세포주 특성 분석

세포은행 운영 과정은 연구용 세포은행(RCB)을 도입하여 마스터 세포은행(MCB)을 구축하는 것으로 시작됩니다.

이를 위해서는 RCB가 최소한 무균 상태이고, 마이코플라스마가 없으며, 신원 확인이 보장된다는 인증을 받아야 합니다. 또한 제조업체는 잠재적인 바이러스 오염 물질에 대한 광범위한 세포 기반 체외 검사를 요청할 수 있습니다.

RCB 출시를 신속하게 진행하기 위한 방안으로는 중합효소 연쇄 반응(PCR)을 이용한 신속 검사, 중간 판독을 위한 체외 분석 전략, DNA 바코딩을 이용한 신원 확인 검사 등이 있습니다.

작업용 세포 뱅크(WCB)는 MCB로부터 준비됩니다. WCB의 생물안전성 시험 요건은 MCB에 대해 수행된 시험 수준에 따라 달라집니다.

MCB에 대한 광범위한 특성 분석이 이미 완료된 경우, WCB에 대해서는 최소한의 검사만 필요합니다. 규제 기관에 따라 다르지만, 일반적으로 검사 범위는 균주의 정체성, 안정성 및 미생물 오염 여부 평가로 제한됩니다. 바이러스 검사는 위험이 확인된 경우에만 권장됩니다.

유전적 안정성을 특성화하기 위해, 형질전환 유전자는 서던 블롯팅, mRNA 시퀀싱 및/또는 형질전환 유전자 복제 수 분석과 같은 기술을 사용하여 평가됩니다. 유전자의 동일성은 DNA 바코딩을 통해 측정할 수 있습니다. 미생물의 존재 여부는 무균성 검사, 마이코플라스마 검사 및 마이코박테리움 검사를 통해 확인합니다.

서로 다른 종에서 유래한 기능성 세포 은행의 특성을 파악하는 데 사용되는 테스트 방법은 다음과 같습니다.

• 무균 검사
• 마이코플라스마 검사
• 시험관 내 분석

유전자 안정성 검사는 다음 방법을 사용하여 요청할 수 있습니다.

• 핵산 서열 분석
• 서던 블롯
• 신원 확인 테스트
• 유전자 복제 수

생산 종료 세포 뱅크(EoPCB)는 때때로 생산 후 세포 뱅크(PPCB) 또는 시험관 내 배양 한계에 도달한 세포라고도 합니다. 이러한 세포는 생산 시스템의 유효성을 검증하기 위해 사용됩니다. 이를 통해 세포의 안정성과 시스템 내 오염 문제를 방지할 수 있습니다.

EoPCB 샘플링 시기는 제품마다 다르며, 개별 사례에 따라 결정됩니다.

단백질 기반 치료제 제조에 사용되는 세포주의 경우, 안정성 시험과 오염(생물안전성) 시험, 이렇게 두 가지 시험 요건이 있습니다. 바이러스 백신이나 바이러스 벡터에 사용되는 세포주의 경우, MCB 생성 과정에 따라 동일한 유전적 안정성 평가가 요구되지 않을 수도 있습니다.

EoPBC에 대한 요구 사항은 마스터 세포 은행(MCB)의 요구 사항과 매우 유사합니다. EoPBC는 유전적 안정성 테스트와 MCB와의 직접 비교를 필요로 합니다. 사용되는 테스트에는 서던 블롯팅, mRNA 시퀀싱 또는 형질전환 유전자 복제 수 분석과 같은 기술을 이용한 형질전환 유전자의 유전적 분석이 포함됩니다. 잠재적 오염 물질을 검사하기 위해 다양한 방법이 사용되는데, 여기에는 미생물(무균성 및 마이코플라스마), 외래 바이러스(시험관 내 및 생체 내, 투과 전자 현미경) 및 특정 바이러스 테스트가 포함되며, 이러한 검사는 해당 공정에 따라 결정됩니다.

서로 다른 종에서 유래한 EoPBC의 특성을 파악하는 데 사용되는 시험 방법은 다음과 같습니다.

• 무균 검사
• 마이코플라스마 검사
• 생체 내 시험
• 시험관내 테스트
• 레트로바이러스 검사
• 소 및 돼지 검사
• 전자 현미경
• 종 특이적 분석법

싸토리우스에서 제공하는 유전자 안정성 분석은 다음과 같습니다.

• 핵산 서열 분석
• 서던 블롯
• 신원 확인 테스트
• 유전자 복제 수