신경교 특성화

성상교세포, 소교세포, 희돌기교세포와 같은 신경교세포는 중추신경계(CNS)에서 항상성 유지, 시냅스 생성에 적극적으로 참여, 뉴런 보호 및 지원과 같은 여러 가지 중요한 역할을 합니다. 최근에는 건강과 질병에서 신경교의 역할을 이해해야 할 필요성이 중추적이었으며, 신경교 중심 관점이 증가한 새로운 연구 도구와 접근법이 개발되었습니다. 이제 교세포 배양은 기본 및 중개 연구를 위한 중요한 도구로 인식되고 있으며, 일차 배양 또는 iPSC의 사용은 인간 질병 조사에 더 관련성이 높은 것으로 간주됩니다. 그러나 모델은 주로 종말점 형태학적 및 면역조직화학적 방법으로 제한됩니다. 교세포 연구는 교세포 성장, 형태, 기능 및 궁극적으로 CNS 질병에서의 역할에 대한 통찰력을 높이기 위한 기술 도구 및 변환 모델의 개발을 통해 이익을 얻을 것입니다.

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백서: 살아있는 세포 분석을 통한 Astroglia 모델 특성화

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다양한 뇌 영역의 동적 생물학적 모니터링을 위해 운동학적, 높은 처리량 측정을 사용합니다.

피질, 해마 및 소뇌 성상교세포를 96웰 플레이트에 웰당 2,000개 세포로 시딩했습니다. 증식 및 형태를 10일에 걸쳐 모니터링했습니다. 이미지는 30-40% 합류(2일, 피질 또는 4일, 해마 및 소뇌)의 배양을 보여주며, 여기서 분기된 형태학적 표현형이 정량화됩니다(분홍색 및 갈색 마스크). 시간 경과 프로파일은 뇌 영역 간의 성장을 비교하고 대뇌 피질의 성상 세포가 가장 빠른 성장 속도를 가지고 있음을 보여줍니다. Glia 파급효과는 소뇌 성상교세포와 초과 근무를 비교하여 96시간(68.3±1.8)으로 가장 높은 파급효과를 산출하고 해마(50.6±1.5) 및 피질(12.3±0.7)이 뒤따릅니다. 각 웰의 최대 파급 효과도 표시됩니다(변동성 플롯). 평균 ± SEM(24개 반복)으로 표시된 데이터와 이미지는 10배 배율로 캡처되었습니다.

소뇌 성상교세포에 대한 이오노마이신의 약리학적 효과

소뇌 성상교세포를 96웰 플레이트에 10,000개 세포/웰로 시딩하고 세포 건강 시약 Incucyte^® Annexin V NIR(Sartorius; 0.5%)이 보충된 배지에서 칼슘 이오노포어 이오노마이신(0.01 – 10 μM)으로 처리했습니다. 증식 및 세포 건강을 10일에 걸쳐 모니터링했습니다. 시간 경과에 따라 이오노마이신이 세포 성장에 미치는 운동 효과가 나타납니다. 농도-반응 곡선은 이오노마이신이 세포 성장과 건강에 미치는 영향을 비교하며, 이오노마이신의 독성 효과를 암시하는 것으로 관찰된 합류의 농도 의존적 감소 및 세포사멸의 증가를 비교합니다. 대표적인 이미지는 24시간 동안 성장(단계) 및 세포 건강(NIR)에 미치는 영향을 보여줍니다. 평균 ± SEM(3회 반복)으로 표시된 데이터와 이미지는 10배 배율로 캡처되었습니다.

복잡한 조절을 풀기 위해 교란되지 않는 시약을 사용하여 세포 주기 진행, 조절 및 세포 생존력을 모니터링합니다.

Incucyte^® 세포 주기 녹색|오렌지색 렌티바이러스를 발현하는 T98G 성상교세포를 96웰 플레이트에 웰당 4,000개 세포로 시딩했습니다. 세포 건강 시약 Incucyte^® Annexin V NIR(0.5%, Sartorius)이 있는 상태에서 단백질 포스파타제 억제제 OKA(50 – 0.14nM)로 세포를 처리하여 세포 주기 정지와 세포 생존력 모두에 미치는 영향을 확인했습니다. Incucyte^® Cell-by-Cell 분석 모듈을 사용하여 이미지를 10X에서 획득하여 세포를 개별적으로 분할할 수 있으며, 처리 후 2일 동안 차량 및 OKA에 대해 표시되는 대표적인 위상 및/또는 형광(녹색, 주황색, NIR) 위상 비디오를 사용합니다. S|G2|M(녹색) 또는 G1(주황색)의 세포 집단과 비히클 또는 OKA에 대한 Annexin V 양성 세포(청록색)의 집단을 보여주는 시간 경과에 따르면 OKA(5.56 nM)는 16시간 이내에 S|G2|M에서 정지를 일으켰으며 이는 세포사멸 세포 수가 증가하기 시작한 약 36시간까지 안정적으로 유지되었습니다. 농도-반응 곡선은 다양한 단계의 집단에 대한 20시간의 OKA의 빠른 효능과 48시간의 세포 생존력(Annexin V 양성)에 대한 지연 효과를 나타냅니다. 데이터는 평균 ± SEM으로 표시되며 6회 반복됩니다.

완전 자동화된 분석을 통해 실시간 세포 이동 측정값을 얻어 부상 후 실시간을 평가합니다.

일차(Cortex, Hippocampus, Cerebellum) 또는 iPSC(CDI, Fujifilm) 성상교세포를 Incucyte^® ImagelockT96-well 플레이트에 30,000개 세포/웰로 시딩하고 Incucyte^® Woundmaker를 사용하여 정확하고 재현 가능한 상처를 만들었습니다. Incucyte^® 라이브 셀 분석 시스템을 사용하여 이미지를 획득했습니다. 단계 비디오는 초기 스크래치 상처(파란색 마스크)와 폐쇄 중 상처(밝은 노란색 마스크)에 대해 분할이 표시된 3일 동안 부상 후 해마 배양의 이동을 보여주고 세포의 형태학적 평가를 허용합니다. 시간 경과 프로파일은 소뇌 성상교세포가 가장 빠르게 이동하는 다양한 뇌 영역의 상처 폐쇄 속도를 비교합니다. 약리학적 연구를 위해, 대뇌 피질의 성상교세포는 상처가 생기기 전에 이오노마이신(10 – 0.01 µM)과 함께 배양되었으며 농도 의존적 이동 억제가 관찰되었습니다(IC50 = 1.67 µM). 데이터는 평균 ± SEM으로 표시되며 24회 반복됩니다.

완전 자동화된 분석을 통해 실시간으로 교세포 주화성을 정량화합니다.

T98G-WT 세포를 PDL(0.1mg/mL)로 코팅된 Incuycte^® ClearView 96-Well Chemotaxis 플레이트의 상단 챔버에 1,000개 세포/웰의 밀도로 플레이팅했습니다. 세포가 부착되면, 소 태아 혈청(FBS; 10 - 0.12%)을 화학유인물질로서 바닥 챔버에 첨가했습니다. 이미지와 각 마스크는 추가 48시간 후 멤브레인의 상단과 하단을 나타냅니다. 48시간의 시간 경과 및 막대 차트는 FBS 수준이 증가함에 따라 기공을 통한 화학주성 이동의 농도 의존적 증가를 나타냅니다(EC50 = 3%). 데이터는 평균 ± SEM, 10회 반복으로 표시됩니다.

성상 세포 지원 기능을 평가하기 위해 단일 또는 공동 배양에서 관련 세포 모델, iPSC 유래 또는 1차 세포를 사용하여 신경교 지원 기능을 연구합니다.

인간 iPSC 유래 뉴런은 성상교세포(뉴런의 경우 25K, 성상교세포의 경우 10K 세포/웰, Talisman Therapeutics)와 함께 단일 또는 공동 배양으로 시드되었습니다. 뉴런을 Incucyte^® Neurolight 또는 Neuroburst Orange(Sartorius)에 감염시켜 각각 신경돌기 발달을 평가하거나 시간 경과에 따른 자발적인 신경 활동을 모니터링했습니다. 시간 경과에 따르면 공동 배양은 단일 배양에 비해 더 큰 신경돌기 분기 및 파생물을 개발했습니다(NL: 147 ± 2.5 대 72 ± 2.5 mm/mm2, 각각 228h). 흔적은 시야 내 모든 활성 개체의 칼슘 변동을 나타냅니다. 막대 그래프는 23일 동안 활성 개체의 정량화, 상관 관계(연결성), 버스트 속도 및 기간을 보여줍니다. 공동 배양은 활성 개체를 증가시키고 단일 배양에 비해 오래 지속되는 칼슘 이벤트의 빈도를 줄여 네트워크 안정화를 나타내는 반면 연결은 영향을 받지 않습니다. 결과는 뉴런이 향상된 형태학적 표현형을 표시하고 보다 기능적으로 성숙한 네트워크를 개발하는 공동 배양 내에서 iPSC 성상교세포의 지원 기능을 제안합니다. 평균 ± SEM, 24회 반복.

주문 정보

제품	수량	고양이. 아니요.
Incucyte^® 화학주성 분석 소프트웨어 모듈	각	9600-001
Incucyte^® Clearview 96웰 화학주성 플레이트	각	4582
Incucyte^® 스크래치 상처 세포 마이그레이션 소프트웨어 모듈	각	9600-0012
Incucyte^® 스크래치 상처 세포 마이그레이션 키트	각	4493
Incucyte^® 스크래치 상처 세포 침입 액세서리	각	4444
Incucyte^® Imagelock 96웰 플레이트	각	4444
Incucyte^® 세포주기 적색/녹색 렌티바이러스 시약	1바이알(0.2mL)	4779
Incucyte^® 세포주기 녹색/주황색 렌티바이러스 시약	1바이알(0.2mL)1바이알(0.2mL)	4809
Incucyte^® 세포별 분석 소프트웨어 모듈	1 모듈	9600-0031