생세포 분석을 이용한 세포 이동 연구

통합 분석 알고리즘은 각 이미지를 자동으로 마스킹하여 손상된 영역(세포가 없는 영역)과 손상되지 않은 영역(세포가 있는 영역)의 위치를 식별함으로써 실험 전체 기간 동안 손상 폭, 손상 밀집도 및 상대적 손상 밀도(RWD)에 대한 정확한 측정값을 제공합니다.

제품 번호: 9600-0012

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Incucyte^® 라이브 셀 이미징 및 분석 시스템을 사용하면 배양기 내부에서 실시간으로 라벨이 없거나 형광 라벨이 부착된 화학주성 세포의 이동, 침윤 및 내피세포 투과 이동을 시각화하고 정량화할 수 있습니다. 배양 과정 동안 타임랩스 이미징과 정량적 데이터가 자동으로 생성되어 생리학적으로 적합한 환경에서 화학주성의 시간 경과에 대한 심층적인 정보를 제공합니다. 이 장비는 Incucyte^® 클리어뷰 96웰 플레이트 및 Incucyte^® 스크래치 상처 분석 소프트웨어 모듈과 함께 사용하면 최종 시점 측정에 대한 강력한 대안을 제공하고 화학주성을 더 잘 이해할 수 있도록 도와줍니다.

Incucyte^® 기기를 살펴보세요

스크래치 상처 분석법을 이용하여 기질 표면에서의 형태 변화 시각화 및 세포 이동(이동)과 3D 생체 매트릭스 겔 내 침투(침윤)를 실시간으로 자동 정량화할 수 있습니다. 이 견고한 방법은 분석 조건 및 세포 이동 프로파일의 동역학적 평가를 가능하게 합니다.

HT-1080 세포를 웰당 3만 개씩 접종하고 24시간 동안 배양하여 세포 밀도가 높아지도록 한 후 상처를 냈습니다. HT-1080 세포는 12시간에 걸쳐 상처 부위로 이동했으며, 분할 마스크는 초기 상처(파란색)와 시간에 따른 상처 폐쇄(노란색)를 보여줍니다.

MDA-MB-231 및 BxPC3 세포에 상처를 내기 전에 항증식 화합물인 미토마이신 C(MMC)를 전처리했습니다. 24시간 후 이미지 및 정량 분석 결과, MMC는 MDA-MB-231 세포에는 영향을 미치지 않았고(상단 행), BxPC3 세포에서는 대조군(하단 행)에 비해 상처 봉합을 약화시켰습니다. 이러한 결과는 BxPC3 세포에서는 세포 증식이 상처 봉합에 기여하지만 MDA-MB-231 세포에서는 그렇지 않다는 것을 시사합니다.

재현성 있는 96웰 동역학 분석법을 통해 세포 이동 및 침윤에 대한 약리학적 효과를 쌍별로 정량화할 수 있습니다. 이미지 및 타임랩스 영상을 활용하여 시간에 따른 세포 형태 변화를 관찰함으로써 분석법의 유용성과 특이성을 검증할 수 있습니다. 스크래치 상처 분석법은 20가지 이상의 부착성 일차 세포 및 불멸화 세포 유형에 대해 검증되었습니다.

HT-1080 세포를 콜라겐-1이 코팅된 배양 접시에 접종하고, 침윤 연구를 위해 세포 표면에 콜라겐-1을 추가로 코팅했습니다. 세포에 다양한 농도의 블레비스타틴을 처리했습니다. 마이크로플레이트 그래프는 24시간 동안의 세포 이동 및 침윤을 보여줍니다. 시간 경과 및 농도-반응 곡선은 농도 의존적인 억제 효과를 나타내며, 블레비스타틴은 세포 이동보다 침윤에 더 큰 영향을 미치는 것으로 나타났습니다.

일차 세포(대뇌 피질, 해마, 소뇌) 또는 유도만능줄기세포 유래 세포(iCell, Fujifilm)의 성상세포 이동 양상을 평가했습니다. 이미지는 시간에 따른 iCell 성상세포의 이동을 보여줍니다. 시간 경과에 따른 양상은 다양한 뇌 영역에서 상처 봉합 속도를 비교합니다. 이오노마이신으로 처리한 iCell 성상세포에서는 농도 의존적인 이동 억제가 관찰되었습니다.

관련 생물학적 과정을 더욱 심층적으로 이해할 수 있습니다. 위상차 현미경 외에도 두 가지 색상의 형광 채널로 스크래치 상처 분석 이미지를 촬영할 수 있어 세포 주기 진행 및 이것이 세포 이동과 어떻게 관련되는지 등 세포 과정을 더욱 자세히 조사할 수 있습니다.

Incucyte^® 세포주기 녹색/적색 렌티바이러스를 안정적으로 발현하는 HT-1080 세포에 사이토칼라신 D를 처리했습니다. 모식도는 세포주기 단계와 관련된 색상을 보여줍니다(왼쪽). 형광을 통해 G1기(적색)와 S|G2|M기(녹색)에 있는 세포를 정량화하고 시각화할 수 있습니다. 녹색 및 적색 형광 이미지는 세포 이동 억제(초기 스크래치 상처는 파란색으로 표시)와 함께 적색 세포의 높은 비율을 보여줍니다. 시간 경과에 따른 변화는 사이토칼라신 D가 G1기 정지를 통해 세포 이동과 세포주기를 억제하는 효과를 나타냄을 보여줍니다.

Incucyte^® 스크래치 상처 분석법은 다양한 부착성 일차 세포, 불멸화 세포 및 종양 세포를 대상으로 검증되었으며, Incucyte^® 상처 생성 도구를 사용하여 버튼 하나만 누르면 몇 초 만에 플레이트당 균일한 스크래치 상처를 생성합니다. 독특한 팁 디자인은 세포 손상 없이 깨끗하고 일관된 상처를 만들어내며, 세포 밀집 단층에서 세포가 없는 영역을 생성하여 생물학적 결과를 일관되고 재현 가능하게 합니다. 이는 스크래치 상처 분석법에서 매우 중요한 부분입니다.

10µL 피펫 팁을 사용하여 수동으로 긁었을 때 웰 전체에 걸쳐 너비 균일도와 긁힘 위치의 차이가 나타나는 것을 확인하십시오(상단). Woundmaker Tool을 사용하면 버튼 하나만 누르면 96개 웰 모두에 균일한 긁힘이 생성됩니다(하단). 시간을 크게 절약할 수 있습니다.