세포계측법을 이용한 고처리량 스크리닝(HTS)으로 자연 살해 세포 활성 조사

생리학적으로 적합한 모델에서 NK 세포 매개 종양 세포 사멸 연구를 가능하게 합니다.

인코딩된 Raji 종양 세포(웰당 20,000개)를 서로 다른 두 명의 공여자로부터 얻은 말초혈액 단핵세포(웰당 200,000개)와 함께 배양했습니다. 말초혈액 단핵세포는 세 가지 항-CD20 항체 중 하나(Ab-1(IgG1), Ab-2(IgG1) 또는 음성 대조군 Ab-3(IgA2))와 함께 배양했습니다. 항체 농도 범위는 10μg/mL ~ 0.128ng/mL였습니다.

4시간 후, 10µL 샘플을 채취하여 Human NK Cell Killing Kit와 iQue^® 3를 사용하여 종양 세포 사멸을 평가하고, iQue^® Human NK Cell Companion Kit를 사용하여 그란자임 A도 측정하였다.

두 공여자의 표적 세포 사멸은 항체에 대해 서로 다른 반응을 보였다. 그란자임 A 생성은 농도와 공여자에 따라 달라졌다. 자연 살해 세포의 CD16+ 발현은 자극이 증가함에 따라 감소했다.

암호화된 K562 종양 세포(웰당 20,000개)를, 배양액만 사용한 경우(비활성화 NK 세포) 또는 200 U/mL IL-2 및 100 ng/mL IL-15를 함유한 배양액에서 16-18시간 동안 배양한 농축(음성 선택)된 인간 NK 세포와 함께 효과기:표적 세포 비율 1:1 또는 5:1로 공동 배양하였다. 4시간 및 24시간 후, 10 µL 샘플을 채취하여 iQue^® 인간 NK 세포 사멸 키트와 iQue^® HTS 플랫폼을 사용하여 종양 세포 사멸을 평가하였다.

비활성화 또는 사이토카인 활성화 NK 세포와 4시간 동안 공동 배양 후 표적 세포 생존율을 나타내는 히스토그램. 종양 세포를 비활성화 또는 사이토카인 활성화 NK 세포와 4시간 또는 24시간 동안 공동 배양 후 표적 세포 사멸률 요약.

혼합 세포 및 비드 분석법 형식을 이용하여 이펙터 세포 마커 발현과 분비 이펙터 단백질을 동시에 측정합니다.

인코딩된 K562 종양 세포(웰당 20,000개)를, 배양액만 사용한 경우(비활성화 NK 세포) 또는 200 U/mL IL-2 및 100 ng/mL IL-15를 함유한 배양액에서 16-18시간 동안 배양하여 음성 선택된 인간 NK 세포와 5:1의 효과기:표적 비율로 공동 배양하였다. 24시간 공동 배양 후, 10 µL 샘플을 채취하여 iQue^® 인간 NK 세포 사멸 키트와 iQue^® HTS 플랫폼을 사용하여 분석하였다.

활성화 표지자인 CD69 및 CD25의 발현. IFNγ 생성 및 그란자임 B 분비. 추가적인 사이토카인은 iQue^® 인간 NK 세포 컴패니언 키트와 iQue^® 인간 NK 세포 킬링 키트를 병용하여 동시에 평가하였다. NK = 자연 살해 세포. T = 표적 K562 종양 세포.

IL-2 및 IL-15를 사용한 활성화는 Granzyme B 및 CCL5(RANTES)와 같은 다중 이펙터 단백질의 활성화 마커 발현 및 분비를 증가시켰습니다. 이러한 효과는 NK 세포를 표적 세포와 함께 배양할 때 더욱 강화되었습니다.

실시간 데이터 분석 및 혁신적인 시각화 도구를 통해 신속한 데이터 수집이 가능합니다.

그림 5. iQue Forecyt^®의 사전 정의된 게이트 및 다양한 분석 기능을 통해 인간 NK 세포의 자동 표현형 분석이 가능합니다.

비활성화된 NK 세포(음성; 빨간색)와 사이토카인으로 활성화된 NK 세포(양성; 녹색)에서 CD69 발현을 중첩하여 보여주는 예시입니다. 플레이트 히트맵은 웰당 CD69+ 세포의 비율을 나타냅니다. 중첩 히스토그램은 NK 세포에서 CD69 발현을 보여줍니다. (비활성화 NK = 비활성화된 NK 세포, 활성화 NK = 사이토카인으로 활성화된 NK 세포, T = 종양 표적 세포)

기존 워크플로우를 간소화하고 단순화하여 최소한의 시료 조작으로 단일 소형 다중 분석법으로 구현합니다.

iQue^® 인간 NK 세포 사멸 키트를 사용하여 NK 세포 매개 종양 세포 사멸 분석, NK 세포 활성화 상태 및 사이토카인 분비 평가를 위한 간편한 프로토콜입니다.