실시간 생세포 분석을 통한 호중구 기능 측정

ClearView 멤브레인의 낮은 구멍 밀도는 세포가 생물학적으로 관련된 표면을 통해 화학주성 물질을 향해 이동해야 함을 보장합니다. 코팅되지 않은 ClearView 멤브레인에 파종된 호중구는 IL-8 및 fMLP를 향해 이동할 수 없었습니다(왼쪽). 그러나 Matrigel로 코팅된 멤브레인에서는 명확한 화학주성 프로파일을 보였습니다(오른쪽). 이러한 데이터는 기질과의 인테그린 및/또는 세포 표면 수용체 상호작용이 이 모델에서 호중구 화학주성에 핵심 역할을 한다는 것을 시사합니다. 대조적으로, Corning Transwell 소모품을 사용한 호중구 이동 연구에서는 코팅이 필요하지 않았습니다(데이터 미표시). 이는 Corning Transwell 시스템에서 호중구의 활발한 이동이 부재함을 나타냅니다.

HL-60 세포를 DMSO (1.25% v/v)와 ATRA (0.1 μM)를 사용하여 호중구 유형으로 분화시켰습니다. 결과적으로 생성된 다핵 dHL-60 세포를 PMA로 자극했습니다. 자극 후 약 2시간에 핵이 탈응축되기 시작합니다. HD 위상 및 형광 이미지는 세포질이 핵질과 혼합되면서 위상 이미지에서 핵이 더 이상 보이지 않는 호중구 NETosis의 특징적인 형태를 보여줍니다. 핵 내용물은 세포막으로 이동하여 방출됩니다.

운동학적 데이터는 인큐사이트^® 사이토톡스 그린 시약의 외부 DNA 결합으로 감지된 PMA 유도 호중구 세포사(NETosis)를 보여줍니다.

. HL-60 세포를 0.1 µM atRA와 1.2% DMSO에 5일 동안 노출시켜 호중구로 분화시켰습니다. 세포를 배양접시에 파종한 후 Incucyte^® pHrodo^® Green 바이오입자를 추가했습니다. 분화된 HL-60 세포의 식균 능력을 평가했습니다. 데이터는 미분화 및 분화된 HL-60 세포 간의 현저한 차이를 보여주며, 분화된 세포는 식균 작용을 나타내는 상당한 형광 영역 증가를 보였습니다.

. 말초혈액에서 추출한 일차 호중구를 배양접시에 파종한 후 Incucyte^® pHrodo^® Green 바이오입자를 추가했습니다. 일차 호중구는 고도로 식균 능력이 있어 바이오입자를 섭취하여 형광 신호가 증가합니다.

. 위상차 이미지는 RPMI + 10% FBS 배지에 1.25% DMSO와 1 µM ATRA를 첨가하여 호중구 유사 세포로 분화된 미분화 HL-60 세포와 HL-60 세포의 형태학적 차이를 보여줍니다. 동역학 데이터는 HD 위상 컨플루언스로 검출된 세포 증식의 차이를 나타냅니다.

. Opti-green 배경 억제제와 함께 Incucyte FabFluor-488로 표지된 CD11b 항체를 사용하여 CSCL8 농도를 증가시키며 매트리젤에 전혈 PMNs를 파종하고, Incucyte 생세포 분석 시스템에서 위상 및 녹색 형광 이미지를 캡처했습니다. Incucyte 세포별 분석 소프트웨어를 사용하여 시간에 따른 세포 형태와 CD11b 발현 변화를 정량화했습니다.