세포주 특성 분석

세포 은행 과정은 연구 세포 은행(RCB)을 마스터 세포 은행(MCB) 제조에 도입하면서 시작됩니다.

이를 위해 RCB는 최소한 무균, 마이코플라스마 없음 및 정체성 보장이 인증되어야 합니다. 또한 제조업체는 잠재적인 바이러스 오염에 대한 광범위한 세포 기반 시험관 내 검사를 요청할 수 있습니다.

RCB 출시를 신속하게 하기 위해 폴리머라아제 연쇄 반응(PCR)을 통한 신속한 검사, 중간 시험관 내 전략, DNA 바코딩을 통한 정체성 검사 등의 옵션이 있습니다.

작업 세포 은행(WCB)은 마스터 세포 은행(MCB)으로부터 준비됩니다. WCB의 생물안전성 시험 요구사항은 MCB에서 수행된 시험 수준에 따라 달라집니다.

MCB에서 이미 광범위한 특성 분석이 완료된 경우, WCB에 대한 최소한의 시험만 필요합니다. 규제 당국에 따라 이는 일반적으로 정체성, 안정성 및 미생물에 의한 오염 평가로 제한됩니다. 인정된 위험이 있는 경우에만 바이러스 시험이 권장됩니다.

유전적 안정성을 특성화하기 위해, 형질전환 유전자는 Southern blotting, mRNA 및/또는 형질전환 유전자 복제 수 염기서열 분석과 같은 기술을 사용하여 평가됩니다. 정체성은 DNA 바코딩을 사용하여 측정될 수 있습니다. 미생물의 존재는 무균, 마이코플라스마 및 마이코박테리움 분석을 사용하여 결정됩니다.

다른 종에서 유래한 작업 세포 은행을 특성화하는 데 사용되는 테스트 방법론은 다음과 같습니다:

• 무균성 검사
• 마이코플라스마 검사
• 시험관 내 분석

유전적 안정성 분석은 다음 방법을 사용하여 요청될 수 있습니다:

• 핵산 염기서열 분석
• 서던 블롯
• 정체성 테스트
• 유전자 복사 수

생산 종료 세포 은행(EoPCB)은 때때로 생산 후 세포 은행(PPCB) 또는 체외 배양 한계 세포로 언급됩니다. 이러한 세포들은 생산 시스템을 검증하기 위해 테스트됩니다. 이를 통해 세포가 안정적이며 시스템 내에 오염 문제가 없음을 확인합니다.

EoPCB의 샘플링 시기는 제품에 따라 다르며 사례별로 수행됩니다.

단백질 기반 치료제 제조에 사용되는 세포주의 경우, 테스트 요구 사항은 두 가지입니다. 안정성 테스트와 오염 테스트(생물안전성)를 포함합니다. 바이러스 백신 또는 바이러스 벡터에 사용되는 세포주의 테스트 체계는 MCB 생성 프로세스에 따라 동일한 유전적 안정성 평가를 요구하지 않을 수 있습니다.

EoPBC에 대한 요구 사항은 마스터 세포 뱅크와 매우 유사합니다. EoPCB는 유전적 안정성 테스트와 MCB와의 직접 비교가 필요합니다. 사용되는 테스트에는 Southern blotting, mRNA 시퀀싱 또는 트랜스진 복사 수를 사용한 트랜스진의 유전적 분석이 포함됩니다. 잠재적 오염 물질을 테스트하기 위해 미생물(무균성 및 마이코플라스마), 우발적 바이러스(체외 및 체내, 투과 전자 현미경) 및 프로세스에 따라 결정되는 특정 바이러스 테스트를 포함한 다양한 방법이 사용됩니다.

서로 다른 종에서 유래한 EoPBC를 특성화하는 데 사용된 테스트 방법론에는 다음이 포함됩니다:

• 무균성 검사
• 마이코플라스마 검사
• 생체 내 테스트
• 생체 외 테스트
• 레트로바이러스 테스트
• 소 및 돼지 분석
• 전자 현미경
• 종 특이적 분석

싸토리우스에서 제공하는 유전적 안정성 분석에는 다음이 포함됩니다:

• 핵산 염기서열 분석
• 서던 블롯
• 정체성 테스트
• 유전자 복사 수