실시간 생세포 분석을 통한 B세포 적응 면역의 이해
B 세포는 적응 면역 시스템의 중심에 있으며, 침입성 병원체에 대항하는 항원 특이적 면역글로불린 생산을 담당합니다. B 세포 활성화와 증식은 항체 분비에 중요하지만, 지속적인 자극은 호지킨 림프종 및 비호지킨 림프종과 같은 B 세포 백혈병의 생존과 성장으로 이어질 수 있습니다.
Incucyte® 생세포 분석 시스템은 B 세포의 주요 기능을 평가하는 데 사용되었으며, 활성화 및 클러스터링, 항체 내재화 분석, 그리고 세포 사멸 및 면역 세포 제거 분석을 통한 B 세포 암의 평가를 포함합니다.
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면역학 탐구
B세포주인 WIL-2NS 세포의 증식을 위상차 이미지로 정량화했습니다. 예상대로 초기 밀집도는 파종 밀도에 따라 달라집니다. 알려진 양의 세포를 각 웰에 파종하고 침착을 허용한 후 위상차 알고리즘을 사용하여 정량화함으로써 밀집도 측정을 검증했습니다. 추가로, 세포를 투과처리하고 ATP 함량을 측정하여 2차 판독값을 제공했습니다. 밀집도 비율과 세포 수 또는 ATP 측정 사이에 매우 강한 상관관계가 관찰되었습니다.
24시간 후 차량 또는 캄프토테신(1 µM)에 노출된 후 WIL2-NS B 림프종 세포의 대표 이미지로, Incucyte® 아넥신 V 그린 시약이 존재하는 상태입니다. 시간 경과는 Incucyte® 아넥신 V 그린 시약에서 나오는 녹색 형광의 증가를 보여주며, 캄프토테신에 의해 유도된 외부화된 포스파티딜세린의 시간 및 농도 의존적 증가를 나타냅니다.
NucLight® 레드 핵 마커를 발현하는 라모스 B 림프구의 혼합 위상 및 형광 이미지. 면역 세포가 없거나 IL-2 (10 ng/ml) & IL-12 (10 ng/mL) 또는 리툭산 (15 ng/mL – 100 ug/mL)이 존재하는 상태. 세포독성은 적색 형광 강도의 감소를 기반으로 정량화되었습니다.
라지(B 세포 유사) 세포(30K/well)를 인큐사이트® FabFluor 표지된 리툭산(10 ng/mL ~ 10 µg/mL)으로 처리했습니다. HD 위상 및 적색 형광 이미지를 12시간 동안 20배 대물렌즈를 사용하여 30분마다 캡처했습니다. 모든 데이터는 최소 4개 웰의 평균 ± SEM으로 표시되며, 시간 경과 데이터는 정규화된 적색 영역(적색 영역/위상 영역)으로 나타냈습니다.
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