싸토리우스 인큐사이트® 항체 내재화 분석을 위한 생세포 분석
현재 연구 및 치료 현황
항체 내재화의 진화하는 치료적 영향은 항체 발견 분야와 표적 매개 내재화를 포함하며, 여기에는 항체-약물 접합체(ADCs)를 통한 고독성 약물의 암세포 전달, 암세포의 표면 수용체 제거 또는 분해(예: EGFR), 그리고 면역세포 살해를 위해 종양 세포를 식별하는 데 사용되는 항체 면역치료(예: ADCC 또는 ADCP)가 포함됩니다. 또한, 항체 제거와 같은 항체에 대한 기능적 반응을 측정하고 최적화하는 것이 중요합니다. 항체의 주요 제거 경로 중 하나인 피노시토시스는 항체 개발 중 정성적 약동학 측정을 위한 항체 최적화를 필요로 합니다.
각 접근법은 종양 세포 식별을 위한 세포 표면 유지 또는 ADC 전달 시 신속한 내재화와 같은 항체 특성의 일련의 요구사항이 있으므로, 최적의 항체 엔지니어링 및 내재화 특성을 위해 항체 후보의 흡수 프로파일과 제거를 이해하는 것이 중요합니다.
기존 방법의 확장 및 개선
현재 접근법은 각 항체의 노동 집약적 라벨링, 세척 단계, 그리고/또는 단일 시점 분석에 제한되어 있습니다. 이는 불필요하고 긴 프로세스, 세포 손실, 또는 단일 시점 분석의 한계로 인한 놓치거나 부정확한 측정으로 이어질 수 있습니다. 따라서 전체 항체 스크리닝 및 기능적 특성화 과정에서 실시간 생세포 분석을 사용하여 항체 내재화를 완전하고 신속하게 정량화할 수 있는 효율적이고 저렴한 방법이 절실히 필요합니다.
솔루션
싸토리우스는 항체의 신속하고 동적이며 고처리량 분석을 위해 인간, 마우스 및 랫드 테스트 항체와 호환되는 혁신적인 솔루션을 제공하게 되어 자랑스럽습니다 (Incucyte® Fabfluor-pH 레드 또는 오렌지 항체 라벨링 염료 활용).
데모 요청
시간에 따른 항체 내재화를 쉽게 시각화하고 측정하며, 다양한 세포 유형 간 내재화 프로파일의 차이 구분
아래 예시 데이터 참조
믹스-앤-리드 프로토콜과 결합하여 항체 패널의 효율적인 테스트 수행
96웰 또는 384웰 형식으로 대량의 항체를 스크리닝하여 일관된 세포 특이적 내재화 반응 데이터 생성 및 테스트 항체의 완전한 특성 규명
싸토리우스의 Incucyte® Fabfluor-pH 항체 표지 시약과 자동화된 분석 도구를 사용하여 항체 내재화를 쉽고 명확하게 시각화하고 측정할 수 있습니다.
HT1080 세포를 Incucyte® Fabfluor-pH로 표지된 α-CD71 또는 IgG1 동형 대조군(4 µg/mL)으로 처리했으며, HD 위상 및 적색 형광 이미지를 10배 배율로 12시간 동안 30분마다 캡처했습니다. Fabfluor-α-CD71로 처리된 세포 이미지는 세포질에 적색 형광을 보여줍니다(A). 표지된 동형 대조군으로 처리된 세포는 세포 형광이 없습니다(B). 시간에 따른 적색 객체 영역이 자동으로 생성되어, 표지된 α-CD71로 처리된 세포의 빠른 증가와 동형 대조군의 신호 없음을 보여줍니다(C). 이미지는 처리 후 6시간에 촬영되었으며, 데이터는 3개 웰의 평균 ± 표준 오차로 표시됩니다.
세포 표면 항원 발현에 의해 구동되는 다양한 세포 유형에서 내재화 반응의 차이를 구별하다.
Jurkat (T 세포 유사) 및 Raji (B 세포 유사) 세포(30K/well)를 다양한 Incucyte® Fabfluor-pH 표지 항체(4 µg/mL)로 처리하여 특정 특성을 보여주었다. HD 위상 및 적색 형광 이미지를 20배 대물렌즈로 12시간 동안 30분마다 캡처했다. 시간 경과 데이터 A & B는 두 세포주에서 테스트된 마커의 예상 발현 프로파일과 일치하는 반응 프로파일을 보여주며, 특정 항원이 발현될 때만 내재화 반응이 존재함을 확인한다. 이 분석법은 Raji 세포의 반응 차이(α-CD71에 대해 더 가파른 반응 곡선 및 따라서 더 빠른 내재화 속도)를 Jurkat 세포와 비교하여 구별할 수 있다. 곡선 아래 면적(AUC) 분석은 두 세포주의 전체 프로파일을 보여준다(C). 모든 데이터는 최소 4개 웰의 평균 ± SEM으로 표시되며, 시간 경과 데이터는 정규화된 적색 영역으로 표시된다.
농도 의존적 반응을 밝히고 약리학적 분석을 수행하다.
BT-474 Her2 양성 세포를 간단한 혼합 및 판독 프로토콜을 사용하여 Fabfluor-pH로 표지된 허셉틴의 농도를 점진적으로 처리했습니다. 시간 경과 그래프는 허셉틴 농도 증가에 따른 정규화된 적색 영역의 증가를 보여줍니다 (A); 이 반응의 곡선 아래 면적 분석은 EC50이 323 ng/mL인 명확한 농도 의존적 반응을 보여줍니다 (B). 모든 데이터는 3개 웰의 평균 SEM으로 표시되며, 시간 경과 데이터는 정규화된 적색 영역으로 표시됩니다.
여러 테스트 항체를 신속하게 표지한 후 항체 내재화를 측정하기 위해 간단히 혼합하고 판독합니다. 표지 최적화 또는 세척 단계가 필요하지 않습니다. 항체 패널 표지는 15분 이내에 수행될 수 있습니다.
96- 또는 384-웰 형식으로 대량의 항체를 스크리닝하여 일관된 세포 특이적 내재화 반응 데이터를 생성하고 테스트 항체를 완전히 특성화합니다.
Incucyte® Fabfluor-pH 라벨링된 항체로 강력한 기능성 항체 스크리닝을 달성하세요.
두 개의 다른 공급업체에서 온 1a 및 1b 클론을 포함한 6개의 서로 다른 CD71 항체가 HT1080 세포에서 동시에 테스트되었습니다. 항체들은 세포에 추가되기 전에 싸토리우스® Fabfluor-pH 항체 표지 시약으로 단일 단계에서 표지되었으며, 12시간 동안 30분마다 10배 확대로 내재화 신호가 캡처되었습니다. 싸토리우스에서 촬영된 플레이트 뷰는 11열과 12열의 명확한 양성 및 음성 대조군 반응과 두 플레이트에 걸친 각 항체의 농도 의존적 반응을 보여줍니다(A). 12시간의 대조군 반응은 Z' 값 0.86과 0.77을 생성하는 명확한 양성 반응을 보여줍니다(B). 항체 데이터의 동시 분석은 이러한 클론 간의 다양한 반응을 보여줍니다(B). 모든 데이터는 3개 웰의 평균 +SEM으로 표시되며, 대조군은 8개 웰의 평균으로 표시됩니다.
싸토리우스® 항체 내재화 분석은 조직 배양 배양기 내에서 실시간으로 96웰 형식으로 항체 내재화를 자동으로 시각화하고 정량화할 수 있는 통합 솔루션을 제공합니다. 싸토리우스® Fabfluor-pH 항체 표지 염료는 pH 감지 형광 프로브에 결합된 Fc 영역 타겟 Fab 단편으로, 많은 수의 항체 내재화를 비교하기 위한 간단하고 즉시 사용 가능한 방법을 제공하며 산업용 항체 약물 발견 과정 전반에 걸쳐 사용할 수 있습니다.
비디오: Incucyte® 생세포 분석 시스템과 Incucyte® Fabfluor-pH 항체 표지 염료를 이용한 항체 내재화의 동역학적 모니터링
싸토리우스의 허셉틴은 BT-474 세포에서 12시간 동안 양성 반응(적색 형광으로 측정)을 보여줍니다. IgG 아이소타입은 음성 대조군으로 사용되었습니다.
형광 현미경
통합 분석
믹스 & 리드 프로토콜
96-웰 처리량
실시간 세포 시각화
고감도
속도 측정
Incucyte® 라이브 세포 분석 시스템과 기존 방법 간 비교, Incucyte® Fabfluor-pH와 다른 시약 및 직접 표지 방법 비교; Incucyte®의 장점 강조
라이브 세포 분석을 이용한 항체-약물 접합체 카드실라의 약리학적 특성 분석
실시간 라이브 세포 분석이 세포 생물학의 가능성과 워크플로우를 재정의하고 있습니다. 자세히 알아보세요.
인큐사이트는 생명과학 연구의 새로운 연구 영역을 탐구하고 질문에 답하는 데 도움을 줍니다.
예. 다양한 항체를 사용하여 일차 세포(예: PBMCs)를 포함한 여러 세포 유형(예: 라모스, 라지, 저킷)에서 항체 내재화를 측정했습니다. 표적 특이적 내재화의 경우, 항체 흡수 정도와 속도는 세포 표면의 항원(수용체) 발현 수준과 항체의 결합 특성을 포함한 다양한 변수에 따라 달라집니다.
Fc 영역이 있는 항체만 우리의 접근 방식과 호환됩니다. Fc 사슬이 없는 항체 단편은 작동하지 않을 것으로 예상됩니다.
예, 이 판독값은 사용 가능한 나머지 채널의 다른 판독값(예: 세포 건강 시약)과 다중화가 가능합니다.
아니요, 시약 자체는 무신호입니다. 세포 배지(pH 7.4)에서 형광을 발생시키지 않으며, 어떤 표면 항원과도 상호작용하여 내재화 반응을 유도하지 않습니다.
네, 반응 속도를 추정할 수 있지만, 먼저 데이터를 세포 수(위상 영역 정규화)와 항체 농도(각 시간대의 최대 반응에 대한 정규화)로 보정하는 것이 권장됩니다. 변환된 데이터를 시간에 대해 도시하면 그래프의 선형 부분 기울기로부터 속도를 결정할 수 있습니다(자세한 내용과 예시 데이터는 R&D에 문의하시기 바랍니다).
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