생세포 분석을 이용한 세포 이동 연구

통합 분석 알고리즘은 각 이미지를 자동으로 마스킹하여 상처 부위(세포 없는 영역)와 비상처 부위(세포 점유 영역)의 위치를 식별하고, 실험 전체 시간 동안 상처 폭, 상처 밀집도 및 상대적 상처 밀도(RWD)를 강력하게 측정합니다.

카탈로그 번호 9600-0012

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Incucyte^® 라이브-세포 이미징 및 분석 시스템을 사용하면 레이블 없거나 형광 표지된 주화성 세포 이동, 침습 및 경내피 이동을 실시간으로 시각화하고 정량화할 수 있습니다 - 배양기 내부에서 직접. 타임랩스 이미징과 정량적 데이터는 배양 중에 자동으로 생성되어 생리학적으로 관련된 환경에서 주화성의 시간 경과에 대한 강력한 통찰력을 제공합니다. 이 기기는 Incucyte^® Clearview 96-웰 플레이트 및 Incucyte^® 스크래치 상처 분석 소프트웨어 모듈과 함께 종말점 측정에 대한 강력한 대안과 주화성에 대한 더 나은 이해를 제공합니다.

Incucyte^® 기기 탐색

실시간으로 스크래치 상처 분석을 통해 기질(이동) 및 3D 바이오매트릭스 겔(침습)을 가로지르는 형태학적 변화를 시각화하고 자동으로 움직임을 정량화합니다. 분석 조건 및 세포 이동 프로파일의 동역학적 평가를 가능하게 하는 강력한 방법입니다.

HT-1080 세포를 웰당 30,000개 씩 파종하고 24시간 동안 밀집될 때까지 배양한 후 상처를 냅니다. HT-1080 세포는 12시간 동안 상처 부위로 이동하며, 분할 마스크는 초기 상처(파란색)와 시간에 따른 상처 치유(노란색)를 보여줍니다.

MDA-MB-231 및 BxPC3 세포를 상처 부위에 처리하기 전에 항증식 화합물인 마이토마이신 C (MMC)로 사전 처리했습니다. 24시간 후의 이미지와 정량 분석 결과, MMC는 MDA-MB-231 세포(상단 행)에 영향을 미치지 않았고 BxPC3 세포의 상처 치유를 비히클과 비교하여 감소시켰습니다. 데이터는 증식이 BxPC3 세포의 상처 치유에는 기여하지만 MDA-MB-231 세포에는 기여하지 않음을 나타냅니다.

재현 가능한 96웰 동역학 분석법은 세포 이동 및 침습에 대한 약리학적 효과의 쌍대 정량화를 가능하게 합니다. 유용성과 특이성은 이미지 및 시간 경과 움직임과 함께 조사할 수 있으며, 시간에 따른 세포 형태 변화를 모니터링할 수 있습니다. 스크래치 상처 분석법은 20개 이상의 부착성 원발 및 불멸화 세포 유형에 대해 검증되었습니다.

HT-1080 세포를 콜라겐-1이 코팅된 플레이트에 배치하고, 침습 연구를 위해 세포를 콜라겐-1로 오버레이했습니다. 세포를 블레비스타틴의 농도 범위로 처리했습니다. 마이크로플레이트 그래프는 24시간 동안의 이동 및 침습을 보여줍니다. 시간 경과 및 농도-반응 곡선은 농도 의존적 억제를 보여주며, 블레비스타틴은 이동에 비해 침습에 더 큰 영향을 미칩니다.

원발성(대뇌 피질, 해마, 소뇌) 또는 iPSC 유래(iCell, 후지필름) 별아교세포의 이동 프로파일을 평가했습니다. 이미지는 시간에 따른 iCell 별아교세포의 이동을 보여줍니다. 시간 경과 프로파일은 서로 다른 뇌 영역의 상처 치유 속도를 비교합니다. 이오노마이신으로 처리된 iCell 별아교세포에서 농도 의존적 이동 억제가 관찰되었습니다.

관련 생물학적 프로세스에 대한 추가 이해를 얻습니다. 위상차 대비 외에도 두 가지 형광 채널에서 긁힌 상처 분석을 이미징할 수 있는 능력은 사용자가 세포 주기 진행과 같은 세포 프로세스를 더욱 자세히 조사할 수 있게 해주며, 이는 세포 이동과 어떻게 관련되는지 파악할 수 있습니다.

HT-1080 세포가 Incucyte 세포 주기 녹색/적색 렌티바이러스를 안정적으로 발현하며 시토칼라신 D로 처리됨. 도식은 세포 주기 단계와 관련된 색상을 보여줌 (왼쪽), 형광은 G1(적색) 및 S|G2|M(녹색) 단계의 세포 정량화 및 시각화 가능. 녹색 및 적색 형광 이미지는 세포 이동 억제(초기 스크래치 상처는 파란색으로 표시)와 적색 세포의 높은 집단을 보여줌. 시간 경과 그래프는 시토칼라신 D가 세포 이동과 세포 주기를 G1에서 정지시켜 억제 효과가 있음을 나타냄.

Incucyte^® 스크래치 상처 분석법은 다양한 부착성 원발, 불멸화 및 종양 세포 유형에서 검증되었으며, Incucyte^® 상처 생성 도구를 사용하여 버튼 클릭 몇 초 만에 플레이트당 균일한 스크래치 상처를 생성합니다. 고유한 팁 설계는 세포를 손상시키지 않고 깨끗하고 일관된 상처를 만들며, 세포 단일층에서 세포 없는 영역을 생성하여 생물학적 일관성과 재현성을 확보합니다. 이는 스크래치 상처 분석의 중요한 부분입니다.

10 µL 피펫 팁을 사용하여 수동으로 스크래치할 때 우물 간 폭 균일성 및 우물 내 스크래치 위치의 차이를 확인하세요 (상단). 상처 생성 도구는 버튼 클릭으로 96개 우물 전체에 균일한 스크래치를 만듭니다 (하단). 시간 절약 효과가 엄청납니다.