항체 의존성 세포 식세포작용

항체 의존성 세포 식균작용(ADCP)은 종양 세포를 단클론 항체(mAb)로 표적화하여 식세포성 면역 세포에 의한 체외 제거를 촉진하는 면역학적 제거 기전입니다. 이러한 특성으로 인해 종양 세포 특이적 단클론 항체는 항암 치료제로 매력적인 후보로 여겨지며, 트라스투주맙(Trastuzumab)과 같이 HER-2 양성 유방암 치료에 널리 사용되는 여러 치료제가 이미 승인되었습니다.

이러한 치료제의 작용 기전(MoA)은 대식세포 또는 단핵구의 Fc 수용체(FcR)와 결합하는 능력과 종양 세포에 과발현된 항원에 특이적으로 결합하는 능력 모두에 의존합니다. 항체 개발 과정에서 치료 잠재력을 가늠하기 위해서는 항체 의존성 세포독성(ADCP)을 포함한 다양한 작용 기전을 유도하는 분자의 능력을 분석법을 통해 규명하는 것이 필수적입니다. ADCP를 측정하는 기존 기술은 다음과 같은 특징을 갖는 경우가 많습니다.

대량의 시료가 필요한 저처리량 데이터 수집 장비(예: 기존 유세포 분석기)를 사용하십시오.
이 방법들은 프로토콜 최적화, 고정 및 반복적인 세척과 같은 단계를 필요로 하기 때문에 힘들고 시간이 많이 소요됩니다.
정성적 결과만 제공하거나 수동 데이터 분석을 요구하십시오.
실제 ADCP 신호를 정량화하는 대신 아티팩트를 측정합니다.
유전자 조작된 리포터 세포주에 의존하세요

iQue^® 항체 의존성 세포 식작용(ADCP) 애플리케이션은 iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식작용 키트를 활용하여 간소화된 워크플로우를 통해 CD14+ 일차 효과 세포와 살아있는 표적 세포의 공동 위치를 정량화함으로써 ADCP를 고처리량으로 측정합니다. 이 애플리케이션의 강력한 기능을 활용하여 표적 항체가 ADCP에 미치는 영향을 즉각적으로 약리학적 관점에서 분석하십시오.

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개념

그림 1. iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식균 작용 키트 분석 원리 모식도.

iQue^® 증식 및 인코딩(B/녹색) 염료로 표지된 표적 세포를 96웰 또는 384웰 플레이트에서 시험 항체와 함께 배양한 후, 표지되지 않은 효과기 세포(말초혈액 단핵세포 또는 농축된 단핵구 또는 대식세포 집단)를 첨가합니다.

생세포와 사세포는 iQue^® 세포막 무결성(R/Red) 염료를 사용하여 분리합니다. ADCP는 표적 세포 인코더에 양성 반응을 보이는 살아있는 CD14+ 이펙터 세포의 백분율로 정량화됩니다.

이 키트에 사용된 형광물질의 조합으로 인해 iQue^® BR 및 VBR 구성 모두와 호환됩니다.

정량적 데이터를 얻으세요

약리학적 분석에 적합한 재현 가능하고 특이적인 ADCP 측정값을 생성합니다.

그림 2. iQue Forecyt^®를 사용한 효율적인 데이터 분석은 EC의 자동 계산을 통해 약물 효능 순위를 매길 수 있게 해준다.

B/Green으로 표지된 Ramos 세포(웰당 2.5K개)를 PBMC(효과기 대 표적 비율 20:1)와 함께 96웰 플레이트에 접종했습니다. ADCP는 IgG1, IgG1NQ(비당화형), IgG2 및 IgG4를 포함한 다양한 리툭시맙 단클론항체 동위형으로 자극했습니다. 세포는 iQue^® 항체 의존성 세포 식세포작용 키트를 사용하여 표지하고, ADCP는 iQue^® 3를 사용하여 분석했습니다. ADCP(%)는 생존 세포 집단에서 CD14 및 B/Green 인코더 양성 세포의 비율로 정의됩니다.

1. 인비보젠: 세포 생물학 연구를 위한 시약 및 도구.

고처리량 분석을 수행합니다.

96웰 또는 384웰 플레이트에서 ADCP를 신속하게 정량화할 수 있는 검증된 시약을 사용하여 연구 결과를 더욱 효율적으로 도출하십시오.

그림 3. 384웰 플레이트 하나에서 여러 공여자로부터 얻은 말초혈액 단핵세포(PBMC)의 ADCP 반응을 다양한 E:T 비율로 분석합니다.

비부착성 Ramos 표적 세포(2.5K/well)를 Truxima(CD20-IgG1) 및 PBMC와 5:1, 10:1 및 20:1의 효과기 대 표적 비율로 배양했습니다. 항체가 없는 웰을 음성 대조군으로 포함했습니다. ADCP는 iQue^® Human Antibody-Dependent Cellular Phagocytosis Kit 및 iQue^® 3을 사용하여 평가했습니다.

기증자 1과 2의 PBMC에서 얻은 ADCP(%)의 히트맵과 ADCP(%)에 따른 농도-반응 곡선.

생리학적으로 관련된 세포 모델을 분석합니다.

다양한 부착성 또는 비부착성 표적 세포에 대한 1차 효과기 세포의 ADCP를 평가합니다.

그림 4. 유연한 공동 배양 모델을 이용하여 부착성 표적 세포에 대한 치료 약물의 식세포 효과를 구분한다.

B/Green으로 인코딩된 부착성 AU565 세포(웰당 10,000개)를 트라스투주맙(Her2-IgG1 mAb) 및 분리된 단핵구(효과기 대 표적 비율 5:1)와 함께 배양했습니다. 세포는 iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식세포작용 키트를 사용하여 표지하고 iQue^®3로 분석했습니다.

Forecyt에서 얻은 히스토그램의 플레이트 뷰는 트라스투주맙 농도 증가에 따른 ADCP 이벤트(CD14+ B/Green+ 생세포)의 증가를 보여줍니다.

대조 항체(BGal-IgG1)와 비교하여 트라스투주맙에 대한 ADCP의 증가율(%).

생산성을 극대화하세요

실시간 데이터 분석 및 혁신적인 시각화 도구를 활용하여 답변 시간을 단축하세요.

그림 5a. iQueHTS 플랫폼에서 샘플을 획득하면 사전 설정된 게이팅 템플릿이 자동으로 채워집니다.

iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식세포작용 키트에 포함된 템플릿을 iQue Forecyt^®에 불러와 B/Green으로 인코딩된 표적 세포와 CD14+ 단핵구를 즉시 정량화할 수 있습니다. 단일 세포 게이트를 생략하고 간단한 3단계 게이팅 전략을 사용하여 정확한 ADCP 신호를 측정할 수 있습니다.

그림 5b. iQue Forecyt^® 소프트웨어에 의한 자동 데이터 분석은 즉각적인 ADCP 판독값을 제공합니다.

게이팅 템플릿을 적용한 후에는 사용하기 쉬운 iQue Forecyt^® 분석 플랫폼을 사용하여 약리학적 분석을 수행하고 결과를 간단하고 명확한 형식으로 동시에 표시할 수 있습니다. 데이터 시각화 예시는 다음과 같습니다.

CD14 양성 집단의 명확한 게이팅을 보여주는 등고선 플롯. Ramos 또는 Raji 표적 세포를 가진 PBMC의 Truxima에 대한 ADCP(%) 반응의 히트맵. (B)의 데이터는 농도 반응 곡선으로 나타냈습니다. iQue Forecyt^®에서 직접 내보낸 EC 값은 Ramos와 Raji에 대해 각각 29.1ng/mL 및 24.8ng/mL입니다.

그림 6. iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식균 작용 키트의 따라하기 쉬운 프로토콜.

주문 정보

플랫폼: iQue^® 3/iQue^® Screener Plus와 호환 - VBR 및 BR 구성 지원

제품	크기	고양이. 아니요.
iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식세포작용 키트	1 x 96웰	BA-97106
iQue^® 인간 항체 의존성 세포 식세포작용 키트	1 x 384개 우물	BA-97108