Sartorius사의 고처리량 스크리닝(HTS) 세포계측법

크기가 0.2~150 마이크로미터인 모든 부유 입자 또는 세포는 분석에 적합합니다. 고형 조직에서 분리한 세포는 분석 전에 분리 과정을 거쳐야 합니다.

추가 정보를 얻기 위해 세포에 형광 분자를 표지할 수 있습니다. 구체적으로, 형광색소로 표지된 항체를 세포 표면의 단백질(항원)에 결합시킬 수 있습니다. 세포에 항원이 많으면 많은 수의 형광색소 표지 항체가 결합하여 강한 형광 신호를 생성합니다. 항원이 없거나 적은 세포는 약한 형광 신호를 생성합니다.

형광 표지자(예: 형광 표지자가 접합된 항체)는 관심 있는 에피토프를 직접 표적화하여 해당 에피토프의 생물학적 및 생화학적 특성을 측정할 수 있게 합니다. 형광 표지자는 세포 집단, 세포 표면 수용체 또는 세포 내 표적의 식별 및 정량화, 세포 분류, 면역 표현형 분석 및 세포 사멸 연구를 포함한 광범위한 응용 분야에서 유용하게 사용됩니다.

유세포 분석 실험에서, 분석 지점을 통과하여 검출되는 모든 세포는 각각 별개의 사건으로 계산됩니다. 검출되는 각 유형의 빛(전방 산란광, 측방 산란광, 그리고 각기 다른 파장의 형광 방출광)은 고유한 채널을 갖습니다.

각 이벤트에 대한 데이터는 각 채널에서 검출된 빛의 신호 강도를 나타내기 위해 독립적으로 그래프로 표시됩니다. 이 데이터는 다양한 방식으로 시각적으로 표현될 수 있습니다. 유세포 분석에서 가장 일반적으로 사용되는 데이터 그래프 유형에는 히스토그램, 점 그림 및 등고선 다이어그램이 있습니다.

히스토그램

히스토그램은 일반적으로 두 개 이상의 집단의 형광 강도를 비교하는 데 사용됩니다.

점 그래프

점 산점도는 2개 또는 3개의 매개변수를 동시에 비교하는 그림으로, 각 변수는 하나의 점(또는 반점)으로 표시됩니다. 점 산점도는 여러 변수 간의 관계를 한눈에 보여주는 그림이며, 매개변수는 산란 및 형광 신호의 어떤 조합이든 될 수 있습니다.

등고선 플롯

등고선 도표는 수집된 사건 수와 관계없이 개체군의 상대적 빈도를 보여줍니다. 등고선 도표는 유사한 수의 세포를 나타내는 연결된 선으로 확률 등고선을 표시합니다. 개체군 주위에는 동심원이 형성되므로 밀도가 높을수록 등고선 도표에서 동심원이 더 가깝게 위치합니다.

Raji 세포(iQue^® 세포 증식 및 인코딩(V/Blue) 염료로 밝게 표지됨), Ramos 세포(인코더 염료로 희미하게 표지됨) 및 Jurkat 세포(표지되지 않음)를 CDC 분석을 위해 웰당 5K개씩 혼합하고 히스토그램에 표시된 것처럼 인코더 염료의 형광 강도를 기준으로 분리했습니다. (iQue Forecyt^®에서 미리 정의된 게이트의 도트 플롯 예시로, 인간 T 세포 하위 집단의 자동 표현형 분석이 가능합니다.) (CD14 양성 집단의 명확한 게이팅을 보여주는 등고선 플롯.)

유세포 분석법은 면역학, 분자생물학, 세균학, 바이러스학, 암 생물학 및 감염병 모니터링 분야에서 활용되는 강력한 도구입니다. 유세포 분석법에서 가장 널리 사용되는 응용 분야는 면역표현형 분석입니다. 이는 유세포 분석법의 고유한 특성을 이용하여 세포 표면 표지자, 사이토카인 분석, 세포 건강 상태 등 다양한 매개변수를 혼합된 세포 집단에서 동시에 분석하는 것입니다.