ATP Assay for Live-Cell Analysis

Incucyte ATP 분석을 통한 생세포 분석

ATP 분석

인큐사이트® ATP 분석은 기기, 소프트웨어, 시약으로 구성된 종합 솔루션으로, ATP를 직접 분석하여 암세포의 대사 변화를 이해할 수 있게 해줍니다. 이전에는 볼 수 없었던 대사 변화를 평가하세요!


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라이브 세포 이미징 및 분석을 사용한 세포 대사 조사

암세포는 종양 미세환경에서 증식과 생존을 지원하기 위해 대사적 재프로그래밍을 보입니다. 이 현상은 암의 특징으로 인정됩니다. 최근 연구들은 암세포와 암 관련 기질세포 간의 복잡한 관계를 이해하는 것의 중요성을 지적하며, 특히 대사적 공생이 어떻게 약물 저항성을 촉진하는지 평가합니다. 연구자들은 암 관련 대사 변화에 대한 지식을 확장하고 항암 치료법을 개발하기 위해 다양한 생물학적 기법을 사용합니다. 그러나 현재 기술은 세포가 증식하고 환경과 상호작용하는 동안 복잡한 암세포 모델의 대사 변화를 평가하는 데 제한적입니다.

대사 변화를 측정하는 기존 기법은 종종:

  • 복합 공동 배양 모델에서 세포 유형별 대사 변화를 구분할 수 없습니다
  • 대사 ATP 출력을 직접 측정하는 대신 대사의 간접적이고 부산물적 측정을 사용하기
  • 세포 형태학의 확인을 통합하지 않기
  • 동역학적 평가를 수행하는 대신 엔드포인트 분석하기
  • 생리학적으로 관련된 환경 조건을 통합하지 않음으로써 잠재적 인공물 도입하기

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Incucyte ATP 분석

고급 세포 모델에서 세포 유형별 장기 대사 변화를 구분할 수 있게 되었습니다

연속 이미징 및 분석을 통해 고급 모델의 세포 유형별 대사 변화에 대한 전례 없는 접근을 얻으세요. Incucyte® ATP 분석은 생리학적으로 관련된 조건에서 종양 세포 모델을 특성화하기 위해 세포질 ATP의 직접 측정을 허용합니다. SX5 대사 광학 모듈, Incucyte® ATP 분석 소프트웨어 모듈 및 Incucyte® CytoATP 렌티바이러스 시약 키트로 구성된 Incucyte® SX5 생세포 분석 시스템을 통해 실시간으로 세포 형태의 정성적 확인과 함께 세포 유형별 ATP 변화를 구분하세요.

주요 장점

  • - Incucyte® CytoATP 렌티바이러스 시약 키트를 사용하여 특허 출원 중인 유전자 인코딩 형광 ATP 지표 표현 - 다양한 세포 유형과 호환 가능
  • - 고급 세포 모델에서 세포 유형별 효과를 구분하기 위해 동적인 세포질 ATP 변화 포착 및 분석
  • - 치료의 영향에 대한 더 깊은 생물학적 통찰력을 위해 실시간 ATP 측정 생성 - 연결된 엔드포인트 불필요
  • - 모든 시점에서 고화질 위상 이미지로 세포 형태 변화 검사

새로운, 비교란성 시약

다양한 세포 유형에서 생세포 내 세포질 ATP의 직접적인 측정을 위한 Incucyte® CytoATP 렌티바이러스 시약 발현

HeLa 세포에 Incucyte® CytoATP 렌티바이러스를 감염시키고 안정적인 발현 집단을 생성하기 위해 푸로마이신 선별을 수행했습니다. CytoATP 발현 세포의 형태(A)와 증식(B)은 모세포와 비교하여 변화가 없었습니다. (C) CytoATP를 안정적으로 발현하는 HeLa 세포를 96웰 마이크로플레이트에 4,000세포/웰로 파종하고 2-데옥시-D-글루코스(2DG)와 포타슘 시안화물(KCN)의 복합 처리에 노출시켰습니다. 3시간 동안 캡처된 CytoATP 형광 이미지의 정량화 결과, 동시 해당작용과 산화적 인산화 차단으로 인한 빠르고 농도 의존적인 ATP 고갈을 보여줍니다.

세포 유형별 ATP 변화 분석

세포 유형별 세포질 ATP 변화를 자동으로 측정하고 시각화하여 동적 종양 환경에 대한 더 깊은 통찰력 제공.

삼중 음성 유방암(TNBC) 세포주 HCC1806과 수용체 양성 유방암 세포주 MCF7에 CytoATP 또는 CytoATP 비결합 대조군을 안정적으로 발현시키고, CCD14086SK 섬유아세포 존재 또는 부재 하에 배양(8K 세포/웰). 통합된 Incucyte® ATP 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 ATP의 세포 변화 식별(색상 스케일 마스킹). 마스킹된 이미지(A)는 단일 배양 및 CCD14086SK 세포와의 공배양 조건에서 1 µM CB-839로 처리된 HCC1806 세포의 ATP를 시각화합니다. 동역학 데이터는 단일 배양된 MCF-7(수용체 양성 세포주)과 비교하여 TNBC 세포주에서 CB-839 처리 후 더 지속적인 ATP 고갈을 보여줍니다(B). 그러나 간질 세포와의 공배양은 TNBC 세포에서 CB-839에 대한 저항성을 매개했으며, 수용체 양성 세포주는 차별적 효과를 보이지 않았습니다. IC50 곡선은 72시간(B) 및 15시간(C) 시점의 데이터를 나타냅니다.

ATP 동역학의 시간적 연구 수행

처리에 대한 단기 및 장기 ATP 동역학에 대한 더 깊은 생물학적 통찰력을 얻기 위한 실시간 대사 데이터 생성

NIH 3T3 세포를 CytoATP 또는 비결합 대조군으로 안정적으로 발현시켜 표준 조건(포도당) 또는 포도당 대신 갈락토스가 포함된 성장 배지(갈락토스)에서 배양하여 에너지 대사를 위한 산화적 인산화에 의존하도록 했습니다. 96웰 마이크로플레이트에 12K 세포/웰로 파종하고 형광 이미지(10배)를 비독성(암브리센탄), 세포독성(클로르프로마진) 또는 미토독성(네파조돈) 화합물로 처리했습니다. 동역학 데이터는 세포독성 또는 미토독성 화합물로 처리된 세포에서 ATP의 빠른 고갈을 보여줍니다. 세포독성 화합물에 대한 반응은 두 배지 조건에서 유사하지만, 갈락토스에서 자란 세포의 네파조돈 IC50의 왼쪽 이동은 미토콘드리아 독성을 나타냅니다. 초기 시점에서 더 큰 분리 정도가 관찰되어, 동역학적 CytoATP 데이터가 화합물 프로파일 평가에 추가적인 통찰력을 제공할 수 있음을 보여줍니다.

세포 형태 변화 확인

세포 형태의 변화를 ATP 대사와 연관시켜 세포 행동의 유용하고 시간에 따른 변화를 밝힙니다.

HeLa 세포를 CytoATP 또는 비결합 대조군으로 안정적으로 발현시켜 96웰 마이크로플레이트에 2K - 8K 세포/웰로 파종한 후 ATP를 다양한 시간에 걸쳐 고갈시키는 화합물인 클로르프로마진(60 µM), 에토포사이드(100 µM) 또는 2DG(20 mM) + KCN(2 mM)으로 처리했으며, 이는 동역학 분석(삽입)에 의해 강조된 효과 시간으로 처리되었습니다. 고해상도 위상 이미지(10x)는 세포 변형을 보여주며, 클로르프로마진(21시간) 및 에토포사이드(75시간)로 처리된 세포는 극적인 형태 변화를 나타내는 반면, 2DG + KCN(60분)으로 처리된 세포는 용매 대조군과 비교하여 유의미한 형태학적 변화를 보이지 않습니다.

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Incucyte® CytoATP 렌티바이러스 시약 키트 (EF1α, Puro)

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세포 내 ATP 수준의 직접적인 자동화된 정량적 측정

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공동 배양 모델에서의 세포 내 ATP 수준에 대한 동역학적 측정

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Incucyte® ATP 분석법은 ATP의 직접적이고 생세포 측정을 가능하게 합니다

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자주 묻는 질문

ATP 분석은 세포질 ATP의 변화를 단일 및 공동 배양 모델에서 실시간으로 감지하고 평가하기 위해 대사 광학 모듈이 구성된 Incucyte® SX5, Incucyte® ATP 소프트웨어 분석 모듈 및 Incucyte® CytoATP 렌티바이러스 키트와 함께 사용됩니다. Incucyte® CytoATP는 이중 형광 ATP 지표의 안정적인 발현을 유도하는 렌티바이러스 기반 생세포 표지 시약으로, Incucyte® SX5에서 이중 대역 방출 필터를 사용하여 이미징할 수 있습니다.

Incucyte® 데이터는 단일 시점의 대사 최종 산물을 측정하는 다른 분석법과 달리, 생리학적으로 관련된 환경에서 시간에 따른 세포질 ATP를 직접 측정하고 세포 유형별 대사 변화를 평가할 수 있는 능력을 추가로 제공합니다.

Incucyte® ATP 분석은 ATP 결합 상태와 자유 상태 사이의 명확한 신호 분리가 필요한 시약을 사용하여 동적 ATP 변화를 연구하도록 설계되었습니다. 획득 및 분석 도구는 Incucyte® SX5 및 Incucyte® 대사 광학 모듈과 함께 사용하도록 설계되어 이중 여기 및 단일 방출 이미지 획득을 통해 이러한 상태의 변화를 연구할 수 있으며, 이는 Incucyte® S3의 녹색/적색 광학 모듈 또는 Incucyte® SX5의 녹색/주황/NIR 광학 모듈에서는 불가능합니다.

우리는 유전자 변형된 형광 ATP 지표를 면역 세포 모델에 도입하지 못했습니다. 현재까지 이 응용 프로그램은 암세포 라인에서만 검증되었습니다.

아니요. 서로 다른 획득 방법(이중 여기/단일 방출을 사용한 대사)과 Incucyte® MMP와 Incucyte® CytoATP가 모두 오렌지 채널에서 읽히기 때문에 이 두 분석을 다중화할 수 없습니다.

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