T 세포 피로 | 세포 및 사이토카인 프로파일링

T 세포 피로

T 세포 피로는 만성 자극으로 인한 T 세포 기능 장애를 설명하는 광범위한 용어입니다. 피로한 T 세포는 PD-1, LAG-3, TIM-3와 같은 억제성 마커의 과발현과 함께 염증성 사이토카인(IFNγ 및 TNFα) 방출 능력 저하와 같은 고유한 표현형을 나타냅니다. 피로는 일반적으로 종양 미세환경에서 발생하며, T 세포가 세포독성 기능을 상실하고 암세포를 죽이는 능력을 상실하게 됩니다.

체크포인트 억제 항체를 포함한 CAR-T 세포 생산과 같이 피로 상태를 되돌리거나 극복하는 데 많은 관심이 있습니다. T 세포 피로 문제-해결 시나리오를 시뮬레이션할 수 있다면 이 현상에 대해 더 깊은 통찰력을 제공할 수 있습니다.

견적 요청

분석 개념

단일 웰에서 T 세포 피로, 증식 및 사이토카인 방출을 측정하는 다중 접근법

T 세포 표현형은 3가지 소모성 마커의 발현을 프로파일링합니다: PD-1 (초기), LAG-3 (중기), TIM-3 (후기). 2가지 효과 사이토카인(IFNg와 TNFα)도 동일한 웰에서 샌드위치 면역측정법 형식의 2중 Qbeads를 사용하여 정량됩니다. T 세포 증식 또는 인코딩된 표적 세포의 동시 측정은 선택 사항입니다(이 그림에는 포함되지 않음).

표면 단백질 및 사이토카인 발현 동시 정량

그림 2. 피로한 T 세포는 억제성 수용체를 과발현하고 낮은 농도의 효과 사이토카인 TNFα를 생성한다

비피로(즉, 사전 자극 없음) 또는 사전 피로 CD3+ T 세포를 200K/well로 파종했다. 피로한 T 세포는 Dynabeads CD3/CD28(1:1 비드-대-세포 비율)로 자극받고 파종 전에 2-3일마다 재자극되었다(총 5회 자극). 웰 내 활성화는 다양한 밀도의 Dynabeads CD3/CD28로 유도되었다. 대조군 웰에는 Dynabeads가 포함되지 않았다. 24시간 후, 10uL 샘플을 iQue^® 인간 T 세포 피로 키트를 사용하여 iQue^® 3 고처리량 스크리닝(HTS) 플랫폼에서 분석했다.

생리학적으로 관련성 있는 모델에서 T 세포 활성화 상태에 대한 추가적인 생물학적 통찰 얻기

그림 3. LAG-3 과발현이 3일 동안 피로한 T 세포에 지속됨

비피로(즉, 사전 자극 없음) 또는 사전 피로 CD3+ T 세포를 200K/well로 파종했습니다. 피로한 T 세포는 Dynabeads CD3/CD28(1:1 비즈-대-세포 비율)로 반복적으로 자극(총 5회, 2-3일마다) 받았습니다. 웰 내에서 활성화는 Dynabeads CD3/CD28로 유도되었습니다. 매 24시간마다 10uL 샘플을 iQue^® Human T Cell Exhaustion Kit를 사용하여 분석했습니다.

사용 및 해석이 쉬움; 사전 정의된 게이팅 전략

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최소한의 샘플 조작: 저용량, 한 번의 세척, 희석 없음

단순한 프로토콜로, 세포와 상층액을 하나의 샘플로 취하여 간소화된 워크플로우를 가능하게 합니다.
라벨링 또는 보상 최적화 단계가 필요하지 않습니다.

. iQue^® 인간 T 세포 고갈 키트를 사용하여 T 세포 표현형과 사이토카인 방출을 분석하기 위한 쉬운 프로토콜입니다.

타겟 세포를 분석에 포함시킬 수 있도록 수정된 프로토콜을 쉽게 따를 수 있습니다. iQue^® 휴먼 T 세포 고갈 키트를 사용하여 T 세포 표현형과 사이토카인 방출 분석 가능

자주 묻는 질문

CD3/CD28 비드를 사용하여 T 세포 피로를 유도하면 해당 비드가 iQue Qbeads^® 검출을 방해할까요?

자기 비드를 사용하여 T 세포 피로를 유도하는 경우, iQue^® 고처리량 스크리닝(HTS) 사이토미터에서 샘플을 수집하기 전에 비드를 제거할 필요가 없습니다. 분석을 수행하면 세포는 더 작은 크기의 비드에서 게이팅되고, TNFα 및 IFNγ를 검출하는 iQue Qbeads^®만 사전 게이팅된 템플릿을 통해 분석되어 신속하게 결과를 얻을 수 있습니다.

이 키트를 세포독성 기능 측면에서 T-피로 역전을 보여주는 데 사용할 수 있습니까?

이 키트는 T 세포 피로 마커의 역전과 피로한 세포보다 높은 수준의 IFNγ 및 TNFα를 생성하는 기능적 능력을 보여줄 수 있지만, 세포독성의 직접적인 측정은 iQue^® 인간 T 또는 NK 세포 킬링 키트나 세포독성을 직접 측정하는 다른 방법을 통해 더 잘 보여줄 수 있습니다.

이 분석 프로토콜이 세포 수에 따라 달라집니까? 몇 개의 세포를 나타낼 수 있습니까?

iQue^® HTS 플랫폼의 민감도와 분석 미세화 능력으로 인해, iQue^® 인간 T 세포 고갈 키트를 사용하여 단 몇 천 개의 고갈된 T 세포를 감지할 수 있습니다. 최소 1 x 10⁶ 세포/mL로 분석 플레이트를 설정하고 10 µL의 샘플을 분석 플레이트로 이동하는 것을 권장합니다. 이는 10,000개의 세포를 나타냅니다. 더 많은 세포 수가 필요한 경우 분석 조건을 최적화하거나 추가 세포 샘플을 수집해야 할 수 있습니다. iQue^® 데이터 획득 프로토콜은 필요한 경우 더 큰 샘플 볼륨을 쉽게 획득하도록 수정할 수 있습니다.

주문 정보

iQue^® 인간 T 세포 고갈 키트
플랫폼	iQue와 호환^®3 / iQue^®스크리너 플러스 - VBR 구성
사용 가능한 크기	카탈로그 번호	지금 주문
1 x 96 well	97069	iQue^®인간 T 세포 피로 키트
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