구형체 T세포 사멸 분석에서 T세포 표현형 및 기능 평가

재현 가능하고 따라하기 쉬운 프로토콜을 사용하여 구형체를 부드럽게 분리함으로써 고형 종양에 대한 T 세포 반응을 평가합니다.

그림 1b. 분석 워크플로우 - iQue^® HTS 플랫폼을 사용한 스페로이드 살해 분석에서 T 세포 분석 프로토콜.

3D 첨단 세포 모델에서 종양 세포 사멸 과정 중 T 세포의 표현형과 기능을 규명합니다.

Incucyte^® Nuclight green으로 표지된 MDA-MB-231 세포(웰당 2.5K개)를 2.5% Matrigel^®가 담긴 ULA 플레이트에 접종하고 72시간 동안 배양하여 스페로이드 형성을 유도했습니다. 표지되지 않은 PBMC를 5:1의 이펙터 대 타겟 비율(E:T)로 첨가하고 ImmunoCult™ Human CD3/CD28/CD2 T Cell Activator를 사용하여 활성화를 유도했습니다. 1일, 3일, 7일에 동일한 플레이트를 분리하고 iQue^® Human T Cell Killing Kit를 사용하여 T 세포 표현형을 분석했습니다. ImmunoCult의 최고 농도에서 타겟 세포의 생존율은 1일에서 7일로 갈수록 감소했습니다. T세포 활성화 및 소진 표지자의 발현은 1일에서 3일 사이 증가하다가 7일째에는 감소했다. T세포 매개 종양세포 사멸 유도에 직접적으로 관여하는 프로테아제인 그랜자임 B의 방출량은 이뮤노컬트 농도가 증가함에 따라 증가했다.

BT474 세포(웰당 2.5K개)로 스페로이드를 72시간 동안 배양한 후, PBMC(웰당 12.5K개)와 CD3/CD28 다이나비드를 첨가했습니다. 1일, 4일, 8일에 상층액 샘플(10µL)을 채취하여 iQue Qbeads^®를 이용하여 사이토카인 농도를 분석했습니다. T세포 활성화를 나타내는 사이토카인인 IFNγ와 TNFα의 농도는 시간 경과 및 다이나비드 밀도 증가에 따라 모두 증가했습니다. 세포독성 림프구에 의한 표적 세포 사멸에 직접적으로 관여하는 그란자임 B 프로테아제의 방출량 또한 증가했습니다. T 기억 세포 형성 빈도와 연관된 사이토카인인 IL-10의 생성량은 4일까지 증가하다가 8일째에는 감소했습니다.

빠른 샘플링 속도는 반복 측정, 다중 키트 분석 및 고처리량 정량 분석을 용이하게 합니다.

Incucyte^® Nuclight green으로 표지된 BT474 스페로이드(웰당 2.5K개)를 72시간 동안 배양한 후, PBMC(웰당 12.5K개)와 CD3/CD28 Dynabeads를 첨가했습니다. 복제 플레이트의 세포를 iQue^® 인간 T 세포 활성화, 사멸 및 소진 키트를 사용하여 1일, 4일, 8일에 분석했습니다. 플레이트 뷰 플롯은 생존 CD3+ 세포 집단에서 CD25+ 세포의 비율을 보여줍니다. 표적 세포의 생존율은 시간이 지남에 따라 감소했습니다. 초기 활성화 마커인 CD69의 발현은 1일째에 증가했다가 4일째에 감소했습니다. 후기 활성화 마커인 CD25의 발현은 4일과 8일째에 증가했습니다. T 세포 소진의 초기 지표인 PD-1의 발현은 4일째에 가장 높았습니다.

빠른 샘플링 속도는 반복 측정, 다중 키트 분석 및 고처리량 정량 분석을 용이하게 합니다.

BT474 스페로이드(웰당 2.5K개)를 5:1의 이펙터 대 타겟 비율(E:T)로 PBMC와 함께 배양하고 CD3/CD28 다이나비드를 사용하여 활성화를 유도했습니다. 24시간 후 iQue^® Human T Cell Memory Kit를 사용하여 분석을 수행했습니다. 키트에 제공된 템플릿을 사용하여 Tscm(줄기세포 기억) 및 Tte(말단 이펙터) 게이팅을 강조한 그래프를 제시합니다. iQue Forecyt^® 소프트웨어에서 직접 내보낸 히트맵과 농도 반응 곡선은 다이나비드 농도가 증가함에 따라 Tscm(줄기세포 기억) 초기 표현형에서 Tte(말단 이펙터) 후기 표현형으로의 전환을 보여줍니다. 이러한 전환은 T 세포의 자가 재생 능력 상실을 동반합니다.