Incucyte^® - iQue^® 워크플로우

5일 이상의 종양 세포 사멸 전체 과정을 모니터링하고, 사이토카인 농도를 결정하기 위해 비교란성 상층액 샘플링을 수행한다.

그림 1. 기술의 조합으로 연대기적 사건을 식별할 수 있다. 

공동 배양 면역 세포 살해 분석에서 CD3/CD28 다이나비즈 활성화의 효과. SKOV-3 세포를 well당 4,000개 세포 밀도로 배치하고 4시간 동안 부착되도록 했다. 그런 다음 PBMCs를 well당 10,000개 세포로 배치하기 전에 다양한 농도의 다이나비즈를 well에 추가했다. 사이토카인 분석을 위해 매일 상층액 샘플링(10 µL)을 수행했다.

시간적 데이터는 초기 사이토카인 분비 증가가 효과 세포 증식 증가에 선행하고, 이어서 표적 세포 수의 감소가 발생하는 사건의 타임라인을 보여준다. 데이터는 120시간 동안 수집되었으며, 각 데이터 포인트는 평균 ±SEM, n=3을 나타낸다.

• 단일 분석 플레이트의 데이터를 수집하고 결합하여 공동 배양 모델에서 더 깊은 생물학적 통찰력 제공
• 부착성 및 비부착성 표적 세포 모두에 적용 가능한 워크플로우

그림 2. 면역 세포 살해 분석을 위한 Incucyte^® - iQue^® 조합의 따라하기 쉬운 워크플로우.

• T 세포 아집단을 자동으로 표현형화하고 사이토카인 분비 정량화
• 표적 및 효과 세포 집단의 표현형 변화를 실시간으로 관찰 및 정량화

그림 3a. 타겟 세포 분석은 플랫폼 간 비교 가능하다. 

위상차/형광 이미지는 SKOV-3 Nuclight Green 형질전환 난소암 세포(타겟)와 비표지 PBMC(효과세포)의 공배양을 보여준다

Incucyte^® 소프트웨어는 타겟 세포(분홍색 윤곽선의 녹색 객체)의 직접적인 이미지 기반 검출 및 정량화를 가능하게 하여 타겟 세포 수 정량화를 지원한다

2D 밀도 플롯 iQue^® 분석은 녹색으로 표시된 표적 세포를 음성 PBMC 집단에서 분리할 수 있음을 보여줍니다.

표적 세포 빈도.

그림 3b. 사전 결정된 게이팅 전략을 사용하여 자동 T 세포 부분집단 분석 수행. 

사용자 친화적인 TCA-키트는 최소한의 사용자 개입으로 T 세포 활성화 마커의 식별 및 정량화를 가능하게 합니다.

기술의 조합으로부터 더 깊은 생물학적 통찰을 얻을 수 있다.

그림 4. 한 가지 검사에서 항체 의존성 세포 매개 세포독성, 세포 상호작용 변화 및 T 세포 활성화 정량. 

비부착성 표적 세포와 PBMC의 공배양에서 항-hCD3xCD19 BiTE 항체 활성화의 효과. Ramos 세포(녹색)를 웰당 15,000개 세포로 배치했다. PBMC 추가 전에 BiTE 항체를 웰에 추가했다(웰당 75,000개 세포).

BiTE 항체는 형광 강도 손실로 측정된 Ramos 세포의 농도 의존적 사멸을 유도했다.

세포 군집화는 면역 세포 제거의 특징인 농도 의존적 방식으로도 증가했습니다. BiTE 자극과 Dynabead 자극을 비교했을 때 T 세포 활성화 마커의 차이가 관찰되었습니다

이미지에서 관찰된 형태학적 변화

정성적 검증을 제공합니다. 데이터는 72시간 동안 수집되었습니다. 각 데이터 포인트는 평균 ± 표준오차를 나타내며, n=3입니다.