Incucyte^® 생세포 이미징 및 분석으로 항체 내재화 연구 최적화

Incucyte^® Fabfluor-pH 항체 라벨링 시약과 자동화된 분석 도구를 사용하여 시간에 따른 항체 내재화를 쉽게 시각화하고 측정할 수 있습니다.

HT1080 세포를 Incucyte^® Fabfluor-pH 표지된 α-CD71 또는 IgG1 동형 대조군(4 µg/mL)으로 처리하였으며, HD 위상 및 적색 형광 이미지를 10배 배율로 12시간 동안 30분마다 캡처했습니다. Fabfluor-α-CD71로 처리된 세포의 이미지는 세포질에 적색 형광을 보여줍니다(A). 표지된 동형 대조군으로 처리된 세포는 세포 형광이 없습니다(B). 적색 객체 영역은 자동으로 생성되어, 표지된 α-CD71로 처리된 세포에서 급격한 증가를 보이고 동형 대조군에서는 신호가 없음을 나타냅니다(C). 이미지는 처리 후 6시간에 촬영되었으며, 데이터는 3개 웰의 평균 ± SEM으로 표시됩니다.

세포 표면 항원 발현에 의해 구동되는 여러 세포 유형 간의 내재화 반응 차이를 구별합니다.

Jurkat(T 세포 유사) 및 Raji(B 세포 유사) 세포(30K/웰)를 다양한 Incucyte^® Fabfluor-pH 표지된 항체(4 µg/mL)로 처리하여 특정 특성을 보여주었습니다. HD 위상 및 적색 형광 이미지를 20배 대물렌즈로 12시간 동안 30분마다 캡처했습니다. 시간 경과 데이터 A & B는 두 세포주에서 테스트된 마커의 예상 발현 프로파일과 일치하는 반응 프로파일을 보여주며, 특정 항원이 발현될 때만 내재화 반응이 존재함을 확인합니다. 이 분석법은 Raji 세포의 반응 차이(α-CD71에 대해 더 가파른 반응 곡선 및 따라서 더 빠른 내재화 속도)를 Jurkat 세포와 비교하여 구별할 수 있습니다. 곡선 아래 면적(AUC) 분석은 두 세포주의 전체 프로파일을 보여줍니다(C). 모든 데이터는 최소 4개 웰의 평균 ± SEM으로 표시되며, 시간 경과 데이터는 정규화된 적색 영역으로 표시됩니다.

농도 의존적 반응을 밝히고 약리학적 분석 수행

BT-474 Her2 양성 세포를 단순한 혼합 및 판독 프로토콜을 사용하여 Fabfluor-pH 표지된 Herceptin의 증가하는 농도로 처리했습니다. 시간 경과 그래프는 Herceptin 농도 증가에 따른 정규화된 적색 영역의 증가를 보여줍니다 (A); 이 반응의 곡선 아래 면적 분석은 EC50이 323 ng/mL인 명확한 농도 의존적 반응을 보여줍니다 (B). 모든 데이터는 3개 웰의 평균 ± 표준 오차로 표시되며, 시간 경과 데이터는 정규화된 적색 영역으로 나타냅니다.