구형체 T-세포 살해 분석에서 T-세포 표현형 및 기능 평가

3D 종양 모델에서 T 세포 반응을 재현 가능하고 쉽게 따라할 수 있는 프로토콜을 사용하여 평가

그림 1b. 분석 워크플로우 - iQue^® HTS 플랫폼을 사용하여 구형체 살해 분석에서 T 세포 분석을 위한 프로토콜

3D 고급 세포 모델에서 종양 세포 살해 중 T 세포의 표현형과 기능 구별

Incucyte^® Nuclight 녹색 표지된 MDA-MB-231 세포(2.5K/well)를 2.5% Matrigel^®이 포함된 ULA 플레이트에 파종하고 구상체 형성을 촉진하기 위해 72시간 동안 배양했습니다. 비표지 PBMC를 5:1 효과세포-표적세포 비율(E__PH_0__)로 추가하고 ImmunoCult™ 인간 CD3/CD28/CD2 T 세포 활성화제로 활성화를 유도했습니다. 1일, 3일, 7일에 동일한 플레이트를 해리하고 iQue^® 인간 T 세포 킬링 키트를 사용하여 T 세포 표현형을 분석했습니다. 표적 세포 생존율은 Immunocult의 최고 농도에서 1일부터 7일까지 감소했습니다. T 세포 활성화 및 피로 마커의 발현은 1일부터 3일까지 증가한 후 7일에 감소했습니다. T 세포 매개 종양 세포 사멸을 유도하는 데 직접 관여하는 프로테아제인 Granzyme B의 방출은 Immunocult 농도와 함께 증가했습니다.

BT474 (2.5K/well) 구형체는 72시간 동안 형성된 후 PBMCs (12.5K/well)와 CD3/CD28 다이나비즈가 추가되었습니다. 상층액 샘플(10 µL)은 1일, 4일, 8일에 채취되었으며 사이토카인 농도는 iQue Qbeads^®를 사용하여 분석되었습니다. T 세포 활성화를 나타내는 사이토카인인 IFNγ와 TNFα의 농도는 시간이 지남에 따라 그리고 다이나비즈 밀도와 함께 증가했습니다. 세포독성 림프구에 의한 표적 세포 살해에 직접적으로 관여하는 과립효소 B 단백분해효소의 방출도 증가했습니다. T 기억 세포 형성 빈도와 연관된 사이토카인인 IL-10의 생산은 4일까지 증가한 후 8일에 감소했습니다.

신속한 샘플링 속도는 증가된 복제, 다중 키트 분석 및 고처리량 정량화를 용이하게 함

Incucyte^® Nuclight 녹색 표지된 BT474 (2.5K/well) 구상체는 72시간 동안 형성된 후 PBMCs (12.5K/well)와 CD3/CD28 Dynabeads가 추가되었습니다. 복제 플레이트의 세포들은 iQue^® Human T 세포 활성화, 살해 및 소진 키트를 사용하여 1, 4, 8일에 분석되었습니다. 생존 CD3+ 집단의 CD25+ 세포 플레이트 뷰 플롯. 표적 세포 생존율은 시간에 따라 감소했습니다. 초기 활성화 마커 CD69의 발현은 1일에 처음 증가한 후 4일에 감소했습니다. 후기 활성화 마커인 CD25의 발현은 4일과 8일에 증가했습니다. T 세포 소진의 초기 지표인 PD-1의 발현은 4일에 가장 높았습니다.

신속한 샘플링 속도는 증가된 복제, 다중 키트 분석 및 고처리량 정량화를 용이하게 함

BT474 구상체(2.5K/well)를 효과세포 대 표적세포 비율 5:1로 PBMCs와 함께 배양하고 CD3/CD28 Dynabeads로 활성화를 유도했습니다. 24시간 후 iQue^® 인간 T 세포 기억 키트를 사용하여 분석을 수행했습니다. 키트에서 제공하는 템플릿을 사용하여 Tscm(줄기 세포 기억) 및 Tte(최종 효과) 게이팅을 강조한 플롯입니다. iQue Forecyt^® 소프트웨어에서 직접 내보낸 히트맵 및 농도 반응 곡선은 Dynabead 농도 증가에 따라 초기 Tscm(줄기 세포 기억) 표현형에서 후기 Tte(최종 효과) 표현형으로의 전환을 보여줍니다. 이러한 전환은 T 세포의 자가 재생 능력 상실과 함께 나타납니다.