개, 5개, 10개, 20개의 밀도로 시딩한 세포의 푸아송 분포 이론(선)과 실험(점) - 스캔 및 분석한 총 나노웰 수는 2,500개였습니다.

조작자가 회수할 나노웰 목록을 검증하면 시스템이 자동으로 선택된 나노웰을 채취합니다. 채취 과정에서 시스템은 품질 관리를 위해 채취 전후 이미지를 자동 저장합니다. 또한, 여러 나노웰의 내용물을 하나의 도착 튜브로 풀링하여 대량의 세포를 축적시킵니다(예: 세포 20개 = 나노웰 2개 x 세포 10개, 세포 100개 = 나노웰 5개 x 세포 20개).

그림 7. 세포 20개의 채취 예시 - 채취 전후 이미지가 자동 저장됩니다.

채취된 세포는 100% 목표 웰에 축적됩니다. 플랫바텀 플레이트나 튜브로 세포를 옮기면 CellCelector 소프트웨어를 사용해 세포를 쉽게 시각화하고 계수할 수 있습니다(그림 8).

그림 8. 광학 플랫바텀 PCR 튜브에 축적된 세포 20개의 검출