T세포 특성 분석

PBMC(120,000개/웰)를 Nuclight Green으로 표지된 Ramos 세포(40,000개/웰)와 함께 배양했습니다. CD3/CD28 Dynabeads, CD3xCD19 BiTE 항체 또는 포도상구균 장독소 B(SEB)를 사용하여 활성화를 유도했습니다. 60시간 후, 10 µL 샘플을 iQue^® 3 고처리량 스크리닝(HTS) 유세포 분석기를 사용하여 T 세포 활성화, T 세포 매개 살해 및 T 세포 소진 키트로 분석했습니다.

각 활성화제는 서로 다른 CD3+ T 세포 단백질 발현 및 살상 프로필을 나타냈습니다.

• 농도 의존적인 T 세포 활성화가 유도되었다. 비드 수가 가장 많을수록 활성화 마커의 발현율이 가장 높았다. 이는 소진 마커의 높은 수준과 상관관계가 있었다.
• BiTE는 Dynabeads 및 SEB와 비교했을 때 활성화 및 소진 수준이 현저히 낮으면서 표적 세포 사멸을 가장 크게 증가시켰습니다. 이는 BiTE를 이용한 면역 세포 사멸이 더 오랜 기간 동안 지속될 수 있음을 시사합니다.
• 자극은 가장 낮은 농도에서도 T 세포 활성화와 최대 살균 효과를 가져왔습니다. 이로 인해 극심한 피로감이 발생했습니다.

뉴클레오타이드 그린으로 표지된 라모스 세포와 말초혈액 단핵세포(PBMC)를 3:1 비율로 함께 배양한 후, T 세포 활성화, T 세포 매개 살해 및 T 세포 소진 키트의 Qbeads를 사용하여 사이토카인 방출량을 측정했습니다. 측정된 사이토카인은 IFNγ와 TNFα입니다.

농도는 여러 키트로 측정되었으므로 모든 키트의 결과를 평균냈습니다.

각 활성제가 사이토카인 분비에 미치는 영향은 표면 단백질 발현에 미치는 영향과 유사했습니다.

• 사용된 비드 개수 범위 전체에 걸쳐 농도 의존적인 사이토카인 방출 증가를 유도했습니다.
• 자극에 의한 사이토카인 생성은 비드 또는 SEB와 비교했을 때 지속적으로 낮았습니다(그랜자임 B의 최고 농도 제외). 이는 독성 위험(예: 사이토카인 방출 증후군)을 줄이면서 높은 수준의 살균 효과를 얻을 수 있음을 시사합니다.
• 낮은 농도에서도 높은 수준의 사이토카인 방출을 유도했습니다.

* 검출 상한에 도달함

PBMC(120,000개/웰)와 Ramos 세포(E:T 비율 3:1)를 3가지 활성제와 함께 공동 배양했습니다. 60시간 후 10µL 샘플을 T 세포 메모리 키트를 사용하여 분석했습니다.

T 세포가 다양한 기억 T 세포 표현형으로 발달함에 따라 표면 마커 발현이 어떻게 변화하는지 보여주는 모식도. 미분화(T) 세포에서 줄기세포 기억(T) 세포, 중심 기억(T) 세포, 전환기 기억(T) 세포, 효과기 기억(T) 세포, 최종 효과기(T) 세포를 거쳐 세포 사멸에 이르는 과정을 나타낸다.

각 T세포 기억 발달 단계에서 단백질을 발현하는 CD3+ 세포의 비율을 보여주는 그래프입니다. IL-10 분비량도 함께 나타냈습니다. 청록색 막대는 활성제를 첨가하지 않은 대조군입니다. 회색 막대는 각 활성제의 농도를 3단계로 증가시킨 결과(밝은 색에서 어두운 색 순)를 나타냅니다. 활성제는 CD3/CD28 Dynabeads(30,000, 120,000개/웰), CD3xCD19 BiTE(0.12, 1.1, 10 ng/mL), SEB(1.2, 11, 100 ng/mL)입니다.

BiTE 항체를 이용한 활성화는 Dynabead 및 SEB 자극과 비교했을 때 T 기억 세포 발달의 후기 단계(즉, T1 및 T2)에 있는 세포의 비율이 가장 낮고 초기 단계(T1, T2 및 T3)에 있는 세포의 비율이 더 높게 나타났습니다. 이는 BiTE 항체 자극이 더 높은 수준의 세포 사멸을 유도하고(그림 3 참조), 또한 항원에 대한 더 강력한 반응을 가능하게 하는 자가 재생 능력을 유지하는 T 기억 세포의 비율을 높인다는 것을 시사합니다.

사용자의 요구에 맞는 조합으로 세포 및 비드 기반 키트를 사용하여 활성화, 사멸, 소진 및 기억 현상을 분석합니다.

PBMC(25,000개/웰)를 부착성 AU565 세포(5,000개/웰)와 함께 배양했습니다. SEB를 사용하여 T 세포 활성화를 유도했습니다. 60시간 후, 표적 세포와 효과기 세포를 채취하여 T 세포 활성화 키트, T 세포 매개 살해 키트, T 세포 소진 키트 및 iQue^® 3 HTS 유세포 분석기를 사용하여 최종 분석을 수행했습니다.

SEB 활성화는 농도 의존적으로 표적 세포 사멸을 증가시켰습니다. 이는 사용된 모든 SEB 농도에서 CD3+ T 세포의 활성화(CD69, CD25 및 HLA-DR) 및 소진(PD-1, LAG-3 및 TIM-3) 마커의 높은 발현과 함께 나타났습니다.