T세포 소진 | 세포 및 사이토카인 프로파일링

T세포 고갈

T세포 소진은 만성적인 자극으로 인해 발생하는 T세포 기능 장애를 포괄적으로 설명하는 용어입니다. 소진된 T세포는 PD-1, LAG-3, TIM-3과 같은 억제 표지자의 과발현 및 염증성 사이토카인(IFNγ 및 TNFα) 분비 능력 저하를 포함한 특징적인 표현형을 나타냅니다. 소진은 일반적으로 종양 미세환경에서 발생하며, 이곳에서 T세포는 세포독성 기능을 상실하고 암세포를 사멸시키는 능력이 저하됩니다.

특히 면역관문억제 항체를 포함하는 CAR-T 세포 생산에서 T 세포 소진 상태를 역전시키거나 극복하는 데 많은 관심이 집중되고 있습니다. T 세포 소진 문제 해결 시나리오를 시뮬레이션할 수 있다면 이 현상에 대한 더 깊은 통찰력을 얻을 수 있을 것입니다.

견적 요청

분석 개념

단일 웰에서 T 세포 소진, 증식 및 사이토카인 방출을 측정하는 다중 분석법.

^®T 세포 표현형은 PD-1(초기), LAG-3(중기), TIM-3(후기)의 세 가지 소진 마커 발현을 기준으로 분석됩니다. 두 가지 효과기 사이토카인(IFNγ 및 TNFα) 또한 동일한 웰에서 샌드위치 면역 분석법을 이용하여 2-plex Qbeads로 정량화됩니다. T 세포 증식 또는 암호화된 표적 세포의 동시 측정은 선택 사항입니다(본 그림에는 포함되지 않음).

주요 장점

표면 단백질과 사이토카인 발현을 동시에 정량화합니다.
생리학적으로 적합한 모델을 통해 T세포 소진 상태에 대한 추가적인 생물학적 통찰력을 얻으십시오.
사용 및 해석이 간편하며, 사전 정의된 게이팅 전략을 제공합니다.
최소한의 시료 조작: 소량, 1회 세척, 희석 없음, 혼합 후 판독

표면 단백질과 사이토카인 발현을 동시에 정량화합니다.

그림 2. 탈진한 T 세포는 억제 수용체를 과발현하고 효과기 사이토카인인 TNFα를 낮은 농도로 생성한다.

자극을 받지 않은(즉, 사전 자극이 없는) CD3+ T 세포 또는 자극을 받은 CD3+ T 세포를 웰당 20만 개씩 접종했습니다. 자극을 받은 T 세포는 접종 전에 Dynabeads CD3/CD28(비드 대 세포 비율 1:1)로 자극하고 2~3일 간격으로 재자극(총 5회 자극)했습니다. 웰 내 활성화는 Dynabeads CD3/CD28의 밀도를 다양하게 조절하여 유도했습니다. 대조군 웰에는 Dynabeads를 넣지 않았습니다. 24시간 후, 10μL 샘플을 iQue^® Human T Cell Exhaustion Kit를 사용하여 iQue^® 3 고처리량 스크리닝(HTS) 플랫폼에서 분석했습니다.

생리학적으로 적합한 모델에서 T 세포 활성화 상태에 대한 추가적인 생물학적 통찰력을 얻으세요.

그림 3. LAG-3 과발현은 탈진된 T 세포에서 3일 이상 지속된다.

자극을 받지 않은(즉, 사전 자극이 없는) 또는 사전 자극을 받은 CD3+ T 세포를 웰당 20만 개씩 접종했습니다. 자극을 받은 T 세포는 Dynabeads CD3/CD28(비드 대 세포 비율 1:1)을 사용하여 반복적으로 자극했습니다(총 5회, 2~3일 간격). 웰 내에서 Dynabeads CD3/CD28을 이용하여 활성화를 유도했습니다. 24시간마다 10μL 샘플을 iQue^® Human T Cell Exhaustion Kit를 사용하여 분석했습니다.

사용 및 해석이 간편하며, 사전 정의된 게이팅 전략을 제공합니다.

그림 4. iQue Forecyt의 사전 설정된 게이트^®소진된 T 세포 하위 집단의 자동 표현형 분석을 가능하게 합니다.

최소한의 시료 조작: 소량, 1회 세척, 희석 없음

세포와 상층액을 하나의 샘플로 채취하는 간단한 프로토콜로, 효율적인 워크플로우를 가능하게 합니다.
별도의 라벨링이나 보정 최적화 단계가 필요하지 않습니다.

iQue^® 인간 T세포 소진 키트를 사용하여 T세포 표현형 및 사이토카인 분비를 분석하는 간편한 프로토콜입니다.

표적 세포를 분석에 포함할 수 있도록 수정된 간편한 프로토콜입니다. iQue^® 인간 T 세포 소진 키트를 사용하여 T 세포 표현형 및 사이토카인 분비를 분석할 수 있습니다.

자주 묻는 질문(FAQ)

CD3/CD28 비드를 사용하여 T 세포 소진을 유도할 경우, 해당 비드가 iQue Qbeads^® 검출에 영향을 미칠까요?

T 세포 소진을 유도하기 위해 자성 비드를 사용하는 경우, iQue^® 고처리량 스크리닝(HTS) 유세포 분석기에서 샘플을 수집하기 전에 비드를 제거할 필요가 없습니다. 분석을 수행하면 크기가 작은 비드는 자동으로 걸러지고, TNFα 및 IFNγ 사이토카인을 검출하는 iQue Qbeads^®만 사전 설정된 템플릿을 통해 분석되어 신속하게 결과를 얻을 수 있습니다.

이 키트를 사용하여 세포독성 기능 능력에서 T 세포 고갈 역전을 보여줄 수 있을까요?

이 키트는 T 세포 소진 표지자의 역전과 소진된 세포에 비해 IFNγ 및 TNFα 수치가 증가된 기능적 능력을 보여줄 수 있지만, 세포 독성에 대한 직접적인 측정은 당사의 iQue^® 인간 T 또는 NK 세포 사멸 키트 또는 세포 독성을 직접 측정하는 다른 방법을 사용하여 해당 기능적 특성을 조사하는 것이 더 효과적입니다.

이 분석 프로토콜은 세포 수에 따라 달라지나요? 그렇다면 이 프로토콜은 얼마나 많은 세포를 나타낼 수 있을까요?

iQue^® HTS 플랫폼의 높은 감도와 소형화된 분석법 구현 능력 덕분에 iQue^® 인간 T세포 소진 키트를 사용하면 수천 개의 소진된 T세포도 검출할 수 있습니다. 분석 플레이트는 최소 1 x 10⁶ 세포/mL 농도로 설정하고, 해당 샘플 10 µL(10,000개 세포에 해당)를 플레이트에 옮기는 것을 권장합니다. 분석에 더 많은 세포 수가 필요한 경우, 분석 조건을 최적화하거나 더 많은 세포 샘플을 채취해야 할 수 있습니다. 필요에 따라 iQue^® 데이터 수집 프로토콜을 수정하여 더 많은 샘플 용량을 처리할 수 있습니다.

주문 정보

iQueHuman T 세포 소진 키트^®
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