글리아 특성화

중추신경계(CNS)에서 별아교세포, 미세아교세포, 희소돌기아교세포와 같은 신경교세포는 항상성 유지, 시냅스 형성에 능동적 참여, 신경세포 보호 및 지원 등 여러 중요한 역할을 수행합니다. 최근에는 건강과 질병에서 신경교세포의 역할을 이해해야 할 필요성이 핵심적으로 대두되었으며, 신경교세포 중심의 관점에서 새로운 연구 도구와 접근법이 개발되고 있습니다. 현재 신경교세포 배양은 기초 및 중개 연구의 중요한 도구로 인정되고 있으며, 특히 원발 세포주 또는 유도만능줄기세포(iPSCs) 사용이 인간 질병 연구에 더욱 적합한 것으로 간주됩니다. 그러나 모델은 주로 최종 형태학적 및 면역조직화학적 방법으로 제한되어 있습니다. 신경교세포 연구는 기술적 도구와 중개 모델 개발을 통해 신경교세포의 성장, 형태, 기능, 그리고 궁극적으로 중추신경계 질환에서의 역할에 대한 통찰력을 높일 수 있을 것입니다.

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백서: 생세포 분석을 통한 별아교세포 모델 특성화

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다양한 뇌 영역에서 동적 생물학적 현상을 모니터링하기 위한 동역학적, 고처리량 측정 사용

피질, 해마 및 소뇌 별아교세포를 96웰 플레이트에 2,000세포/웰로 파종했습니다. 증식과 형태를 10일 동안 모니터링했습니다. 이미지는 30-40% 밀집도(피질은 2일, 해마와 소뇌는 4일)의 배양을 보여주며, 가지 모양의 형태학적 표현형을 정량화했습니다(분홍색 및 갈색 마스크). 시간에 따른 프로필은 뇌 영역 간 성장을 비교하고 피질 별아교세포가 가장 빠른 성장률을 가짐을 보여줍니다. 별아교세포의 가지 형성을 시간에 따라 비교한 결과, 소뇌 별아교세포가 96시간에 가장 높은 가지 형성(68.3 ± 1.8)을 보였고, 그 다음으로 해마(50.6 ± 1.5), 피질(12.3 ± 0.7) 순이었습니다. 각 웰의 최대 가지 형성도 표시되었습니다(변동성 그래프). 데이터는 평균 ± 표준오차(24 반복)로 제시되었으며, 이미지는 10배 확대로 캡처되었습니다.

이오노마이신의 소뇌 별아교세포에 대한 약리학적 효과

소뇌 별아교세포를 96웰 플레이트에 10,000개의 세포/웰로 파종하고, 세포 건강 시약 Incucyte^® 아넥신 V NIR (싸토리우스; 0.5%)이 보충된 배지에서 칼슘 이오노포어 이오노마이신(0.01 – 10 µM)으로 처리했습니다. 증식과 세포 건강을 10일 동안 모니터링했습니다. 시간 경과 그래프는 이오노마이신이 세포 성장에 미치는 동역학적 효과를 보여줍니다. 농도-반응 곡선은 이오노마이신이 세포 성장과 건강에 미치는 영향을 비교하며, 농도 의존적인 밀집도 감소와 세포자멸사 증가가 관찰되어 이오노마이신의 독성 효과를 시사합니다. 대표 이미지는 24시간 후 성장(위상)과 세포 건강(NIR)에 대한 효과를 보여줍니다. 데이터는 평균 ± 표준오차(3회 반복)로 제시되었으며, 이미지는 10배 확대로 캡처되었습니다.

복잡한 조절을 해명하기 위해 비교란성 시약을 사용하여 세포 주기 진행, 조절 및 세포 생존력 모니터링

T98G 별아교세포에서 Incucyte^® 세포 주기 녹색|주황색 렌티바이러스를 발현하는 세포를 96웰 플레이트에 4,000개의 세포/웰로 파종했습니다. 세포는 세포 건강 시약 Incucyte^® 아넥신 V NIR (0.5%; 싸토리우스)의 존재 하에 단백질 인산분해효소 억제제 OKA (50 – 0.14 nM)로 처리했습니다. 이를 통해 세포 주기 정지와 세포 생존력에 대한 효과를 확인할 수 있었습니다. 이미지는 Incucyte^® 세포별 분석 모듈을 사용하여 10배율로 획득했으며, 이를 통해 개별 세포를 분할할 수 있었고, 비히클 및 OKA에 대한 대표적인 위상 및/또는 형광(녹색, 주황색, NIR) 위상 비디오를 처리 후 2일 동안 보여주었습니다. 시간 경과 곡선은 비히클 또는 OKA에 대한 S|G2|M (녹색) 또는 G1 (주황색) 세포 집단과 아넥신 V 양성 세포(청록색) 집단을 보여주었으며, OKA (5.56 nM)가 16시간 내에 S|G2|M에서 정지를 유발했고 이는 약 36시간까지 안정적으로 유지되다가 그 이후 세포 사멸 세포 수가 증가하기 시작했음을 나타냈습니다. 농도-반응 곡선은 20시간에 OKA의 다양한 단계 집단에 대한 빠른 효능과 48시간에 세포 생존력(아넥신 V 양성)에 대한 지연된 효과를 나타냈습니다. 데이터는 평균 ± 표준오차, 6회 반복으로 제시되었습니다.

완전 자동화된 분석로 실시간 세포 이동 측정을 통해 후유증을 실시간으로 평가하세요

주요 (대뇌 피질, 해마, 소뇌) 또는 iPSC (CDI, 후지필름) 별아교세포를 Incucyte^® ImagelockT96-웰 플레이트에 30,000개의 세포/웰로 파종하고, Incucyte^® 상처 메이커로 정확하고 재현 가능한 상처를 만들었습니다. Incucyte^® 생세포 분석 시스템을 사용하여 이미지를 획득했습니다. 위상 비디오는 3일 동안 해마 배양의 상처 후 이동을 보여주며, 초기 상처 부위(파란색 마스크)와 상처 치유 과정(연한 노란색 마스크)의 분절을 보여주고 세포의 형태학적 평가를 가능하게 합니다. 시간 경과 프로필은 서로 다른 뇌 영역의 상처 치유 속도를 비교하며, 소뇌 별아교세포가 가장 빠르게 이동합니다. 약리학적 연구에서는 피질 별아교세포를 상처 내기 전에 이오노마이신(10 – 0.01 µM)과 함께 배양하여 농도 의존적 이동 억제를 관찰했습니다(IC50 = 1.67 µM). 데이터는 평균 ± 표준오차, 24회 반복으로 제시됩니다.

완전 자동화된 분석으로 실시간 신경교세포 주화성 정량화

T98G-WT 세포를 PDL(0.1 mg/mL)이 코팅된 싸토리우스 ClearView 96-웰 주화성 플레이트의 상부 챔버에 1,000세포/웰의 밀도로 배양했습니다. 세포가 부착된 후, 주화성 인자로 하부 챔버에 태아 소 혈청(FBS; 10 - 0.12%)을 추가했습니다. 이미지와 해당 마스크는 첨가 후 48시간의 막 상단과 하단을 대표합니다. 48시간의 시간 경과 및 막대 차트는 FBS 수준 증가에 따른 주화성 이동의 농도 의존적 증가를 나타냅니다(EC50 = 3%). 데이터는 평균 ± 표준오차, 10회 반복으로 제시됩니다.

단일 또는 공동 배양에서 관련 세포 모델, iPSC 유래 또는 일차 세포를 사용하여 별아교세포의 지지 기능 연구

인간 iPSC 유래 신경세포를 단일 또는 별아교세포와 공동 배양했습니다 (신경세포 25K, 별아교세포 10K 세포/웰; Talisman Therapeutics). 신경세포는 신경돌기 발달을 평가하거나 자발적 신경 활동을 시간에 따라 모니터링하기 위해 Incucyte^® Neurolight 또는 Neuroburst Orange (싸토리우스)로 감염시켰습니다. 시간 경과 분석 결과, 공동 배양된 세포는 단일 배양된 세포에 비해 더 많은 신경돌기 분지와 성장을 보였습니다 (NL: 228시간 기준 각각 147 ± 2.5 대 72 ± 2.5 mm/mm2). 추적 그래프는 시야 내 모든 활성 객체의 칼슘 변동을 나타냅니다. 막대 그래프는 23일 차 활성 객체, 상관관계(연결성), 버스트 속도 및 지속 시간의 정량화를 보여줍니다. 공동 배양된 세포는 활성 객체가 증가하고 단일 배양된 세포에 비해 더 긴 지속 시간의 칼슘 사건 빈도가 감소하여 네트워크 안정화를 나타내며, 연결성은 영향을 받지 않았습니다. 결과는 공동 배양에서 iPSC 별아교세포의 지지 기능을 제안하며, 신경세포는 향상된 형태학적 표현형을 보이고 더 기능적으로 성숙한 네트워크를 발달시킵니다. 평균 ± 표준오차, 24회 반복.

주문 정보

제품	수량	카탈로그 번호
인쿠사이트^® 화학주성 분석 소프트웨어 모듈	각	9600-001
싸토리우스 인큐사이트^® 클리어뷰 96-웰 화학주성 플레이트	각	4582
싸토리우스 인큐사이트^® 스크래치 상처 세포 이동 소프트웨어 모듈	각	9600-0012
인쿠사이트 스크래치 상처 세포 이동 키트	각	4493
인쿠사이트 스크래치 상처 세포 침범 액세서리	각	4444
인쿠사이트^® 이미지락 96-웰 플레이트	각	4444
인쿠사이트^® 세포 주기 레드/그린 렌티바이러스 시약	1 바이알 (0.2 mL)	4779
인쿠사이트 세포 주기 그린/오렌지 렌티바이러스 시약	1 바이알 (0.2 mL)1 바이알 (0.2 mL)	4809
싸토리우스 인큐사이트^® 세포별 분석 소프트웨어 모듈	1 모듈	9600-0031