자연살해세포 살해

세포 분석을 통한 고처리량 스크리닝(HTS)을 이용한 자연살해세포 활성 분석

자연살해세포(NK 세포)는 선천성 면역 시스템의 필수적인 부분으로 면역 감시와 항종양 반응에서 중요한 역할을 합니다. 현재 여러 종류의 NK 세포 관련 면역치료제가 암 치료를 위해 개발되고 있습니다. mAbs, BiKES, TRiKES를 포함한 종양 특이적 항체는 NK 세포 매개 항체 의존성 세포 독성(ADCC)을 유도할 수 있어 여러 유형의 암에 대해 성공적임이 입증되었으며, CAR-NK 세포 생산의 발전은 더욱 특이적이고 강화된 종양 세포 제거를 가능하게 할 수 있습니다. 새로운 NK 세포 매개 치료제를 평가하는 중요한 과정은 잠재적 치료 효능에 대한 통찰력을 제공하기 위해 NK 세포 활성화와 종양 제거를 정량화하는 능력입니다. NK 매개 제거와 활성화를 측정하는 전통적인 기술은 종종:

노동 집약적이고 간접적인 세포독성 측정을 사용합니다. 예: 크로뮴 방출 분석
세포독성, 활성화 상태 및 사이토카인/단백질 방출을 동시에 정량화할 수 없습니다
각각 다른 장비를 필요로 하는 여러 워크플로우를 사용해야 합니다
생리학적으로 관련된 환경 조건을 통합하지 않음

iQue^® 내추럴 킬러 세포 살해 애플리케이션은 iQue^® 인간 NK 세포 살해 키트를 사용하여 표적 세포 살해, NK 세포 표현형 및 활성화 마커 발현, 분비된 효과 단백질 및 사이토카인의 정량을 동시에 고처리량으로 분석합니다. iQue^® 고처리량 스크리닝(HTS) 사이토메트리의 힘과 iQue Forecyt^® 통합 소프트웨어 분석을 결합하여 표현형 및 기능적 판독을 단일 분석법으로 제공함으로써 면역종양학 및 NK 세포 매개 세포 치료제 개발을 위한 간소화된 솔루션을 제공합니다.

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애플리케이션

분석 개념

이제 생산성을 향상시키고 NK 세포 살해에 대한 중요한 통찰력을 얻기 위해 단일 웰에서 표현형과 기능을 측정할 수 있습니다.

단일 웰에서 NK 세포 활성화 상태와 표적 세포 살해를 측정하는 다중 접근법.

표적 세포는 형광 인코딩 염료로 염색하여 효과 세포와 구별되며, 종양 세포 살해는 형광 세포막 무결성 염료로 염색하여 결정됩니다. NK 세포는 CD3, CD56, CD16을 사용하여 식별됩니다. 활성화 상태는 CD69와 CD25를 사용하여 평가됩니다. 프로 염증성 사이토카인인 인터페론 감마(IFNg)와 프로 아포토시스 세린 프로테아제인 Granzyme B의 생성은 동일한 웰에서 샌드위치 면역분석 형식으로 2-plex iQue Qbeads^®를 사용하여 정량화됩니다. 추가 사이토카인 분석은 인간 NK 세포 동반 키트를 통해 가능합니다.

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더 많은 생물학적 통찰력 얻기

NK 세포 매개 종양 세포 살해를 생리학적으로 관련된 모델에서 연구 가능하게 함.

두 개의 별도 공여자로부터의 PBMCs(200K/well)와 함께 인코딩된 Raji 종양 세포(20K/well)를 공동 배양했습니다. PBMCs는 세 가지 항-CD20 항체 중 하나와 함께 배양되었습니다: Ab-1 (IgG1), Ab-2 (IgG1) 또는 음성 대조군 Ab-3 (IgA2). 농도 범위는 10ug/mL – 0.128 ng/mL 사이였습니다.

4시간에, 10 µL 샘플을 Human NK Cell Killing Kit와 iQue^® 3를 사용하여 종양 세포 살해를 평가하기 위해 분석했으며, Granzyme A도 iQue^® Human NK Cell Companion Kit를 사용하여 측정되었습니다.

두 공여자의 표적 세포 살해가 항체에 대해 차별적 반응을 보였다. 과립분해효소 A 생산은 농도와 공여자에 따라 달랐다. 자연살해세포의 CD16+ 발현은 자극 증가에 따라 감소한다.

. 인코딩된 K562 종양 세포(20K/well)를 16-18시간 동안 단독 배지(비활성화 NK 세포) 또는 200 U/mL IL-2 및 100 ng/mL IL-15가 포함된 배지(활성화 NK 세포)에 배양한 농축(음성 선택) 인간 NK 세포와 함께 공동 배양했습니다. 효과__PH_0__ 비율은 1:1 또는 5:1이었습니다. 4시간과 24시간에 10 µL 샘플을 채취하여 iQue^® 인간 NK 세포 살해 키트와 iQue^® HTS 플랫폼을 사용하여 종양 세포 살해를 분석했습니다.

4시간 동안 비활성화 또는 사이토카인 활성화 NK 세포와 공동 배양 후 표적 세포 생존율을 나타내는 히스토그램. 4시간 또는 24시간 동안 비활성화 또는 사이토카인 활성화 NK 세포와 종양 세포 공동 배양 후 표적 세포 사멸 백분율 요약.

생산성 향상

효과 세포 마커 발현과 분비된 효과 단백질의 동시 측정을 위한 혼합 세포 및 비즈 분석 형식.

. 인코딩된 K562 종양 세포(20K/well)를 16-18시간 동안 단독 배지(비활성화 NK 세포) 또는 200 U/mL IL-2 및 100 ng/mL IL-15가 포함된 배지(활성화 NK 세포)에서 배양한 농축(음성 선택) 인간 NK 세포와 함께 효과__PH_0__ 비율 5:1로 공동 배양했습니다. 24시간의 공동 배양 후, 10 µL 샘플을 채취하여 iQue^® 인간 NK 세포 킬링 키트와 iQue^® HTS 플랫폼을 사용하여 분석했습니다.

활성화 마커인 CD69와 CD25의 발현. IFNg 생성 및 Granzyme B 분비. 추가 사이토카인은 iQue^® 인간 NK 세포 동반 키트와 iQue^® 인간 NK 세포 살해 키트를 결합하여 병렬로 평가되었습니다. NK = 자연살해세포. T = 표적 K562 종양세포.

IL-2와 IL-15로 활성화하면 Granzyme B 및 CCL5(RANTES)와 같은 다양한 효과 단백질의 활성화 마커 발현 및 분비가 증가했습니다. 이러한 효과는 NK 세포를 표적 세포와 배양할 때 더욱 강화되었습니다.

데이터 수집 간소화

실시간 데이터 분석 및 혁신적인 시각화 도구를 통해 신속한 데이터 획득이 가능합니다.

그림 5. iQue Forecyt^®의 사전 정의된 게이트 및 다중 분석 기능은 인간 NK 세포의 자동 표현형 분석을 가능하게 합니다.

비활성화 NK 세포(음성; 빨간색)와 사이토카인 활성화 NK 세포(양성; 녹색)의 CD69 발현에 대한 오버레이 플롯을 생성하기 위해 양성 및 음성 웰을 사용하는 예시. 웰당 CD69+ 세포의 비율을 보여주는 플레이트 히트맵의 예시. NK 세포의 CD69 발현을 나타내는 오버레이 히스토그램의 예시. (비활성화 NK = 비활성화 NK 세포, 활성화 NK = 사이토카인 활성화 NK 세포, T = 종양 표적 세포).

시간과 귀중한 샘플을 절약하세요

최소한의 샘플 조작으로 단일 소형화, 다중 분석 검사에 기존의 복잡한 워크플로우를 압축하고 간소화합니다.

NK 세포에 의한 종양 세포 살해 분석을 위한 쉬운 프로토콜, iQue^® 인간 NK 세포 살해 키트를 사용한 NK 세포 활성화 상태 및 사이토카인 방출 평가와 함께

주문 정보

iQue^® 인간 NK 세포 살해 키트

Platform	Compatible with iQue^® 3/iQue^® Screener Plus VBR configuration.
사용 가능한 크기	카탈로그 번호
1 x 96 well	97082
1 x 384 wells	97084

iQue^® 인간 NK 세포 동반자 키트

카탈로그 번호	설명
97089	iQue^® Human MIP 1α NK Cell Companion Kit
97090	iQue^® Human RANTES NK Cell Companion Kit
97091	iQue^® Human GM-CSF NK Cell Companion Kit
97092	iQue^® Human CD178/Fas Ligand NK Cell Companion Kit
97093	iQue^® Human Granzyme A NK Cell Companion Kit
97094	iQue 인간 TNFα NK 세포 동반자 키트