NK 세포 기능 및 표현형 평가

^® 미처리 또는 항CD3(10ng/ml) 및 IL-2(10ng/ml) 또는 Herceptin(0.08 – 50ug/mL)이 존재하는 면역 세포가 있는 SKOV-3 Incucyte^® NucLight Red 회전타원체의 혼합상 및 형광 이미지. 세포 독성은 적색 형광 강도를 기준으로 정량화되었습니다. 데이터는 활성화된 T 세포 집단과 허셉틴에 의해 유발된 세포 세포독성에 의한 종양 회전타원체의 파괴를 보여줍니다.

자연살해세포 매개-항체 의존성 세포독성은 농도 의존적 ​​표적 세포 사멸, 그랜자임 생산을 유도합니다.

암호화된 Raji 종양 세포(20K/웰)를 두 명의 별도 기증자로부터 얻은 PBMC(200K/웰)와 공동 배양했습니다. PBMC를 세 가지 항-CD20 항체, 즉 Ab-1(IgG1), Ab-2(IgG1) 또는 음성 대조군 Ab-3(IgA2) 중 하나와 함께 배양했습니다. 농도 범위는 10ug/mL~0.128ng/mL였습니다.

4시간째에 10μL 샘플을 분석하여 Human NK Cell Killing Kit와 iQue^® 3을 사용하여 종양 세포 사멸을 평가했습니다. Granzyme A도 iQue^® Human NK Cell Companion Kit를 사용하여 측정했습니다. (A, B) 2명의 기증자에 의한 표적 세포 사멸은 항체에 대한 차별적인 반응을 보여줍니다. (C,D) 그랜자임 A 생산은 농도와 기증자에 따라 달라졌습니다. (E,F) NK 세포에서 CD16의 검출은 항-CD20 항체의 농도가 증가함에 따라 감소했습니다.  이는 CD16 배출 또는 CD20 항체의 경쟁으로 인한 것일 수 있습니다.

암호화된 K562 종양 세포(20K/웰)를 1:1 또는 5:1의 이펙터:표적 비율로 200 U/mL IL-2 및 100 ng/mL IL-15(활성화된 NK 세포)를 함유한 배지 단독(비활성화 NK 세포) 또는 배지에서 16-18시간 동안 배양된 강화된(음성 선택) 인간 NK 세포와 함께 배양했습니다.  4시간 및 24시간에 10μL 샘플을 분석하여 iQue^® Human NK Cell Killing Kit 및 iQue^® 3을 사용하여 종양 세포 사멸을 평가했습니다. (A) 4시간 동안 비활성 또는 사이토카인 활성화 NK 세포와 공동 배양한 후 표적 세포 생존성을 묘사하는 히스토그램. (B,C) (B) 4시간 또는 (C) 24시간 동안 비활성 또는 사이토카인 활성화 NK 세포와 종양 세포의 공동 배양 후 표적 세포 사멸 퍼센트에 대한 요약입니다.

암호화된 K562 종양 세포(20K/웰)를 5:1의 이펙터:표적 비율로 200 U/mL IL-2 및 100 ng/mL IL-15(활성화된 NK 세포)를 함유한 배지 단독(비활성화 NK 세포) 또는 배지에서 16-18시간 동안 배양된 강화된(음성 선택) 인간 NK 세포와 공동 배양했습니다. 24시간의 공동 배양 후 iQue^® Human NK Cell Killing Kit 및 iQue^® HTS 플랫폼을 사용하여 10μL 샘플을 제거하고 분석했습니다. (A) 활성화 마커인 CD69 및 CD25의 발현. (B) IFNg 생산 및 Granzyme B 분비. (C) iQue^® 인간 NK 세포 컴패니언 키트와 iQue^® 인간 NK 세포 사멸 키트를 결합하여 추가 사이토카인을 병렬로 평가했습니다.  NK = 자연 살해 세포. T = 표적 K562 종양 세포.

IL-2 및 IL-15를 사용한 활성화는 Granzyme B 및 CCL5(RANTES)와 같은 다중 이펙터 단백질의 활성화 마커 발현 및 분비를 증가시켰습니다. 이러한 효과는 NK 세포를 표적 세포와 함께 배양할 때 더욱 강화되었습니다.