미세아교세포의 특성 분석

• 싸토리우스 미세아교세포의 식세포 작용을 pH 감지 형광 프로브를 사용하여 이미지와 동영상으로 관찰하세요.
• 이 접근법은 사멸세포, 세포 잔해, 단백질 응집체 및 생물학적 입자의 포식에 적용 가능합니다.

iPSC 유래 미세아교세포(Axol BioSciences)가 pHrodo^® 오렌지로 표지된 사멸 Neuro2A 세포를 포식하는 시간경과 시각화. 이미지는 사멸 표적 세포가 미세아교세포의 세포질에 진입함을 확인합니다. Neuro2A 표적 세포는 Incucyte^® 용 pHrodo^® 오렌지 세포 표지 키트로 표지되었으며, 스타우로스포린으로 사멸이 유도되었습니다.

• 싸토리우스의 pHrodo® 오렌지 세포 염색 염료로 유도된 형광 신호의 자동화된 분절
• Incucyte®용 pHrodo® 오렌지 세포 염색 키트와 함께 사멸성 Neuro2A 세포 또는 베타 아밀로이드 응집체에 대한 식세포 반응의 실시간 분석
• 식세포 조절제의 작용 메커니즘 평가

. 악솔 바이오사이언스의 iPSC 유래 미세아교세포의 대표적인 형광 이미지로, pHrodo^® 표지된 사멸성 신경세포(Neuro-2A)를 포식하는 모습입니다. 표적 세포가 산성 포식소체 내부로 내재화됨에 따라 세포 내부의 주황색 형광이 증가하는 것이 관찰되었으며, 분할 마스크는 청록색 윤곽선으로 표시됩니다. pHrodo^® 표지된 Neuro2A 세포의 사멸세포 제거는 세포 수에 따라 달라집니다. pHrodo^® 표지된 Aβ 응집체의 식균 작용은 시간과 농도에 의존적입니다.

. BV-2 효과 세포는 사멸성 Neuro2A 세포(왼쪽 패널) 또는 E. coli 생물 입자(중간 패널)를 사멸세포 제거합니다. 사이토칼라신 D(상단 패널)는 사멸세포 제거와 식균 작용 모두를 농도 의존적으로 억제하여, 각각 0.16 µM과 1.5 µM의 IC₅₀ 값을 나타냅니다. 대조적으로, aVb3 및 aVb5 인테그린 억제제인 실렌기티드는 사멸세포 제거를 선택적으로 감소시키며(IC₅₀ 값 0.17 µM), 테스트된 최고 농도(100 µM)에서 식균 작용에는 거의 또는 전혀 영향을 미치지 않습니다. 이러한 데이터는 인테그린이 사멸세포 제거에 필요한 세포 상호작용에 중요한 역할을 하지만, 박테리아 식균 작용에는 그렇지 않음을 뒷받침합니다.

• 이미지와 동영상으로 미세아교세포 주화성 관찰
• 싸토리우스의 Incucyte^® Clearview 96-웰 주화성 플레이트에서 희귀하고 고가의 1차 세포 집단을 위해 1000~5000개의 세포만 사용하세요

Incucyte^® Clearview 플레이트의 iPSC 유래 미세아교세포(CDI) 이미지. 구멍은 파란색으로 표시되어 있습니다(왼쪽). 미세아교세포는 시간과 농도에 따라 보체 성분 5a(C5a)를 향해 이동합니다.

• 단핵구에서 미세아교세포로의 분화 과정 중 형태학적 변화 추적

미세아교세포의 다양한 외관을 관찰하세요. 12일 후, 빨간색 화살표는 가지 모양의 세포를, 노란색 화살표는 더 큰 편평한 아메보이드 세포를 강조합니다. 세포는 14일 동안 2일마다 분화 배지로 배양되었으며, 위상 이미지는 6시간마다 20배 확대로 획득되었습니다.

• 신경염증성 미세아교세포 모델에서 비침습적 Incucyte^® 키나아제 Akt 그린/레드 렌티바이러스를 사용하여 Akt 활성의 실시간 변화를 평가합니다.

HMC3 미세아교세포는 Incucyte^® 키나아제 그린/레드 렌티바이러스로 표지되었으며, 이는 인산화에 따라 세포 내 위치가 달라지는 유전자 조작된 형광 키나아제 이동 보고자입니다. 96웰 플레이트에 파종된 세포는 Akt(MK2206)와 상위 PI3K(LY294002 및 워트만닌), 하위 mTOR(PP242)를 표적으로 하는 억제제로 처리되었습니다. HD 위상차 및 형광 이미지는 Incucyte^® 생세포 분석 시스템을 사용하여 획득되었으며, Akt 활성의 지표인 핵 이동 비율(NTR)이 통합 소프트웨어를 사용하여 정량화되었습니다.

플레이트 보기는 24시간 동안의 NTR 반응을 보여주며, 4개의 화합물 모두 NTR 감소로 나타나는 농도 의존적 Akt 활성 억제를 보여줍니다. PI3K 억제제 LY294002와 워트만닌은 빠른 억제 후 기본 Akt 활성 수준으로 회복되었으며, 동종 Akt 억제제 MK2206과 mTOR 억제제 PP242는 지속적인 방식으로 Akt 활성을 감소시킵니다. 처리 후 6시간의 NTR에 대한 농도-반응 곡선으로 데이터를 변환하면 MK2206이 가장 강력한 효과를 가진다는 것을 나타냅니다. 녹색 형광 채널의 이미지는 처리되지 않은(비히클) 세포의 형광이 세포질과 핵에 걸쳐 분포되어 있지만, MK2206으로 처리된 세포는 핵에 뚜렷한 위치를 보여 Akt 억제를 나타냅니다.