단일 세포 클로닝을 위한 CLD

제약 세포주 개발을 위한 단일 세포 클로닝의 혁명 발견

대규모 세포 배양 플레이트 스택에서 수천 개의 세포를 파종한 후 단일 세포가 없거나, 생존 가능하지 않거나, 생산성이 없다는 것을 발견하는 것에 지치셨나요? 프로젝트의 목표 역가를 충족할 단 하나의 클론을 찾기 위해 수백 개의 플레이트를 스크리닝하는 것에 지치셨나요? 제약 세포주 개발을 우연에 맡기시겠습니까? CellCelector 단일 세포 및 콜로니 선택 플랫폼을 통해 이제 선택할 클론을 결정하기 전에 효과적으로 평가하고 검증할 수 있습니다. 일주일도 채 되지 않아 단일 세포 풀에서 단일클론, 생존 가능하고 생산적임이 입증된 클론으로 가득 찬 플레이트로 전환할 수 있습니다. 대량의 플레이트에 의존하여 승자를 찾는 대신, 이제 클론의 미래를 신뢰성 있게 예측하는 실제 데이터를 사용할 수 있습니다. 이를 통해 소모품 및 배지 비용, 배양기 공간을 절약하고, 무엇보다 불필요한 실수, 두 번째 클로닝 라운드, 불필요한 지출을 피함으로써 프로젝트 목표에 도달하는 데 귀중한 시간을 절약할 수 있습니다.

통합된 단일클론성 증명 및 생존성 평가를 포함한 원-라운드 단일 세포 클로닝 워크플로우

CellCelector는 이제 제약 생산 세포주를 빠르게 생성할 수 있는 고처리량 단일 세포 클로닝에 사용될 수 있습니다. 클론은 단 하나의 클로닝 라운드 내에서 생성되며, 강력한 공정 내 이미지 검증 단일클론성 증명(HT-NIC 방법)을 제공합니다.

클론의 통합된 단일클론성 및 생존성 평가와 96 또는 384 웰 플레이트로 클론 전송 후 업계 선도적인 생장률을 갖춘 CellCelector 단일 세포 클로닝 기술은 단일 세포 클로닝 접근법의 차세대를 대표합니다. 따라서 이는 기존 방법을 훨씬 뛰어넘어 희석 한계, 형광 활성 세포 분류(FACS) 또는 단일 세포 인쇄 기술에 대한 우수한 대안을 제공합니다. 이 특허 출원 중인 방법은 __PH_0__ 및 기타 CellCelector 고객과의 협력을 통해 개발 및 검증되었습니다.

CellCelector 나노웰 세포 배양 플레이트

HT-NIC 방법은 기반으로 합니다. 이 플레이트는 각 웰 바닥에 수천 개의 작은 나노웰이 있는 24웰 및 6웰 세포 배양 플레이트로 제공됩니다. 플레이트 유형에 따라 웰당 4,300~22,000개의 나노웰 또는 플레이트당 100,000~130,000개의 나노웰이 생성됩니다. 나노웰 내부에 있는 세포들은 서로 효과적으로 분리됩니다. 동일한 배지로 덮여 있지만 서로 완전히 격리되지는 않아 세포의 효과적인 공동 배양이 가능합니다. 풀 내의 모든 세포는 단일성을 유지하면서 세포주 성장에 기여할 것입니다. 이는 극도로 성장하기 어려운 세포주의 경우에도 업계 최고 수준의 단일 세포 성장률을 제공합니다.

CellCelector 나노웰 기반 단일 세포 클로닝 워크플로우

세포 파종은 기존 세포 배양 플레이트와 유사한 방식으로 수행됩니다. 세포를 파종한 후 클래식 포아송 분포에 따라 나노웰 내부에 무작위로 포획됩니다. 파종된 웰의 자동 스캔과 단일 세포가 포함된 모든 나노웰의 자동 식별은 강력하고 문서화된 방법을 제공합니다. 파종된 세포 수에 따라 웰당 400~600개의 단일 세포가 포획되어 분석될 수 있습니다. 여러 웰에 파종하면 단일 세포가 포함된 최대 약 14,000개의 나노웰을 단 하나의 플레이트 내에서 시작할 수 있습니다.

단일클론성이 입증된 후 세포는 배양기에서 3~6일 동안 클론당 20~75개의 세포까지 성장합니다. 기존의 메틸셀룰로오스 기반 접근법과 달리 CellCelector 나노웰 기반 방법은 액체 배지에서 군체 성장을 허용합니다. 클론들은 동일한 배지를 공유하지만 나노웰 벽에 의해 효과적으로 서로 분리됩니다. 세포들이 단일 세포 클론으로 성장한 후 나노웰 플레이트를 다시 스캔하여 단일클론성이 있고 생존 가능한 클론을 자동으로 선택하고 추가 분석 및 규모 확대를 위해 96- 또는 384-웰 플레이트로 이동시킵니다.

자동화된 단일 클론성 증명: 나노웰에서의 강력한 단일 세포 검출

기존의 단일 세포 클로닝 워크플로우에서는 96웰 플레이트에 단일 세포를 파종하기 때문에, 세포가 종종 웰의 가장자리에 정착하여 밝은 시야에서 신뢰할 수 있는 자동화된 단일 세포 검출이 어렵습니다. 따라서 주어진 클론의 단일 클론성 상태는 일반적으로 수동으로 또는 클론이 성장한 후에 소급하여 확인됩니다. 하지만 세포가 차지하는 표면보다 100배 이상 큰 웰 영역 내에서 단일 세포를 왜 찾아야 할까요? CellCelector HT-NIC 접근법에서는 세포가 200 µm 크기의 나노웰 내에서 분리되고 명확하게 보이므로 소프트웨어에 의해 신뢰성 있고 자동으로 식별될 수 있습니다. 파종된 직후나 나노웰 경계에 닿았을 때에도 가능합니다.

한계 희석 대신, CellCelector는 100% 단일 클론성 제공

한계 희석은 단일 세포 클로닝의 잘 알려진 전통적인 방법으로, 포아송 분포에 따라 웰당 평균 세포 수에 의존하는 단일 클론성에 대한 통계적 확률에만 기반합니다. 다클론성 웰의 비율을 제한하기 위해 일반적으로 웰당 0.2개 미만의 세포로 파종됩니다. 불행히도 이는 단일 클론성 웰이 약 16%만 생성됨을 의미합니다(즉, 플레이트의 7/8은 비어 있게 됨). 400개의 단일 세포 웰을 얻기 위해서는 25개 이상의 96웰 플레이트를 파종해야 합니다. 다클론성 웰의 상당한 증가를 감수하면 웰당 0.5개 세포를 파종하여 단일 세포 웰의 수를 두 배로 늘릴 수 있습니다.

CellCelector HT-NIC 클로닝 방법은 샘플 준비, 세포 유형 또는 나노웰 플레이트에 파종된 세포 밀도와 무관하게 단일 세포 나노웰의 자동 식별, 클론으로의 성장 추적 및 교차 오염 없는 성장 클론의 96웰 플레이트로의 이동을 제공합니다.

이 그림은 두 가지 파종 밀도로 사용된 한계 희석법과 비교하여 CellCelector 나노웰 기반 클로닝 방법으로 단일클론 웰을 얻는 효율성을 보여줍니다.

0.2 세포/웰 또는 0.5 세포/웰의 파종 밀도로 한계 희석법을 사용하여 400개의 단일클론 웰을 얻으려면 각각 26개 또는 13개의 96-웰 플레이트가 필요합니다. 동일한 수의 단일 세포 나노웰에 도달하기 위해서는 CellCelector 나노웰 플레이트의 단 한 개의 웰만 충분할 것입니다.

단일 세포 클론의 최고 생존율 확보하기

한계 희석법은 파종된 웰 중 단 10%에서 20%만이 단일 세포로부터 성장한 생존 가능한 클론을 생성합니다. FACS 단일 세포 분류 또는 단일 세포 인쇄와 같은 다른 전통적인 방법은 웰에 파종된 단일 세포의 비율을 훨씬 더 높입니다. 유세포 분석에 일반적으로 수반되는 높은 전단 응력과 파종된 단일 세포가 큰 양의 배지에 홀로 놓이는 사실로 인해 30%에서 64% 사이의 불확실한 성장률을 보입니다. 또한 이는 특수하고 비싼 클로닝 배지와 외부 성장 인자를 필요로 하며, 단순히 단일 세포에서 자라지 않는 까다로운 세포주에는 부적합합니다.

그러나 CellCelector HT-NIC 방법에서는 파종된 모든 세포가 동일한 배지를 공유하고 클로날성을 저해하지 않고 자연적인 성장 인자를 방출하여 서로의 성장에 기여합니다. 클론이 단일클론이고 생존 가능함이 입증된 후에만 선택되어 96-웰 플레이트로 부드럽게 이동됩니다. 이제 단일 세포 대신 생존 가능하고 단일클론인 작은 클론이 이동되므로 큰 웰에서 계속 성장할 것입니다.

교차 오염을 제거하는 일회용 소모품

싸토리우스는 클로닝 실험 간 교차 오염을 방지하기 위한 저렴한 일회용 CellCelector를 제공하며 사용 가능합니다. 하나의 유리 모세관과 하나의 나노웰 플레이트(또는 해당 플레이트의 몇 개 웰)만으로도 클론 전송에 사용되는 목적지 마이크로플레이트 수에 제한 없이 단일 세포 클로닝 실험을 수행할 수 있습니다.

예산 제약에 따라 시스템은 실험 후 사용된 모세관을 자동으로 헹구고 살균하여 나중에 재사용할 수 있습니다.

제어된 무균 환경에서의 신뢰할 수 있는 단일 세포 클로닝

CellCelector 시스템을 무균 조건에서 분석 및 클론 전송을 수행하기 위해 생물안전 캐비닛 내부에 배치할 수 있습니다. 이는 표준 후드 또는 시스템과 함께 제공되는 맞춤형 상자일 수 있습니다. 세포 생존력과 분석 안정성을 더욱 개선하기 위해 CellCelector는 온도, 습도 및 CO₂ 제어와 멸균을 위한 UV 램프를 결합한 컴팩트한 층류 세포 배양 후드와 결합된 Incubator FlowBox에도 설치할 수 있습니다.