Incucyte^® - iQue^® 워크플로우

종양 세포 사멸의 전체 과정(5일 이상)을 모니터링하고, 교란을 일으키지 않는 방식으로 상층액 샘플을 채취하여 사이토카인 농도를 측정합니다.

그림 1. 기술의 조합을 통해 연대순 사건들을 파악할 수 있다.. 

CD3/CD28 다이나비드 활성화가 공동 배양 면역 세포 사멸 분석에 미치는 영향. SKOV-3 세포를 웰당 4,000개 밀도로 접종하고 4시간 동안 부착되도록 했다. 그 후, 다이나비드를 단계적으로 희석하여 웰에 첨가하고, 이어서 말초혈액 단핵세포(PBMC)를 웰당 10,000개 밀도로 접종했다. 매일 상층액 10µL를 채취하여 사이토카인 분석을 실시했다.

시간 경과에 따른 데이터는 일련의 사건들을 보여주는데, 초기에는 사이토카인 분비가 증가했고, 그 후 효과기 세포 증식이 증가했으며, 결과적으로 표적 세포 수가 감소했습니다. 데이터는 120시간 동안 수집되었습니다. 각 데이터 포인트는 평균 ± 표준오차(SEM)를 나타내며, n=3입니다.

• 단일 분석 플레이트에서 얻은 데이터를 수집하고 결합하여 공동 배양 모델에 대한 더 심층적인 생물학적 통찰력을 얻을 수 있습니다.
• 이 워크플로는 부착성 및 비부착성 표적 세포 모두에 적용 가능합니다.

그림 2. 면역 세포 사멸 분석을 위한 Incucyte^®와 iQue^® 조합의 따라하기 쉬운 워크플로우.

• T 세포 하위 집단의 표현형을 자동으로 분석하고 사이토카인 분비량을 정량화합니다.
• 표적 및 효과기 집단의 표현형 변화를 실시간으로 관찰하고 정량화합니다.

그림 3a. 표적 세포 분석 결과는 플랫폼 간에 유사합니다.. 

위상차/형광 현미경 이미지는 뉴클라이트 그린으로 형질전환된 SKOV-3 난소암 세포(표적)와 표지되지 않은 말초혈액 단핵세포(효과기)의 공동 배양을 보여줍니다.

Incucyte^® 소프트웨어는 표적 세포(녹색 객체, 분홍색 윤곽선)를 이미지 기반으로 직접 감지하고 정량화하여 표적 세포 수를 정량화할 수 있도록 합니다.

2D 밀도 플롯 iQue^® 분석은 녹색으로 표시된 표적 세포를 음성 PBMC 집단과 어떻게 분리할 수 있는지 보여줍니다.

목표 세포 빈도.

그림 3b. 사전 정의된 게이팅 전략을 사용하여 자동 T 세포 하위 집단 분석이 수행됩니다.. 

사용자 친화적인 TCA 키트는 최소한의 사용자 개입으로 T 세포 활성화 마커를 식별하고 정량화할 수 있도록 해줍니다.

다양한 기술을 결합하면 더욱 심층적인 생물학적 통찰력을 얻을 수 있습니다.

그림 4. 항체 의존성 세포 매개성 세포독성, 세포 상호작용 변화 및 T 세포 활성화를 하나의 분석법으로 정량화. 

비부착성 표적 세포와 말초혈액 단핵세포(PBMC)의 공동 배양에서 항-hCD3xCD19 BiTE 항체 활성화의 효과. 라모스 세포(녹색)를 웰당 15,000개씩 접종하였다. BiTE 항체는 PBMC(웰당 75,000개)를 첨가하기 전에 웰에 첨가하였다.

BiTE 항체는 형광 강도 감소로 측정했을 때 농도 의존적으로 라모스 세포를 사멸시켰다.

세포 응집 현상 또한 농도 의존적으로 증가했는데, 이는 면역 세포 사멸의 특징적인 현상입니다. BiTE 자극과 Dynabead 자극을 비교했을 때 T 세포 활성화 지표에서 차이가 관찰되었습니다.

이미지에서 관찰된 형태학적 변화

정성적 검증을 제공합니다. 데이터는 72시간 동안 수집되었습니다. 각 데이터 포인트는 평균 ± 표준오차(SEM)를 나타내며, n=3입니다.