고처리량 선별 검사(HTS)를 위한 수정 가능한 생존성 염료

고정 가능한 생존성 염료

최종 데이터 분석에서 제외하기 위해 처리에 대한 세포의 반응을 평가할 때 세포 생존력을 결정하는 것이 중요합니다. 유세포 분석을 통해 세포 내 면역표현형을 수행할 때, 고정 가능한 생존성 염료는 세포 집단을 제대로 식별하기 위해 고정 후 염색 패턴을 보존하는 데 중요합니다. 생존력을 정량화하기 위해 많은 고정 가능한 생존성 염색이 개발되었지만, 이들은 고정 프로토콜과 호환되지 않으며 궁극적으로 데이터 세트 내에 인공물이 생성될 수 있습니다.

iQue^® 고정 가능한 생존성 염료는 세포 표지에서 분석까지 간소화된 워크플로우로 96웰 형식에서 고정 및/또는 투과 후 샘플의 세포 생존력을 정확하게 평가합니다. 세포 내 유세포 분석 워크플로우를 위한 정확한 세포 생존력을 얻는 것이 이보다 쉬운 적은 없습니다!

응용

분석 개념

iQue^® 고정 생존성 염료는 생세포와 사멸세포를 구분하는 아민 반응성 막 불투과성 염료입니다. 염색된 세포는 고정 및 투과될 수 있어, 염료 강도 손실 없이 후속 세포 내부 염색과 호환됩니다.

iQue^® 고정 생존성 키트는 BR 및 VBR 구성의 iQue^® 고처리량 스크리닝(HTS) 세포 분석 플랫폼에서 검증되었습니다. 세포 표지에서 분석까지 간소화된 워크플로우로 세포 생존성, 세포 표면 및 세포 내부 표적의 정량적 분석을 가능하게 합니다. iQue^® 고정 생존성 키트는 다중 색상 유세포 패널 요구에 맞는 세 가지 다른 색상으로 제공됩니다. 사용 편의성을 위해 게이팅 전략 및 분석을 위한 사전 설정 템플릿이 키트에 포함되어 있습니다.

기본 워크플로:

단백질이 없는 PBS로 세포 세척
단백질이 없는 PBS에 희석된 염료로 20-30분 동안 세포 염색
필요한 경우 후속 염색 프로토콜(표면 마커 염색, 고정/투과, 세포 내 염색) 수행
iQue^® HTS 플랫폼(BR 및 VBR 구성)에서 플레이트 분석

주요 장점

- 고정 또는 투과 후 생세포와 사멸세포를 구분하기 위해 형광 염색 강도 유지.
- 사멸 세포로 인한 인공물을 줄이면서 동시에 표면 및 세포 내 마커 발현 모니터링.
- 다운스트림 분석에서 여러 번 사용할 수 있도록 세포 20 µL만으로 샘플 보존

고정 후 염색 보존

고정 또는 투과 처리 후에도 염색 강도 손실 없이 살아있는 세포와 죽은 세포를 구별할 수 있는 형광 성능 유지

생존 가능하고 열 처리된(65°C, 10분) 비생존 Jurkat 세포의 혼합물을 iQue^® 고정 V/블루(A), B/그린(B), 또는 R/레드(C) 염료로 염색했습니다. 염색된 세포는 고정되지 않았거나 PBS에서 3.7% 포름알데히드, 0.1% 사포닌으로 고정 및 투과처리되었습니다. 모든 샘플은 iQue^® HTS 장치로 획득되었으며, 히스토그램은 키트에 포함된 사전 설정 템플릿을 사용하여 단일 게이트에서 도출되었습니다.

세포 내 표적의 인공물 없는 분석 가능

동시에 죽은 세포로 인한 잠재적 인공물을 최소화하면서 표면 및 세포 내 마커 발현을 분석합니다.

PBMCs를 10 ng/mL 인간 재조합 IL-2 존재 하에 CD3 항체로 코팅된 플레이트에서 이틀 동안 배양했습니다. 단백질 수송 억제제 모넨신(2 µM)을 검사 4시간 전에 세포 배양에 추가했습니다. 활성화된 PBMCs(20 µL)를 96웰 분석 플레이트의 각 웰에 추가하고, iQue^® 고정 생존성(V/블루) 염료로 염색한 후, T 세포 표면 마커 CD3로 염색했습니다. 그런 다음 세포를 Cytofix/Cytoperm 용액(BD Biosciences)으로 고정 및 투과처리하고, PE 접합 마우스 항-인간 IFN-γ 항체로 염색했습니다. 샘플을 iQue^® HTS 기기로 획득하고 데이터를 iQue Forecyt^® 소프트웨어로 분석했습니다. A, 모든 세포의 게이트. B, 단일 세포의 게이트. C, iQue^® 고정 생존성(V/블루) 염료 염색으로 죽은 세포 제외. D, CD3+ 생존 세포의 IFN-γ 발현 플롯.

귀중한 샘플 저장

다운스트림 분석을 위해 20 µL의 세포만으로 샘플을 보존하세요.

그림 3. 따라하기 쉬운, 저용량(20 µL/웰) 프로토콜로 세포와 설정 시간 절약

주문 정보


플랫폼: iQue^® 3/iQue^® 스크리너 플러스 - VBR 및 BR 구성과 호환
제품	크기	카탈로그 번호
iQue^® 고정 가능한 생존력(V/블루) 키트	5 x 96 웰	BA-97116
iQue^® 고정 생존성 (B/그린) 키트	5 x 96 웰	BA-97119
iQue 수정 가능한 생존성 (R/레드) 키트	5 x 96 웰	BA-97122