실험: 단백질 정제 및 분석

세포 배양의 목적이 단백질 정제라면, 하루 중 상당 부분을 단백질을 여과하고, 정제하고, 농축하는 데 보낼 것입니다. 이러한 단계는 여러 날에 걸친 정제 프로토콜 중 어느 단계에서든 단백질이 분해되거나, 침전되거나, 또는 다른 방식으로 손실될 수 있기 때문에 까다롭습니다. 적절한 도구를 선택하면 효율성을 높이고 단백질 손실 가능성을 줄일 수 있습니다.

프로토콜의 모든 단계가 단백질 수율을 감소시킬 수 있습니다:

세포 용해 중 단백질 분해. 세포를 용해하고 상층액을 명확히 하는 데 몇 시간이 걸릴 수 있으므로, 단백질이 절단하거나 완전히 분해할 수 있는 단백질분해효소에 노출됩니다.

농축 중 건조. 성공적인 정제 단계 후에는 농축이 사소해 보일 수 있습니다. 하지만 내장된 예방 조치가 없으면, 샘플을 너무 빠르거나 오래 원심분리하여 단백질 농축기에서 단백질을 잃을 수 있습니다.

투석 중 누출. 긴 다단계 투석 과정에서 단백질이 투석 백이나 카세트에서 누출될 수 있습니다. 카세트가 완전히 온전하더라도 단백질은 변성, 재접힘, 응집 또는 단백질분해를 겪을 수 있으며, 특히 다일 프로토콜에서 그렇습니다. 이 최종 단계에서 단백질을 잃는 것은 특히 좌절스러울 수 있습니다.

분비 단백질로 작업하면 복잡한 세포 용해 과정을 피할 수 있습니다. 또한 단백질이 정제 과정에서 세포 내 단백질 분해 효소를 만나지 않습니다. 단백질이 자연적으로 분비되거나 HEK Freestyle 또는 다른 최적화된 세포주에서 정제할 수 있도록 세포 내 단백질을 최적화했는지 여부와 관계없이, 분비 단백질로 작업할 경우 다른 종류의 도전에 직면하게 됩니다. 예를 들어, 온전한 세포를 상대적으로 큰 부피의 상층액에서 분리해야 하며 단백질 샘플을 농축해야 합니다.

정확하고 빠르게 세포 통찰력을 얻으세요. 생리학적으로 관련성 있는 세포 정보를 변동성 낮게 제공하는 것이 목표라면, 적절한 이미징 및 분석 도구가 필요합니다. 최상의 도구는 재현 가능하고 정보가 풍부한 분석을 제공하여 신속하게 통찰력을 얻고 비용 효율적으로 결과를 게시하거나 추가 분석을 진행할 수 있도록 도와줍니다.

고처리량 생세포 이미징 및 분석. 후보 화합물이 세포 성장 및 생존에 미치는 영향을 연구할 때 증식, 세포자멸사 및 세포독성과 같은 세포 건강 측정은 필수적이며, 이를 통해 후보 화합물의 순위를 매기고, 비표적 화합물을 식별하며, 작용 메커니즘을 결정하는 데 도움을 줄 수 있다. 실시간, 생세포 분석은 약물 후보를 평가할 때 종료점 분석에 비해 상당한 장점이 있다. 예를 들어, 실시간, 생세포 분석을 사용하면 단일 분석에서 후보 화합물의 유효 농도와 표적을 방해하는 데 필요한 시간을 결정할 수 있어 후보 스크리닝 파이프라인을 가속화할 수 있다. 실시간, 생세포 분석을 통해 96- 또는 384-웰 플레이트의 세포 배양 이미지를 자동으로 획득하고 분석하여 시간 경과를 생성하고 EC50 또는 IC50를 계산하기 위한 농도 의존적 반응을 확인할 수 있다.