Incucyte^® 생세포 면역세포화학

생세포 면역세포화학

새로운 면역세포화학적 접근법으로 표면 단백질 발현의 역동성을 규명하세요

면역세포화학(ICC)은 단백질의 위치, 이동 경로 및 단백질-단백질 상호작용을 시각화하는 데 중요한 세포 영상 기법입니다. 특수 현미경을 사용하면 연구자들은 나노미터 해상도로 표지된 세포 구조를 관찰할 수 있습니다.

하지만 세포가 분화하거나 상호 작용하거나 외부 자극에 반응함에 따라 시간에 따른 단백질 분포 및 발현 변화를 연구하는 것은 더 어려운 일입니다.

비파괴적인 Incucyte^® Fabfluor-488 및 Incucyte^® Fabfluor-594 항체 표지 염료를 활용하는 새로운 Incucyte^® 생세포 면역화학 단백질 검출 기술을 통해 기존 면역세포화학 프로토콜을 보완하고 표면 단백질 발현의 역동성에 대한 새로운 통찰력을 얻을 수 있습니다.

백서: 생세포 면역세포화학

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애플리케이션

Incucyte^® 생세포 면역화학 분석법은 자동화된 이미징 및 분석 기능과 사용하기 쉬운 항체 표지 방식을 결합하여 조직 배양기 내에서 표면 단백질 발현에 대한 동적 이미지 기반 측정값을 생성합니다.

생세포 면역화학 분석법은 세포 표면 단백질 마커를 장기간 추적 및 정량화할 수 있는 강력한 솔루션을 제공하며, 이를 세포 기능 및 형태와 연관시켜 세포 과정에 대한 더 깊은 통찰력을 얻을 수 있도록 합니다.

주요 장점

Incucyte^® 생세포 분석 시스템과 Incucyte^® Fabfluor-488 및 Incucyte^® Fabfluor-594 항체 표지 염료는 96웰 및 384웰 포맷에서 세포 표면 단백질 발현 및 분포의 장기적인 동적 변화를 정량화하는 완벽한 솔루션을 제공하여 의미 있는 결과를 더 빠르게 도출할 수 있도록 지원합니다.

- 단백질 발현 및 분포를 시간에 따라 측정하기 위해, 단백질에 영향을 주지 않는 항체 표지 시약을 사용합니다.
- 빠르고 간편한 단일 단계 라벨링과 최대 6개의 96웰 플레이트에서 이미지를 자동으로 획득 및 분석하여 더 빠르게 결과를 얻을 수 있습니다.
- 세포 표면 단백질 발현 변화와 세포 기능 및 형태 사이의 연관성을 파악하여 세포 행동의 유익한 시간적 변화를 밝혀낸다.
- 복잡한 공동 배양 모델에서 시간에 따른 세포 간 상호작용을 시각화하고 정량화하여 세포 간 상호작용에 대한 통찰력을 제공합니다.

추가 정보 요청

염증 자극에 대한 세포 표면 단백질의 동적 변화를 측정하여 종양 내 면역 세포 신호 전달 경로 조절에 대한 추가적인 통찰력을 제공합니다.

(오른쪽). Incucyte^® Nuclight Red MDA-MB-231(유방암) 또는 SKOV-3(난소암) 암세포를 Incucyte^® Fabfluor-488-α-PD-L1 항체 복합체 및 Incucyte^® Opti-Green 배경 억제제가 존재하는 조건에서 IFNγ와 함께 배양하였다. 녹색 형광 영역을 정량화한 결과, IFNγ는 MDA-MB-231 세포에서 시간 및 농도 의존적으로 PD-L1 발현을 증가시키는 것으로 나타났다. 시간 경과에 따른 프로파일은 MDA-MB-231(높은 발현) 세포와 SKOV-3(중간 발현) 세포에서 PD-L1 발현의 차이를 보여준다.

빠르고 간편한 단일 단계 라벨링과 최대 6개의 96웰 플레이트에서 이미지를 자동으로 획득 및 분석하는 기능을 병렬로 제공하여 더 빠른 결과를 얻을 수 있습니다.

단백질 함량 및 분포의 장기적인 변화를 형태 및 기능 변화와 실시간으로 손쉽게 연결할 수 있습니다.

그림 2. 다중 세포 표면 마커, 식세포 활동 및 증식 측정과 형태 시각화를 통해 분화를 연구합니다. (right). THP-1 monocytes were exposed to media (undifferentiated), vitamin D3 or PMA in the presence of Incucyte^® Fabfluor-488 antibody complexed to CD11b, CD14 or CD40. PMA showed a marked change in cell morphology (HD-phase contrast images) compared to media alone or vitamin D3 treated cells. The kinetic graphs highlight differential and time-dependent surface protein expression in response to the various treatments. Interestingly, PMA, but not media or vitamin D3, yields a decrease in cell proliferation (confluence) and concordant increase in phagocytic potential as measured by efferocytosis of apoptotic Jurkat cells labeled with pHrodo^® Red Cell Labeling Kit for Incucyte^®.

세포 표면 단백질 발현 마커를 통해 세포 간 상호작용을 관찰하고 정량화하여 복잡한 공동 배양 모델에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다.

Incucyte^® Cytolight Red로 염색된 A549 종양 세포를 Incucyte^® Fabfluor-488-α-CD45 및 Incucyte^® Opti-Green을 사용하여 전체 림프구 집단을 표지한 후, 사전 활성화 또는 비활성화된 PBMC와 혼합했습니다. PBMC 첨가 2시간 후의 이미지는 CD45+ 세포(녹색)와 A549 세포(빨간색) 사이의 상호작용을 보여줍니다. 상호작용의 정량화(이미지의 노란색 마스크, 오버레이)는 활성화된 효과기 세포와 표적 세포 간의 상호작용이 현저하게 증가했음을 나타내며, 이는 종양 세포에 대한 면역 사멸을 위한 세포 결합을 의미합니다(막대 그래프 참조).

Incucyte^® Nuclight Red A549 폐암 세포를 Incucyte^® Fabfluor-488 표지 CD8 항체가 존재하는 조건에서 인간 말초혈액 단핵세포(PBMC)와 함께 배양했습니다. CD3/IL-2로 PBMC를 활성화시키면 종양 세포와의 PBMC 상호작용이 증가했습니다. Incucyte^® Fabfluor-488-CD8로 면역 세포를 표지한 결과, PBMC의 CD8+ 영역이 A549 종양 세포와 접촉하는 극성이 확인되었습니다.

검증 데이터

IncucyteFabfluor-488 염료는 세포에 영향을 주지 않으면서 특정 단백질을 장기간 표지하여 살아있는 세포의 표면 단백질 변화를 수 시간 또는 수일에 걸쳐 강력하게 분석할 수 있도록 합니다.

Incucyte^® Fabfluor-594로 표지된 α-CD71이 존재하는 환경에서 배양된 HT-1080 세포는 붉은 형광을 나타내는 반면, Incucyte^® Fabfluor-594 IgG 동형 대조군과 함께 배양된 세포에서는 형광이 나타나지 않았습니다. Incucyte^® Opti-Green 또는 Incucyte^® Fabfluor-594로 표지된 항체를 첨가해도 2일 동안 세포 성장에 영향을 미치지 않았습니다(A). 표지된 CD71로 처리된 세포에서만 시간이 지남에 따라 붉은색 영역이 증가했으며(B), 이를 세포 면적으로 정규화하면 CD71의 발현이 일정함을 보여줍니다(C).

혼합 세포 집단을 식별하고 정량화하기 위한 특정 항원 검출

복합 공동 배양 모델을 평가하고, 시간에 따른 단백질 발현 변화를 식별하는 특정 표면 마커를 사용하여 세포 간 상호작용을 특성화합니다.

Ramos(B세포 유사) 세포를 Incucyte ^® Fabfluor-488 표지 항체와 Incucyte ^® Opti-Green 존재 하에 배양하였다. 비특이적(CD45) 및 특이적(CD20) B세포 마커에 대한 장기간 표지가 관찰되었다. T세포 마커(CD3) 또는 동종 대조 항체에서는 형광 신호가 관찰되지 않았다. Ramos 세포와 Jurkat(T세포 유사) 세포를 일정한 비율로 혼합했을 때, 예상되는 수준의 CD20 염색이 측정되었으며, 이는 혼합 배양에서의 유용성을 입증한다.

주문 정보

제품	수량	고양이. 아니요.
Incucyte^® 마우스 IgG1 Fabfluor-488 항체 라벨링 키트	1병(50µg)	4745
Incucyte^® 마우스 IgG2a Fabfluor-488 항체 라벨링 키트	1병(50µg)	4743
Incucyte^® 마우스 IgG2b Fabfluor-488 항체 라벨링 키트	1병(50µg)	4744
Incucyte^® 마우스 IgG1 Fabfluor-555 항체 라벨링 키트	1병(50µg)	BA-04873
Incucyte^® 마우스 IgG1 Fabfluor-594 항체 표지 염료	1병(50µg)	4844
Incucyte^® 마우스 IgG2a Fabfluor-594 항체 라벨링 염료	1병 (50µg)	BA-04863

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제품 가이드

Incucyte^® Fabfluor-488 항체 표지 염료

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제품 가이드

Incucyte^® Fabfluor-594 항체 표지 염료

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포스터: AAI 2018

형광 Fab/Ab를 사용하여 살아있는 세포의 표면 마커와 세포 집단을 추적합니다.

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자주 묻는 질문 (FAQ)

이 응용 프로그램과 시약은 일차 세포를 포함한 모든 세포 유형에 적합한가요?

네. 저희는 다양한 항체를 사용하여 여러 세포 유형(예: Ramos, Raji, Jurkats)과 일차 세포(예: PBMC)에서 항체 내재화를 측정했습니다. 표적 특이적 내재화의 경우, 항체 흡수 정도와 속도는 세포 표면의 항원(수용체) 발현 수준과 항체의 결합 특성을 포함한 다양한 변수에 따라 달라집니다.

Incucyte^® Fabfluor-pH 염료와 항체 단편의 호환성은 무엇입니까?

상응하는 Fc 영역을 가진 항체만이 본 연구 방법과 호환됩니다. Fc 사슬이 없는 항체 단편은 작동하지 않을 것으로 예상됩니다.

이 분석법을 통해 세포 내 유입 속도를 추정할 수 있습니까?

네, 세포 수로 정규화하고 각 시간 경과에 따른 최대 반응을 확인함으로써 반응 속도를 추정할 수 있습니다. 자세한 내용은 지역 현장 담당자에게 문의하십시오.

이 검사를 다른 판독값과 함께 다중화할 수 있습니까?

네, 세포 건강 시약과 같은 나머지 사용 가능한 채널의 다른 판독값과 함께 이 분석을 다중화하여 더 많은 정보를 얻는 것이 가능합니다.

이 방법을 사용하여 어떤 항체 내재화 과정을 연구할 수 있습니까?

이 방법은 표적 매개 항체 내재화뿐만 아니라 피노시토시스(비특이적) 흡수 측정에도 적합합니다. Incucyte^® Fabfluor-pH 염료가 시험 항체의 Fc에 결합하는 한, 표적 특이적 항체-항원 상호작용을 방해할 것으로 예상되지 않습니다. Fc 결합에 의존하는 특정 항체 흡수 및 재활용 메커니즘(예: FcγR 및 FcRn)은 Incucyte^® Fabfluor-pH 염료의 결합 상호작용으로 인해 복잡해질 수 있습니다.

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