실험: 단백질 정제 및 분석

세포 배양의 목적이 단백질 정제라면, 하루 일과의 상당 부분을 단백질 여과, 정제 및 농축에 할애하게 될 것입니다. 이러한 과정은 여러 날에 걸쳐 진행되는 정제 프로토콜의 어느 단계에서든 단백질이 분해되거나 침전되거나 손실될 수 있기 때문에 매우 까다롭습니다. 적절한 도구를 선택하면 효율성을 높이고 단백질 손실 가능성을 줄일 수 있습니다.

프로토콜의 모든 단계는 단백질 수율을 감소시킬 수 있습니다.

세포 용해 과정 중 단백질 분해. 세포를 용해하고 상층액을 정제하는 데 몇 시간이 걸릴 수 있으므로, 이 과정에서 단백질은 단백질 분해 효소에 노출되어 절단되거나 완전히 분해될 수 있습니다.

농축 과정 중 건조 현상. 정제 단계를 성공적으로 마친 후 농축은 간단해 보일 수 있습니다. 그러나 적절한 예방 조치가 없다면, 시료를 너무 빠르게 또는 너무 오랫동안 원심분리하여 단백질 농축기에서 단백질을 손실할 수 있습니다.

투석 중 누출. 길고 여러 단계를 거치는 투석 과정 동안 투석 백이나 카세트에서 단백질이 누출될 수 있습니다. 카세트가 완전히 손상되지 않았더라도, 특히 여러 날에 걸쳐 진행되는 투석 과정에서는 단백질이 풀리거나, 접히거나, 응집되거나, 단백질 분해될 수 있습니다. 이러한 마지막 단계에서 단백질 손실이 발생하는 것은 매우 안타까운 일입니다.

분비 단백질을 이용하면 번거로운 세포 용해 과정을 피할 수 있습니다. 또한 정제 과정에서 세포 내 프로테아제와 접촉할 염려가 없습니다. 자연적으로 분비되는 단백질이든, HEK Freestyle이나 다른 최적화된 세포주에서 정제가 가능하도록 세포 내 단백질을 최적화했든, 분비 단백질을 다룰 때는 몇 가지 어려움에 직면하게 됩니다. 예를 들어, 비교적 많은 양의 상층액에서 손상되지 않은 세포를 분리해야 하고, 단백질 시료를 농축해야 합니다.

정확하고 신속하게 세포에 대한 심층적인 정보를 얻으세요. 변동성을 최소화하면서 생리학적으로 의미 있는 세포 정보를 제공하는 것이 목표라면, 적합한 이미징 및 분석 도구가 필수적입니다. 최고의 도구는 재현성 있고 풍부한 정보를 제공하는 분석 결과를 도출하여, 신속한 정보 획득과 비용 효율적인 결과 발표 또는 추가 실험 진행을 지원합니다.

고처리량 실시간 세포 이미징 및 분석. 세포 증식, 세포 사멸, 세포 독성 등 세포 건강 상태 측정은 후보 화합물이 세포 성장 및 생존력에 미치는 영향을 연구하는 데 필수적이며, 이를 통해 후보 화합물의 순위를 매기고, 비표적 화합물을 식별하고, 작용 메커니즘을 규명할 수 있습니다. 실시간 실시간 세포 분석은 약물 후보 물질 평가 시 최종 시점 분석법보다 상당한 이점을 제공합니다. 예를 들어, 실시간 실시간 세포 분석을 사용하면 단일 분석에서 후보 화합물의 유효 농도와 표적 변화를 유발하는 데 필요한 시간을 측정할 수 있어 후보 물질 스크리닝 파이프라인을 가속화할 수 있습니다. 실시간 실시간 세포 분석을 통해 96웰 또는 384웰 플레이트의 세포 배양 이미지를 자동으로 획득하고 분석하여 시간 경과에 따른 변화를 확인하고 농도 의존적 반응을 관찰하여 EC50 또는 IC50 값을 계산할 수 있습니다.