인쿠사이트® 생세포 면역세포화학염색
면역세포화학(ICC)은 단백질 위치, 이동 경로, 단백질 간 상호작용을 시각화하는 중요한 세포 이미징 기법입니다. 특수 현미경을 통해 연구자들은 나노미터 해상도로 표지된 세포 구조를 관찰할 수 있습니다.
그러나 세포가 분화하거나, 상호작용하거나, 외부 자극에 반응하면서 발생할 수 있는 단백질 분포와 발현의 변화를 연구하는 것은 더욱 어려운 과제입니다.
새로운 Incucyte® 생세포 면역세포화학 단백질 검출 기법은 비교란성 Incucyte® Fabfluor-488과 Incucyte® Fabfluor-594 항체 표지 염료를 활용하여, 기존의 면역세포화학 프로토콜을 보완하고 표면 단백질 발현의 역학에 대한 새로운 통찰력을 얻을 수 있게 해줍니다.
Incucyte® 라이브 세포 면역세포화학 분석법은 자동화된 이미징과 분석의 힘을 간단한 항체 표지 접근법과 결합하여 조직 배양 배양기 내에서 표면 단백질 발현의 동역학적이고 이미지 기반의 측정을 생성합니다.
라이브 세포 면역세포화학은 세포 기능 및 형태와 연결될 수 있는 세포 표면 단백질 마커의 장기 추적 및 정량을 위한 강력한 솔루션을 제공합니다.
싸토리우스 라이브 세포 분석 시스템, 싸토리우스 Fabfluor-488 및 싸토리우스 Fabfluor-594 항체 표지 염료는 96 및 384 웰 형식에서 세포 표면 단백질 발현 및 분포의 장기 동적 변화를 정량화하기 위한 턴키 솔루션을 제공하여 더 빠르게 의미 있는 결과를 도출할 수 있습니다.
추가 정보 요청
종양의 면역세포 신호 경로 조절에 대한 추가 통찰력을 제공하기 위해 염증 자극에 대한 세포 표면 단백질의 동적 변화 측정
(오른쪽). Incucyte® Nuclight Red MDA-MB-231 (유방) 또는 SKOV-3 (난소) 암세포를 IFNγ와 함께 Incucyte® Fabfluor-488-α-PD-L1 항체 복합체와 Incucyte® Opti-Green 배경 억제제 존재 하에 배양했습니다. 녹색 형광 영역의 정량화 결과, IFNγ가 MDA-MB-231 세포에서 PD-L1 발현을 시간 및 농도 의존적으로 증가시킴을 보여줍니다. 시간 경과 프로필은 MDA-MB-231 (높은 발현) 및 SKOV-3 (중간 발현) 세포의 차별적 PD-L1 발현을 나타냅니다.
최대 6개의 96웰 플레이트를 동시에 이미징하여 더 빠르게 결과를 얻을 수 있는 신속하고 단계별 라벨링 및 자동화된 이미지 획득 및 분석.
실시간으로 단백질 양과 분포의 장기적 변화를 형태학 및 기능 변화와 쉽게 연결할 수 있습니다.
오른쪽). THP-1 단핵구는 배지(미분화), 비타민 D3 또는 PMA에 노출되었으며, Incucyte® Fabfluor-488 항체 복합체와 결합된 CD11b, CD14 또는 CD40가 존재하는 상태였습니다. PMA는 배지 단독 또는 비타민 D3로 처리된 세포와 비교하여 세포 형태에 현저한 변화를 보였습니다(HD-위상차 이미지). 동역학 그래프는 다양한 처리에 대한 차등적이고 시간 의존적인 표면 단백질 발현을 강조합니다. 흥미롭게도 PMA는 배지나 비타민 D3와 달리 세포 증식(밀집도) 감소와 동시에 Incucyte®용 pHrodo® 레드 세포 표지 키트로 표지된 자멸성 Jurkat 세포의 탐식 잠재력 증가를 나타냅니다.
세포 표면 단백질 발현 마커를 통해 세포-세포 상호작용을 관찰하고 정량화하여, 복잡한 공동 배양 모델에 대한 통찰력을 제공합니다.
. Incucyte® Cytolight Red A549 종양 세포를 사전 활성화되거나 비활성화된 PBMC와 함께 Incucyte® Fabfluor-488-α-CD45와 Incucyte® Opti-Green의 존재 하에 혼합했습니다. PBMC 추가 2시간 후의 이미지는 CD45+ 세포(녹색)와 A549 세포(빨간색) 간의 상호작용을 보여줍니다. 상호작용의 정량화(오버레이, 이미지의 노란색 마스크)는 활성화된 효과 세포와 표적 세포 간의 현저한 상호작용 증가를 나타내며, 이는 종양 세포의 면역 살해를 위한 세포 결합을 나타냅니다(막대 그래프에서 보듯이).
싸토리우스 Incucyte® 핵라이트 레드 A549 폐암 세포를 인간 PBMC와 함께 싸토리우스® Fabfluor-488 태그된 CD8 항체 존재 하에 배양했습니다. CD3/IL-2로 PBMC 활성화는 종양 세포와의 PBMC 상호작용을 증가시켰습니다. 싸토리우스® Fabfluor-488-CD8로 면역세포에 라벨링함으로써 PBMC의 CD8+ 영역이 A549 종양 세포와 접촉하는 극성을 확인했습니다.
싸토리우스 Incucyte® Fabfluor-488 염료는 비교란성이며 생세포 표면 단백질 동역학에 대한 강력한 분석을 위해 특정 장기 표지를 생성합니다.
. Incucyte® Fabfluor-594로 표지된 α-CD71와 함께 배양된 HT-1080 세포는 적색 형광을 나타내며, Incucyte® Fabfluor-594 IgG 동형 대조군과 함께 배양된 세포는 세포 형광을 나타내지 않습니다. Incucyte® Opti-Green 또는 Incucyte® Fabfluor-594로 표지된 항체의 추가는 2일 동안 세포 성장에 영향을 미치지 않았습니다 (A). 표지된 CD71로 처리된 세포만 시간에 따른 적색 객체 영역 증가를 보이며 (B), 세포 영역으로 정규화하면 CD71의 일정한 발현을 보여줍니다 (C).
복잡한 공동 배양 모델을 평가하고, 시간에 따른 단백질 발현 변화를 식별하는 특정 표면 마커를 사용하여 세포 상호작용을 특성화합니다.
Ramos (B 세포 유사) 세포는 Incucyte® Opti-Green 존재 하에 다양한 Incucyte® Fabfluor-488 표지된 항체와 함께 배양되었습니다. 비특이적(CD45) 및 특이적(CD20) B 세포 마커를 사용한 장기 표지가 관찰되었습니다. T 세포 마커(CD3) 또는 동형 대조 항체에서는 형광 신호가 관찰되지 않았습니다. Ramos와 Jurkat (T 세포 유사) 세포를 고정된 비율로 혼합했을 때, 예상된 수준의 CD20 염색이 측정되어 혼합 배양의 유용성을 입증했습니다.
제품
수량
카탈로그 번호
1 바이알 (50 µg)
4745
4743
4744
BA-04873
4844
싸토리우스 인쿠사이트® 마우스 IgG2a 팹플루오르-594 항체 염색 시약
BA-04863
견적 요청
인큐사이트 파브플루오르-488 항체 염색 염료
싸토리우스 인쿠사이트® 파브플루오르-594 항체 염색 염료
라이브 세포 표면 마커와 세포 집단을 추적하기 위한 형광 Fab/Ab
네. 다양한 항체를 사용하여 일차 세포(예: PBMCs)를 포함한 여러 세포 유형(예: 라모스, 라지, 저킷)에서 Ab 내재화를 측정했습니다. 표적 특이적 내재화의 경우, Ab 흡수 정도와 속도는 세포 표면의 항원(수용체) 발현 수준 및 Ab의 결합 특성을 포함한 다양한 변수에 따라 달라집니다.
Fc 영역이 있는 항체만 우리의 접근법과 호환됩니다. Fc 사슬이 없는 항체 단편은 작동할 것으로 예상되지 않습니다.
세포 수로 정규화하고 각 시간 경과에 대한 최대 반응을 결정함으로써 반응 속도를 추정하는 것이 가능합니다. 자세한 내용은 해당 지역의 현장 응용 과학자에게 문의하시기 바랍니다.
네, 세포 건강 시약과 같이 남아있는 채널에서 모든 판독값으로 이 분석법을 다중화하는 것이 가능합니다. 이를 통해 더 많은 통찰력을 얻을 수 있습니다.
이 방법은 표적 매개 항체 내재화와 피노시틱(비특이적) 흡수를 측정하는 데 적합합니다. Incucyte® Fabfluor-pH 염료가 검사 항체의 Fc에 결합하므로, 표적 특이적 항체-항원 상호작용을 방해하지 않을 것으로 예상됩니다. Fc 결합에 의존하는 특정 항체 흡수 및 재활용 메커니즘(예: FcR 및 FcRn)은 Incucyte® Fabfluor-pH 염료의 결합 상호작용으로 인해 복잡해질 수 있습니다.
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