싸토리우스 인큐사이트® ATP 분석 시스템 (생세포 분석용)
싸토리우스 인큐사이트® ATP 분석은 기기, 소프트웨어, 시약으로 구성된 종합 솔루션으로, 암세포의 대사 변화를 직접 분석할 수 있게 해줍니다. 이제 전례 없는 방식으로 대사 변화를 평가하세요!
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암세포는 종양 미세환경에서 증식과 생존을 지원하기 위해 대사적 재구성을 보입니다. 이 현상은 암의 특징으로 인정됩니다. 최근 연구들은 암세포와 암 관련 기질세포 간의 복잡한 관계, 특히 대사적 공생이 어떻게 약물 저항성을 촉진하는지 평가하는 것의 중요성을 지적하고 있습니다. 연구자들은 암 관련 대사 변화에 대한 지식을 확장하고 항암 치료법을 개발하기 위해 다양한 생물학적 기법을 활용합니다. 그러나 현재 기술로는 암세포가 증식하고 환경과 상호작용하는 복잡한 암세포 모델에서의 대사 변화 평가에 한계가 있습니다.
대사 변화를 측정하는 기존 기법은 종종:
라이브 세포 분석을 위한 Incucyte® ATP 분석 비디오 시청
연속 이미징 및 분석을 통해 세포 유형별 대사 변화에 대한 전례 없는 접근성을 확보하세요. Incucyte® ATP 분석법은 생리학적으로 관련성 있는 조건에서 종양 세포 모델의 특성을 파악하기 위해 세포질 ATP를 직접 측정할 수 있게 해줍니다. SX5 대사 광학 모듈, Incucyte® SX5 생세포 분석 시스템, Incucyte® ATP 분석 소프트웨어 모듈, Incucyte® CytoATP 렌티바이러스 시약 키트로 구성된 시스템을 통해 실시간으로 세포 형태의 정성적 확인과 함께 세포 유형별 ATP 변화를 구분할 수 있습니다.
싸토리우스 Incucyte® CytoATP 렌티바이러스 시약을 다양한 세포 유형에서 생세포의 세포질 ATP를 직접 측정하기 위해 사용합니다.
HeLa 세포를 Incucyte® CytoATP 렌티바이러스로 감염시키고 puromycin 선별을 거쳐 안정적으로 발현하는 집단을 생성했습니다. CytoATP 발현 세포의 형태(A)와 증식(B)은 모세포와 비교하여 변화가 없었습니다. (C) CytoATP를 안정적으로 발현하는 HeLa 세포를 96-웰 마이크로플레이트에 4,000개/웰로 파종하고 2-데옥시-D-글루코스(2DG)와 포타슘 시안화물(KCN)의 복합 처리에 노출시켰습니다. 3시간 동안 캡처된 CytoATP 형광 이미지의 정량화 결과, 해당작용과 산화적 인산화 차단으로 인한 ATP의 빠르고 농도 의존적인 고갈을 보여줍니다.
단일 세포 또는 고급 세포 모델에서 특정 세포 유형의 ATP에 미치는 영향을 자동으로 측정하고 시각화하여 동적 종양 환경에 대한 더 깊은 통찰력을 제공합니다.
트리플 네거티브 유방암(TNBC) 세포주 HCC1806과 수용체 양성 유방암 세포주 MCF7에 CytoATP 또는 CytoATP 비결합 대조군을 안정적으로 발현하고, CCD14086SK 섬유아세포(8K 세포/웰) 존재 또는 부재 상태에서 배양했습니다. ATP의 세포 변화 식별(색상 스케일 마스킹)은 통합된 Incucyte® ATP 분석 소프트웨어 모듈을 사용하여 수행됩니다. 마스킹된 이미지(A)는 단일 배양 및 CCD14086SK 세포와의 공동 배양에서 1 µM CB-839로 처리된 HCC1806 세포의 ATP 시각화를 제공합니다. 동역학 데이터는 단일 배양된 MCF-7(수용체 양성 세포주)과 비교하여 TNBC 세포주에서 CB-839 처리 후 더 지속적인 ATP 고갈을 보여줍니다(B). 그러나 기질 세포와의 공동 배양은 TNBC 세포에서 CB-839에 대한 저항성을 매개했으며, 수용체 양성 세포주는 차별적 효과를 보이지 않았습니다. IC50 곡선은 72시간(B) 및 15시간(C) 시점의 데이터를 나타냅니다.
처리에 대한 단기 및 장기 ATP 역학에 대한 더 깊은 생물학적 통찰을 위해 실시간 대사 데이터 생성
CytoATP 또는 비결합 대조군을 안정적으로 발현하는 NIH 3T3 세포는 표준 조건(포도당) 또는 에너지 대사를 위해 산화적 인산화에 의존하도록 포도당 대신 갈락토스가 포함된 성장 배지에서 배양되었습니다. 96웰 마이크로플레이트에 12K 세포/웰로 파종된 세포에 형광 이미지(10X)를 촬영하고 비독성(암브리센탄), 세포독성(클로르프로마진) 또는 미토독성(네파조돈) 화합물을 처리했습니다. 운동학적 데이터는 세포독성 또는 미토독성 화합물로 처리된 세포에서 ATP의 빠른 고갈을 보여줍니다. 세포독성 화합물에 대한 반응은 두 배지 조건에서 유사하지만, 갈락토스에서 자란 세포의 네파조돈의 IC50의 왼쪽 이동은 미토콘드리아 독성을 나타냅니다. 초기 시점에서 더 큰 분리 정도가 관찰되어, 운동학적 CytoATP 데이터가 화합물 프로파일을 평가하는 데 추가적인 통찰을 제공할 수 있음을 보여줍니다.
세포 형태 변화를 ATP 대사와 연관 지어 세포 행동의 유의미하고 시간에 따른 변화를 밝힙니다.
CytoATP 또는 비결합 대조군을 안정적으로 발현하는 HeLa 세포를 96웰 마이크로플레이트에 2K - 8K 세포/웰로 파종하고, 키네틱 분석(삽입 그래프)으로 강조된 다양한 효과 시간을 가진 ATP를 고갈시키는 화합물인 클로르프로마진(60 µM), 에토포사이드(100 µM) 또는 2DG(20 mM) + KCN(2 mM)으로 처리했습니다. HD 위상 이미지(10x)는 고갈 과정 중 세포의 형태 변화를 보여주며, 클로르프로마진(21시간) 및 에토포사이드(75시간)로 처리된 세포는 극적인 형태 변화를 나타내는 반면, 2DG + KCN(60분)으로 처리된 세포는 용매 대조군과 비교하여 유의미한 형태학적 변화를 보이지 않습니다.
제품
설명
카탈로그 번호
1대
4816
싸토리우스 인큐사이트® SX5 대사 광학 모듈
1 광학 모듈
4820
Incucyte® ATP 분석 소프트웨어 모듈
1 모듈
9600-0033
인큐사이트® 사이토ATP 렌티바이러스 키트
1 키트
4772
ATP 분석은 싸토리우스 SX5를 대사 광학 모듈과 함께 구성하고, 싸토리우스 ATP 소프트웨어 분석 모듈 및 싸토리우스 CytoATP 렌티바이러스 키트와 연계하여, 단일 및 공동 배양 모델에서 세포질 ATP의 변화를 실시간으로 감지하고 평가합니다. 싸토리우스 CytoATP는 이중 형광 ATP 지표의 안정적인 발현을 유도하는 렌티바이러스 기반 생세포 표지 시약으로, 이중 대역 방출 필터를 사용하여 싸토리우스 SX5에서 이미징할 수 있습니다.
싸토리우스 데이터는 생리학적으로 관련된 환경에서 시간에 따라 생성된 세포질 ATP의 직접적인 판독값으로, 단일 시점에서 대사 최종 산물을 측정하고 단일 배양 세포 모델에서 완전한 환경 제어가 없는 다른 분석과 달리 세포 유형별 대사 변화를 평가할 수 있는 추가 기능을 제공합니다.
Incucyte® ATP 분석법은 ATP 결합 상태와 자유 상태 사이의 명확한 신호 분리가 필요한 시약을 사용하여 ATP의 동적 변화를 연구하도록 설계되었습니다. 획득 및 분석 도구는 싸토리우스의 Incucyte® SX5 및 이중 여기와 단일 방출 이미지 획득을 통해 이러한 상태의 변화를 연구할 수 있는 Incucyte® 대사 광학 모듈과 함께 사용하도록 설계되었으며, 이는 녹색/적색 광학 모듈이 있는 Incucyte® S3나 녹색/주황/NIR 광학 모듈이 있는 Incucyte® SX5에서는 불가능합니다.
현재까지 유전자 변형된 형광 ATP 지표를 면역 세포 모델에 도입하지 못했습니다. 현재 이 애플리케이션은 암세포 계통에서만 검증되었습니다.
싸토리우스 제품의 경우, 서로 다른 획득 방법(이중 여기/단일 방출 대사)과 Incucyte® MMP와 Incucyte® CytoATP가 모두 오렌지 채널에서 판독되기 때문에 이 두 가지 분석을 다중화할 수 없습니다.
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