항체 의존성 세포 식균 작용

항체 의존성 세포 식작용

항체 의존성 세포 식작용(ADCP)은 종양 세포를 단클론 항체(mAbs)로 표적화하여 식세포 면역 세포에 의해 체내에서 제거되도록 하는 면역학적 제거 메커니즘입니다. 이는 종양 세포 특이적 단클론 항체를 항암 치료제로 사용하기에 매력적인 후보로 만들며, 트라스투주맙과 같은 여러 치료법이 이미 승인되었습니다. 이는 Her-2 양성 유방암의 일반적인 치료법입니다.

이러한 치료제의 작용 메커니즘(MoA)은 대식세포 또는 단핵구의 Fc 수용체(FcR)와 결합하는 능력과 종양 세포에서 과발현된 항원에 특이적으로 결합하는 능력에 의존합니다. 항체 개발 중에는 다양한 MoA(ADCP 포함)를 유도하는 분자의 능력을 특성화하는 것이 필수적이며, 이를 위해 치료 잠재력을 나타내는 분석을 사용합니다. ADCP를 측정하는 전통적인 기술은 종종:

저처리량 획득 장비를 사용하여 대량의 샘플 볼륨이 필요한 경우 (예: 기존 유세포 분석)
프로토콜 최적화, 고정 및 반복적인 세척과 같은 단계가 필요하여 노동 집약적이고 시간이 많이 소요됨
정성적 판독만 제공하거나 수동 데이터 분석이 필요함
ADCP 신호의 진정한 정량화보다는 아티팩트 측정
유전자 조작된 리포터 세포주에 의존

iQue^® 항체 의존성 세포 탐식 애플리케이션은 iQue^® 인간 항체 의존성 세포 탐식 키트를 활용하여, 간소화되고 간결한 워크플로우를 통해 CD14+ 일차 효과 세포와 생존 표적 세포의 공동 위치 정량화를 통해 ADCP를 고처리량으로 측정합니다. 대상 항체의 ADCP에 대한 약리학적 효과를 즉시 판독하기 위해 해당 기능의 힘을 활용하세요.

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개념

Figure 1. iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식균 작용 키트 검사 원리 설명.

iQue^® 증식 및 인코딩(B/Green) 염료로 표지된 표적 세포를 96- 또는 384-웰 플레이트에서 검사 항체와 함께 배양한 후 비표지 효과 세포(PBMCs 또는 단핵구 또는 대식세포의 농축된 집단)를 추가합니다.

iQue^® 세포막 무결성(R/Red) 염료를 사용하여 생존 세포와 사멸 세포를 분리합니다. ADCP는 표적 세포 인코더에 양성인 생존 CD14+ 효과 세포의 비율로 정량화됩니다.

이 키트에 사용된 형광 색소의 조합은 iQue^® BR 및 VBR 구성과 모두 호환됩니다.

정량적 데이터 획득

약리학적 분석에 적합한 ADCP의 재현 가능하고 구체적인 측정값 생성

그림 2. iQue Forecyt^®를 사용한 효율적인 데이터 분석은 자동 계산을 통해 약물 효능 순위 결정 허용

B/Green 표지된 Ramos 세포(2.5K/well)를 PBMCs(20:1 효과세포 대 표적세포 비율)와 함께 96웰 플레이트에 파종했습니다. ADCP는 다양한 Rituximab mAb 아이소타입(IgG1, IgG1NQ(비당화), IgG2, IgG4 포함)으로 자극되었습니다. 세포는 iQue^® 항체 의존성 세포 탐식 키트로 표지되었으며, ADCP는 iQue^® 3을 사용하여 분석되었습니다. ADCP(%)는 생존 집단에서 CD14 및 B/Green Encoder+ 세포의 %로 정의됩니다.

1. 인비보젠: 세포 생물학 연구를 위한 시약 및 도구

고처리량 분석 수행

96 또는 384웰 플레이트에서 ADCP의 신속한 정량을 위한 검증된 시약을 사용하여 발견을 촉진하세요.

그림 3. 단일 384웰 분석 플레이트에서 여러 E__PH_0__ 비율로 다수의 공여자로부터 PBMC의 ADCP 반응 분석.

비부착성 Ramos 표적 세포(2.5K/웰)를 Truxima(CD20-IgG1)와 PBMC와 함께 5:1, 10:1, 20:1 효과세포-대-표적 비율로 배양했습니다. 항체가 없는 웰은 음성 대조군으로 포함되었습니다. ADCP는 iQue^® 인간 항체 의존성 세포 탐식 키트와 iQue^® 3을 사용하여 평가되었습니다.

공여자 1과 2의 ADCP(%) 열 지도 및 농도-반응 곡선

생리학적으로 관련된 세포 모델 분석

다양한 부착성 또는 비부착성 표적 세포에서 주요 효과 세포에 의한 ADCP 평가.

그림 4. 유연한 공동 배양 모델을 사용하여 치료용 약물의 식세포 효과 구분하기

B/그린으로 인코딩된 부착성 AU565 세포(10K/well)를 트라스투주맙(Her2-IgG1 단클론항체)과 분리된 단핵구(5:1 효과세포 대 표적세포 비율)와 함께 배양했습니다. 세포는 iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식작용 키트로 표지되었으며 iQue^®3으로 분석되었습니다.

히스토그램의 접시 뷰는 Forecyt 디스플레이에서 트라스투주맙 농도에 따른 ADCP 이벤트(CD14+ B/Green+ 생세포) 증가를 보여줍니다.

트라스투주맙에 대한 ADCP(%) 증가를 대조 항체(BGal-IgG1)와 비교

생산성 극대화

실시간 데이터 분석 및 혁신적인 시각화 도구로 응답 시간 단축

그림 5a. 프리셋 게이팅 템플릿은 iQue^®HTS 플랫폼에 의해 샘플이 획득됨에 따라 자동으로 채워집니다.

iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식균 작용 키트와 함께 제공되는 템플릿은 iQue Forecyt^®에 가져와 CD14+ 단핵구와 공동 위치한 B/Green 인코딩 대상 세포의 즉각적인 정량화를 제공합니다. 단일 세포 게이트 생략과 간단한 3단계 게이팅 전략을 결합하여 진정한 ADCP 신호를 측정합니다.

그림 5b. iQue Forecyt^® 소프트웨어에 의한 자동화된 데이터 분석은 즉각적인 ADCP 판독값을 제공합니다.

게이팅 템플릿이 적용되면, 사용하기 쉬운 iQue Forecyt^® 분석 플랫폼을 통해 약리학적 분석을 수행할 수 있으며, 결과를 간단하고 명확한 형식으로 동시에 제시할 수 있습니다. 데이터 시각화의 예는 다음과 같습니다:

CD14 양성 집단을 명확하게 게이팅한 등고선 플롯, Ramos 또는 Raji 표적 세포를 가진 PBMCs에 의한 Truxima에 대한 ADCP (%) 히트맵. (B)의 데이터를 농도 반응 곡선으로 표현. iQue Forecyt^®에서 직접 내보낸 EC₅₀ 값은 Ramos의 경우 29.1, Raji의 경우 24.8 ng/mL입니다.

그림 6. iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식작용 키트의 따라하기 쉬운 프로토콜.

주문 정보

플랫폼: iQue^® 3/iQue^® 스크리너 플러스 - VBR 및 BR 구성과 호환

Product	Size	Cat. No.
iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식균 작용 키트	1 x 96 well	BA-97106
iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식균 작용 키트	1 x 384 wells	BA-97108