신경종양학 개요

. SH-SY5Y 교모세포종 세포의 단일 배양물을 96웰 플레이트(5,000개 세포/웰)에 시딩하고 3일 후 Incucyte^®Annexin V NIR(0.5%, Sartorius)이 포함된 배지에서 mTOR 억제제 PP242(50 – 0.21μM)로 처리했습니다. Incucyte^® Live-Cell Analysis System을 사용하여 위상 및 형광 이미지를 실시간으로 캡처했습니다. 처리 후 72시간에 PP242 처리(16.7μM)를 비히클과 비교한 대표적인 이미지입니다. 시간 경과 및 약물 반응 곡선은 농도에 따른 위상 합류의 감소와 이에 상응하는 세포 사멸의 증가를 보여줍니다(pIC50 4.8). 데이터는 평균 +/- SEM(3회 반복)으로 표시됩니다.

신경모세포종(SH-SY5Y) 및 교모세포종(U87-MG) 세포를 96웰 ULA 둥근 바닥 플레이트(5,000개 세포/웰)에 독립적으로 시딩하고 단일 회전타원체를 형성하도록 허용했습니다(3일). 회전타원체 형성과 성장은 Incucyte에서 최대 10일 동안 모니터링되었습니다. 형성 후 7일에 사용된 대표적인 명시야 이미지 및 분할 마스크(파란색 윤곽선)가 표시됩니다(A). 형성 후 시간 코스는 스페로이드가 성장 속도와 면적이 다양하다는 것을 보여 주며, SH-SY5Y는 U87에 비해 약간 더 큰 면적을 가지며 각각 6.6 x105 μm² 대 5.0 x105 μm²입니다(B). 단일 스페로이드 이심률의 정량화는 일단 형성된 U87 스페로이드가 둥글고 콤팩트하며 낮은 이심률(1일차 0.33 대 7일차 0.31)을 유지하는 반면, SH-SY5Y 스페로이드는 더 높은 이심률 값을 가지며 시간이 지남에 따라 증식으로 인해 일부 소형화 손실을 나타냅니다(1일차 0.55 대 7일차 0.78). 데이터는 평균 +/- SEM, 12회 반복(C)으로 표시됩니다.

Incucyte^® Nuclight-Orange를 안정적으로 발현하는 U87-MG 세포를 96웰 ULA 플레이트에 다양한 밀도(1,000~7,500개 세포/웰)로 시딩하고 Incucyte^®(A)에서 3일 동안 형성을 모니터링했습니다. 주황색 형광 측정법(B)을 사용하여 회전 타원체 영역의 높은 파종 견고성과 밀도 의존적 ​​차이가 관찰되었습니다. 데이터는 CV% 값이 표시되는 평균 +/- SEM으로 표시됩니다. 대표적인 브라이트필드 및 오렌지 형광 이미지는 형성(7,500개 세포/웰, 3d) 및 사용된 오렌지 분할 마스크(빨간색 윤곽선)(C)에 따라 시드된 단일 회전 타원체의 이미지입니다.

교모세포종(U87-MG) 세포를 96웰 ULA 둥근 바닥 플레이트(5,000개 세포/웰)에 시딩하고 플레이트를 Incucyte에서 10일 동안 모니터링하면서 회전타원체를 형성하도록 허용했습니다(3일). 형성 후 회전타원체는 Incucyte Annexin V NIR(A)이 있는 상태에서 DNA 억제제 Cisplatin(0.82 – 200 µM) 또는 이중 mTOR 억제제 PP242(0.21 – 50 µM)로 처리되었습니다. 시간 경과에 따라 차량(B)에 비해 시스플라틴(200 μM) 및 PP242(50 μM)의 최고 농도에 대한 회전타원체 브라이트필드 영역의 변화가 표시됩니다. 시간 경과 데이터 및 약물 반응 곡선은 PP242가 강력한 세포 증식 억제 효과를 나타내고 더 높은 농도에서만 세포 사멸을 일으키는 반면 Cisplatin은 더 높은 수준의 세포 독성을 나타냄을 시사합니다(C). 데이터는 평균 +/- SEM으로 표시됩니다.

U87-MG 세포를 ULA 둥근 바닥 96웰 플레이트(2,500개 세포/웰)에 시딩하고 회전타원체를 형성하도록 허용했습니다(3일). 그런 다음 회전 타원체를 항전이성 화합물의 연속 희석으로 처리하고 Matrigel(4.5mg/mL)에 삽입하여 침입을 유도했습니다(최대 10일). Incucyte 마이크로플레이트 혈관 뷰는 스페로이드 침입(전체 스페로이드 영역, 노란색 윤곽선 마스크) 3d 치료 후(A)에 대한 치료 효과를 보여줍니다. Cytochalasin D(2.34 nM – 300 nM) 및 PP242(0.01 µM – 30 µM)는 U87-MG 회전 타원체 침범의 농도 의존적 ​​억제를 일으켰으나 Blebbistatin(0.01 µM – 30 µM)(B)에서는 거의 효과가 관찰되지 않았습니다.