Incucyte^® 실시간 세포 이미징 및 분석으로 항체 내재화 연구를 최적화하세요.

Incucyte^® Fabfluor-pH 항체 표지 시약과 자동 분석 도구를 사용하여 시간에 따른 항체 내재화를 손쉽게 시각화하고 측정할 수 있습니다.

HT1080 세포에 Incucyte^® Fabfluor-pH로 표지된 α-CD71 또는 IgG1 동형 대조군(4 µg/mL)을 처리한 후, 10배율로 12시간 동안 30분 간격으로 HD 위상 및 적색 형광 이미지를 촬영하였다. Fabfluor-α-CD71로 처리한 세포에서는 세포질에 적색 형광이 나타났다(A). 표지된 동형 대조군으로 처리한 세포에서는 세포 내 형광이 관찰되지 않았다(B). 시간에 따른 적색 영역 변화는 자동으로 생성되었으며, 표지된 α-CD71로 처리한 세포에서는 적색 영역이 급격히 증가하는 반면, 동형 대조군에서는 신호가 나타나지 않았다(C). 이미지는 처리 후 6시간째에 촬영한 것으로, 데이터는 3개 웰의 평균값 ± 표준오차(SEM)로 나타냈다.

세포 표면 항원 발현에 따라 다양한 세포 유형에서 나타나는 세포 내재화 반응의 차이점을 구분하십시오.

Jurkat(T 세포 유사) 및 Raji(B 세포 유사) 세포(30,000개/웰)에 다양한 Incucyte^® Fabfluor-pH 표지 항체(4 µg/mL)를 처리하여 특이성을 확인했습니다. HD 위상차 및 적색 형광 이미지는 20배율 대물렌즈를 사용하여 12시간 동안 30분 간격으로 촬영했습니다. 시간 경과 데이터 A와 B는 두 세포주 모두에서 테스트된 마커의 예상 발현 프로파일과 일치하는 반응 프로파일을 보여주며, 특정 항원이 발현될 때만 세포 내 유입 반응이 나타남을 확인시켜 줍니다. 이 분석법은 Jurkat 세포와 비교하여 Raji 세포의 반응 차이(α-CD71에 대한 반응 곡선이 더 가파르고 따라서 세포 내 유입 속도가 더 빠름)를 구별할 수 있습니다. 곡선 아래 면적(AUC) 분석은 두 세포주 모두에서 전반적인 프로파일을 보여줍니다(C). 모든 데이터는 최소 4개 웰의 평균값 ± 표준오차(SEM)로 표시되며, 시간 경과 데이터는 정규화된 적색 면적으로 표시됩니다.

농도 의존적 반응을 밝히고 약리학적 분석을 수행합니다.

BT-474 Her2 양성 세포에 Fabfluor-pH로 표지된 허셉틴을 다양한 농도로 처리하고 간단한 혼합 및 판독 프로토콜을 사용했습니다. 시간 경과 그래프는 허셉틴 농도가 증가함에 따라 정규화된 붉은색 면적이 시간에 따라 증가하는 것을 보여줍니다(A). 이 반응에 대한 곡선 아래 면적 분석은 323 ng/mL의 EC50 값을 갖는 명확한 농도 의존적 반응을 나타냅니다(B). 모든 데이터는 3개 웰의 평균값과 표준오차(SEM)로 표시되었으며, 시간 경과 데이터는 정규화된 붉은색 면적으로 나타냈습니다.