CRISPR/Cas를 이용한 유전자 편집: 표적 세포 분리 및 단일 세포 클로닝을 위한 완벽한 도구로서의 CellCelector

CRISPR-Cas9 게놈 편집은 세포를 유전적으로 수정하는 방법입니다. 이를 위해 세포에 Cas9 뉴클레아제(DNA를 비특이적으로 자르는 효소)와 Cas9 뉴클레아제를 DNA 위치로 안내하는 합성 가이드 RNA를 형질주입합니다. 결과적인 이중 가닥 절단은 세포 내재적 복구 시스템을 활성화합니다. 복구 주형을 추가함으로써 상동 방향 복구(HDR)는 복구 중에 서열을 삽입하여 녹인 돌연변이를 만들 수 있습니다. 복구 주형이 없는 경우, 복구는 비상동적 말단 결합(NHEJ)에 의해 실현됩니다. 그러나 NHEJ는 종종 작은 결실이나 삽입을 유발하여 복구된 유전자의 서열을 방해하고, 녹아웃 돌연변이를 초래합니다.

그러나 CRISPR-Cas9 편집의 결과는 세포 간에 다를 수 있어 불균일한 세포 집단을 만들 수 있습니다. 많은 실험 설정에서는 세포가 균일한 유전적 배경을 가져야 합니다. 이는 원하는 유전형을 가진 세포의 단일 세포 클로닝을 통해 달성할 수 있습니다.

CellCelector는 이 응용 프로그램에 완벽한 도구입니다. Probiogen AG와 협력하여 개발된 새로운 방법은 일반적으로 사용되는 클로닝 방법(예: 제한된 희석 클로닝)에 비해 여러 가지 장점을 제공합니다. 이 방법에는 단일 세포 희석 단계가 포함되어 세포가 완전히 서로 분리되어 단일클론성을 제공합니다. 그러나 많은 세포는 세포-세포 간 통신 부족으로 인해 단일 세포 희석을 견디지 못할 수 있어 세포 손실이 높아집니다. 새로운 방법으로 이 문제를 해결했습니다. 상당한 비용 및 시간 절감, 그리고 통합된 단일클론성 및 생존성 증명은 HT-NIC 방법의 매력을 높입니다.