신경종양학 개요

SH-SY5Y 교모세포종 세포의 단일 배양을 96웰 플레이트에 5,000개의 세포/웰로 파종하고 3일 후 mTOR 억제제 PP242(50 – 0.21 µM)로 처리했으며, Incucyte^®Annexin V NIR(0.5%; 싸토리우스)이 포함된 배지에서 진행했습니다. 실시간으로 Incucyte^® 생세포 분석 시스템을 사용하여 위상 및 형광 이미지를 캡처했습니다. 대표 이미지는 처리 72시간 후 PP242 처리(16.7 µM)와 용매를 비교하여 보여줍니다. 시간 경과 및 약물 반응 곡선은 위상 컨플루언스의 농도 의존적 감소와 세포 사멸의 상응하는 증가(pIC50 4.8)를 보여줍니다. 데이터는 평균 ± 표준오차(3회 반복)로 제시됩니다.

신경모세포종(SH-SY5Y)과 교모세포종(U87-MG) 세포를 각각 96웰 ULA 원형 바닥 플레이트에 독립적으로 접종(웰당 5,000개 세포)하고 단일 구형체를 형성하도록 허용했습니다(3일). 구형체 형성과 성장을 Incucyte에서 최대 10일 동안 모니터링했습니다. 형성 후 7일의 대표적인 밝은 시야 이미지와 사용된 분할 마스크(파란색 윤곽)를 보여줍니다(A). 형성 후 시간 경과를 보면 구형체의 성장 속도와 면적이 다양하며, SH-SY5Y가 U87에 비해 약간 더 큰 면적(각각 6.6 x 10⁵ µm² vs 5.0 x 10⁵ µm²)을 가집니다(B). 단일 구형체의 이심률 정량화 결과, U87 구형체는 형성 후 둥글고 조밀하며 낮은 이심률을 유지(1일차 0.33 vs 7일차 0.31)하는 반면, SH-SY5Y 구형체는 더 높은 이심률 값을 보이며 증식에 따라 조밀성이 다소 감소합니다(1일차 0.55 vs 7일차 0.78). 데이터는 평균 ± 표준오차, 12회 반복 측정(C)으로 제시됩니다.

Incucyte^® Nuclight-Orange를 안정적으로 발현하는 U87-MG 세포를 96웰 ULA 플레이트에 다양한 밀도(1,000 - 7,500 세포/웰)로 파종하고, Incucyte^®에서 3일 동안 형성 과정을 모니터링했습니다 (A). 오렌지 형광 측정법을 사용하여 파종의 높은 견고성과 밀도 의존적 구상체 면적 차이를 관찰했습니다 (B). 데이터는 평균 ± 표준오차로 제시되었으며, CV% 값이 표시되었습니다. 형성 후 단일 구상체 파종의 대표적인 명시야 및 오렌지 형광 이미지 (7,500 세포/웰, 3일)와 사용된 오렌지 분할 마스크 (빨간색 윤곽) (C)를 보여줍니다.

글리오블라스토마(U87-MG) 세포를 96웰 ULA 원형 바닥 플레이트에 웰당 5,000개씩 파종하고, 인큐사이트에서 10일 동안 모니터링하면서 3일 동안 스페로이드를 형성하도록 했습니다. 스페로이드 형성 후, DNA 억제제인 시스플라틴(0.82 - 200 µM) 또는 이중 mTOR 억제제 PP242(0.21 - 50 µM)로 처리하고 인큐사이트 아넥신 V NIR(A)을 사용했습니다. 시간 경과 그래프는 시스플라틴(200 µM)과 PP242(50 µM)의 최고 농도에서 스페로이드 밝은 영역의 변화를 비교한 것입니다(B). 시간 경과 데이터와 약물 반응 곡선에 따르면 PP242는 강한 세포 정지 효과를 보이며 고농도에서만 세포 자멸을 유발하는 반면, 시스플라틴은 더 높은 수준의 세포 독성을 나타냅니다(C). 데이터는 평균 ± 표준 오차로 제시되었습니다.

U87-MG 세포를 ULA 원형 바닥 96웰 플레이트에 well당 2,500개의 세포로 파종하고 3일 동안 스페로이드를 형성하도록 했습니다. 스페로이드는 항전이 화합물의 연속 희석액으로 처리한 후 침습을 유도하기 위해 마트리젤(4.5 mg/mL)에 포매했습니다(최대 10일). Incucyte 마이크로플레이트 vessel 뷰는 처리 후 3일에 스페로이드 침습에 대한 처리 효과를 보여줍니다(A). 사이토칼라신 D(2.34 nM – 300 nM)와 PP242(0.01 µM – 30 µM)는 농도 의존적으로 U87-MG 스페로이드 침습을 억제했으며, 블레비스타틴(0.01 µM – 30 µM)은 거의 영향을 미치지 않았습니다(B).