소교세포의 특성

• pH에 민감한 형광 프로브를 사용하여 이미지와 동영상으로 소교세포 식균작용을 관찰하세요.
• 접근 방식은 세포 사멸 세포, 세포 잔해, 단백질 응집체 및 생체 입자를 삼킬 수 있습니다.

. pHrodo^® 주황색 표지된 세포사멸 Neuro2A 세포를 삼키는 iPSC 유래 미세아교세포(Axol BioSciences)의 시간 경과 시각화.  이미지는 세포사멸 표적 세포가 미세아교세포의 세포질로 들어가는 것을 확인합니다.  Neuro2A 표적 세포는 Incucyte^®용 pHrodo^® 주황색 세포 라벨링 키트로 라벨링되었으며 스타우로스포린으로 세포사멸이 유도되었습니다.

• Incucyte^®용 pHrodo^® 주황색 세포 라벨링 염료에서 유도된 형광 신호의 자동 분할
• Incucyte^®용 pHrodo^® 주황색 세포 라벨링 키트와 접합된 세포사멸 Neuro2A 세포 또는 β 아밀로이드 응집체에 대한 식세포작용 반응의 실시간 분석
• 식세포작용 조절제의 작용 메커니즘을 평가합니다.

. pHrodo^® 표지된 세포사멸 뉴런(Neuro-2A)의 iPSC 유래 미세아교세포(Axol Bioscience) 삼림의 대표적인 형광 이미지. 표적 세포가 산성 포식체로 내재화됨에 따라 세포내 주황색 형광의 증가가 관찰되었습니다. 분할 마스크는 청록색 윤곽선으로 표시됩니다. pHrodo^® 표지된 Neuro2A 세포의 세포증식작용은 세포 수에 따라 다릅니다. Aβ 응집체로 표지된 pHrodo^®의 식세포작용은 시간 및 농도 의존적이었습니다.

. BV-2 이펙터 세포 효능 세포사멸 Neuro2A 세포(왼쪽 패널) 또는 E. coli 생체 입자(중간 패널).  Cytochalasin D(상단 패널)는 efferocytosis와 phagocytosis 모두의 농도 의존적 ​​억제를 유도하여 각각 0.16 μM 및 1.5 μM의 IC 값을 생성합니다.  대조적으로, aVb3 및 aVb5 인테그린의 억제제인 ​​실렌기타이드(cilengitide)는 세포작용을 선택적으로 약화시키는 반면(IC 값 0.17μM), 테스트된 최고 농도(100μM)에서는 식세포작용에 거의 또는 전혀 영향을 미치지 않습니다. 이러한 데이터는 efferocytosis에 필요한 세포 상호 작용에서 인테그린의 역할을 뒷받침하지만 박테리아의 식균 작용에서는 그렇지 않습니다.

• 이미지와 동영상으로 소교세포 주화성을 관찰하세요
• Incucyte^® Clearview 96웰 화학주성 플레이트당 1000~5000개의 세포만 활용하며, 희귀하고 값비싼 일차 세포 집단의 낮은 세포 사용량에 이상적입니다.

. Incucyte^® Clearview 플레이트에 있는 iPSC 유래 소교세포(CDI) 이미지. 모공은 파란색 원으로 표시됩니다(왼쪽). Microglia는 보체 성분 5a(C5a)를 향한 시간 및 농도 의존적 ​​이동을 보여줍니다.

• 단핵구를 소교세포로 분화하는 동안 형태의 변화를 추적합니다.

. 소교세포의 다양한 모습을 주목하세요.  12일 후 빨간색 화살표는 가지 모양의 세포를 강조 표시하는 반면 노란색 화살표는 더 큰 편평한 아메바 세포를 표시합니다. 세포에 14일 동안 2일마다 분화 배지를 공급하고, 6시간마다 20x 배율로 위상 이미지를 획득했습니다.

• 교란되지 않는 Incucyte^® Kinase Akt Green/Red Lentivirus를 사용하여 신경염증성 소교세포 모델에서 Akt 활동의 실시간 변화를 평가합니다.

HMC3 미세글리아 세포는 세포내 위치가 인산화에 의존하는 유전적으로 인코딩된 형광 키나제 전좌 리포터인 Incucyte^® 키나제 녹색/적색 렌티바이러스로 표지되었습니다. 96웰 플레이트에 시딩된 세포를 Akt(MK2206), 상류 PI3K(LY294002 및 Wortmannin) 및 하류 mTOR(PP242)를 표적으로 하는 억제제로 처리했습니다. Incucyte^® Live-Cell Analysis System을 사용하여 HD 위상차 및 형광 이미지를 획득하고 Akt 활동의 지표인 핵 전좌 비율(NTR)을 통합 소프트웨어를 사용하여 정량화했습니다.

플레이트 뷰는 4개 화합물 모두 농도에 따른 Akt 활성 억제를 나타내는 24시간 동안의 NTR 반응을 표시하며 이는 NTR 감소로 표시됩니다. PI3K 억제제 LY294002 및 Wortmannin은 빠른 억제를 보인 후 기본 Akt 활성 수준으로 회복되는 반면, 알로스테릭 Akt 억제제 MK2206 및 mTOR 억제제 PP242는 지속적인 방식으로 Akt 활성을 약화시킵니다. 처리 후 6시간에 데이터를 NTR에 대한 농도-반응 곡선으로 변환하면 MK2206이 가장 강력한 효과가 있음을 나타냅니다. 녹색 형광 채널의 이미지는 처리되지 않은(비히클) 세포의 형광이 세포질과 핵 모두에 걸쳐 분포되어 있음을 보여 주지만 MK2206 처리된 세포는 핵에서 뚜렷한 위치를 보여 Akt 억제를 나타냅니다.