싸토리우스 인큐사이트® 생세포 분석을 위한 주화성 분석
세포 이동은 근본적인 생물학적 과정이며 인간 발달, 면역 반응 및 종양 전이와 같은 질병의 중요한 구성 요소입니다. 정상적이고 건강한 상태에서 세포의 이동 능력은 엄격하게 조절됩니다 - 예를 들어, 손상된 조직에서 분비되는 케모카인에 대한 백혈구의 방향성 세포 이동(화학주성)은 염증 반응에서 핵심적인 역할을 합니다. 반대로, 조절되지 않은 세포 이동과 침윤은 암과 같은 질병의 특징으로, 전이성 세포가 원발 종양에서 벗어나 생물체의 다른 부위에 2차 종양을 형성합니다.
세포의 화학주성 측정은 질병 진행과 면역 반응을 이해하는 데 필수적인 구성 요소입니다. 그러나 현재 분석 방법에는 단점이 있습니다. 트랜스웰과 같은 기존 화학주성 세포 기반 분석의 일반적인 한계는 다음과 같습니다:
Incucyte® 화학주성 세포 이동 및 침습 분석은 지속적인 시각화와 활성 세포 운동성의 재현 가능한 분석을 위한 광학적으로 투명하고 통합된 소프트웨어로 구성된 이미지 기반 솔루션입니다. 이전에는 볼 수 없었던 방식으로 실험의 모든 세포를 모니터링하세요!
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인큐사이트 클리어뷰 96-웰 플레이트를 사용하여 동적 세포 이동을 추적하고 정량화하세요. 광학적으로 투명한 표면은 비침습적 시각화와 세포 이동의 레이블 없는 분석을 가능하게 합니다. 인큐사이트 클리어뷰 96-웰 플레이트는 인큐사이트 라이브 셀 분석 시스템과 함께 사용하도록 검증되었으며, 인큐사이트 화학주성 분석 소프트웨어 모듈이 필요합니다.
인큐사이트 클리어뷰 96-웰 플레이트는 화학주성 분석을 최적화하도록 특별히 설계되었으며, 직경 8µm의 레이저 에칭된 96개의 구멍을 포함합니다. 세포는 상부 챔버에, 화학주성 물질은 하부 저장 플레이트에 추가됩니다. 인큐사이트 클리어뷰 96-웰 플레이트의 설계는 72시간 동안 안정적인 화학주성 구배를 보장하며, 웰당 1,000-5,000개의 세포만 필요로 하여 귀중하고 희귀한 샘플을 실험하기에 이상적입니다. 세포는 배양기의 생리학적으로 적절한 환경에 있으면서 화학주성을 시각적으로 모니터링할 수 있습니다.
라벨 없는 및 형광 표지된 주화주성 세포 이동 또는 침습을 분석하면서 인쿠사이트® 96웰 클리어뷰 플레이트의 각 웰 내 모든 세포의 세포 형태를 정성적으로 모니터링합니다.
카탈로그 번호 9600-0015
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인쿠사이트® 생세포 분석 시스템을 통해 배양기 내부에서 직접 레이블 없거나 형광 표지된 주화성 세포 이동, 침윤 및 경내피 이동을 실시간으로 시각화하고 정량화할 수 있습니다. 타임랩스 이미징과 정량적 데이터는 배양 중 자동으로 생성되어, 생리학적으로 관련된 환경에서 주화성의 시간 경과에 대한 강력한 통찰력을 제공합니다. 이 장비는 인쿠사이트® Clearview 96웰 플레이트 및 인쿠사이트® 주화성 분석 소프트웨어 모듈과 함께 종말점 측정에 대한 강력한 대안과 주화성에 대한 더 나은 이해를 제공합니다.
인쿠사이트® 장비 탐색
실험의 모든 세포에 대해 완전 자동화된 분석으로 실시간 세포 이동 또는 침윤을 정량화하고 시각화하세요
스크리닝에 적합한 고도로 재현 가능한 96웰 동역학적 분석을 수행하기 위해 Incucyte® Clearview 플레이트 사용
최적화된 기공 밀도와 안정적인 그라데이션으로 세포 요구량 감소, 희귀하거나 고가의 세포에 이상적
이동 및 침습에 대한 치료 효과 조사 및 경내피 이동과 관련된 경로 특성화
실험의 모든 세포를 모니터링하고, 위상차 및/또는 형광 이미징을 사용하여 이미지와 동영상에서 형태학과 표현형 인사이트를 평가하세요. 동영상 1. HT-1080 주주화의 실시간 정량적 분석. FBS를 향한 HT-1080 세포의 주주화 이동을, 싸토리우스 Clearview 96-웰 플레이트에서 시각화했습니다. 통합된 싸토리우스 주주화 분석 소프트웨어는 세포가 구멍을 통과하고 멤브레인의 아래쪽에 부착되는 것을 실시간으로 정량화할 수 있게 해줍니다. 더 많은 동영상 보기:
싸토리우스의 Incucyte® 클리어뷰 플레이트를 사용하여 선택한 세포 모델 - 이동, 침습 또는 경내피 이동 - 에 대한 고도로 재현 가능한 96웰 동역학 분석을 수행하세요.
Incucyte® 클리어뷰 96웰 플레이트와 개조된 보이든 챔버의 세포 사용량 비교. Jurkat T 세포의 SDF-1α로의 주화성을 두 시스템에서 측정했습니다 (2,000~20,000 세포/웰). 그러나 개조된 보이든 플레이트에서는 신호가 관찰되지 않았습니다. 보이든 시스템에서 주화성 이동을 관찰하려면 최소 150,000 세포/웰이 필요했습니다.
(A) 10,000 kDA 덱스트란을 Alexa Fluor 594로 표지한 후, 10 µM 농도로 싸토리우스 Clearview 96웰 플레이트와 96웰 변형 보이든 챔버의 저장 플레이트에 추가하여 농도 구배를 형성했습니다. 농도 구배의 안정성을 0, 4, 8, 24, 48, 72시간에 측정했습니다(N=3 웰). 4시간 후, 변형된 보이든 챔버에서는 농도 구배가 빠르게 소실되는 반면, 싸토리우스 Clearview 플레이트는 72시간 동안 선형 구배를 유지합니다. (B) FBS 농도 구배를 72, 48, 24, 0시간에 걸쳐 별도의 웰에 형성했습니다. 혈청 제한 싸토리우스 Nuclight Red HT-1080 세포를 형성된 구배에 추가하고 FBS 유도 주화성 반응을 측정했습니다. 각 데이터 포인트는 평균 ± 표준오차를 나타내며, N=3입니다.
침습 억제 및 경내피 이동과 관련된 경로 특성 분석
AMD3100 (A), BIRT377 (C), ICAM-1 중화 항체 (D)에 의한 CXCL12 (SDF-1α) 유도 T 세포 이동 억제. AMD3100의 약리학적 반응 분석 (B). 내피층을 통한 이동은 최소한 부분적으로 ICAM-1에 의존적이었으며, ICAM-1 중화 항체와 LFA-1의 알로스테릭 억제제인 BIRT 377 처리가 T 세포의 SDF-1α 매개 유출을 유의미하게 억제했다.
Incucyte® 고해상도 이미지는 Incucyte® Nuclight HT-1080 섬유육종 세포가 2D 기질을 가로지르고 혈청 농도 구배에 반응하여 3D 기저막 추출물(BME) 바이오매트릭스를 통해 침윤하는 모습을 보여줍니다 - 세포외기질(ECM)로 뻗어나가는 차별화된 형태와 침습적인 섬유족 같은 돌기에 주목하세요. 시간 경과 그래프는 세포의 BME 매트릭스를 통한 침윤이 이동보다 느리며, 침윤은 GM6001 매트릭스 메탈로프로테아제 억제제에 의해 농도 의존적으로 억제됨을 보여줍니다.
인큐사이트® 스크래치 상처 분석은 화학주성 기울기 없이 세포 없는 영역으로의 세포 이동을 측정합니다. 인큐사이트® 상처메이커 도구를 사용하여 각 웰에 정확한 상처를 만들고, 세포가 기질을 가로질러 이동하거나(이동) 3D 젤 매트릭스를 통해 이동하는 상처 폐쇄를 모니터링할 수 있습니다.
인큐사이트® 주화성 분석은 화학주성 기울기에 대한 세포의 방향성 있는 이동을 측정합니다. 인큐사이트® 생세포 분석 시스템을 사용하여 주화성 프로필에 대한 처리 효과를 조사할 수 있습니다. 이 시스템은 부착성 및 비부착성 세포에 적합합니다.
기존 보이든 챔버의 멤브레인 표면 광학 품질은 Incucyte® 이미징 또는 이미지 처리 알고리즘에 적합하지 않습니다.
아니요. Incucyte® Clearview 세포 이동 인서트는 Incucyte® Clearview 저장 플레이트와 함께 작동하도록 특별히 설계되었습니다.
2015A 버전 Rev 1 이상. Incucyte® 화학주성 분석 소프트웨어 모듈은 이전 소프트웨어 버전과 호환되지 않습니다. 소프트웨어 업그레이드를 원하시면 판매처 담당자에게 문의해 주세요.
네. Incucyte® Clearview 세포 이동 플레이트는 부착되지 않은 세포 유형에서 광범위하게 검증되었습니다. 플레이팅 후 각 웰 내 균일한 세포 침전을 보장하기 위해, 플레이팅 후 실온에서 45-60분 동안 플레이트를 두는 것을 권장합니다. 부착되지 않은 세포 이동을 정량화하기 위해 '화학주성(상단만)' 분석 작업 유형을 권장합니다.
최적화해야 할 주요 변수로는 멤브레인 코팅, 분석 배지 및 세포 밀도가 포함됩니다. 암세포, 혈관 세포 및 백혈구를 포함한 다양한 세포 유형에 대한 권장 실험 조건은 분석 프로토콜에서 확인할 수 있습니다.
네. 멤브레인의 상단과 하단 표면을 독립적으로 또는 함께 코팅할 수 있습니다. 권장 용량은 멤브레인 상단에 20 μL, 하단에 150 μL입니다.
네. 이웃 세포를 이미지 분석 후 개별 객체로 구분하고 계산하기 위해 세포질 형광체가 아닌 핵 제한 형광체를 사용하는 것을 권장합니다. 형광체의 여기 및 방출 스펙트럼은 싸토리우스 Incucyte® 형광 채널과 호환되어야 합니다.
네. 다른 세포 유형을 형광 프로브로 표지하고 싸토리우스 Incucyte® 생세포 분석 시스템의 위상, 녹색, 빨간색, 주황색 또는 근적외선 빨간색 데이터 획득 채널을 사용하면 공동 배양에서 둘 이상의 세포 유형의 화학주성을 정량화할 수 있습니다.
네. Incucyte® 생세포 분석 시스템은 분석 중 세포를 방해하지 않습니다. 실험이 완료되면 추가 분석을 위해 웰에서 배지를 간단히 제거할 수 있습니다.
네. 사용하지 않은 이미징 채널을 사용하여 세포 건강의 다중 측정이 가능합니다. Incucyte® 생세포 분석 시스템은 HD 위상차 및 녹색, 빨간색, 주황색, 근적외선 형광 자동 이미징 모드를 지원합니다.
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