정자 세포 분리

CellCelector를 이용한 단일 정자 세포의 자동화된 분리

단일 정자 세포의 분리는 가족 관계에 대한 의문을 명확히 하기 위한 유전자 지문 채취, 성범죄를 밝히기 위한 법의학, 그리고 체외 수정 과정을 위해 중요하다.

여기서는 CellCelector 플랫폼을 사용하여 단일 정자 세포를 분리하는 방법을 설명한다.

고도로 정밀한 로봇 기술과 도립 현미경의 독특한 조합은 유리 모세관을 사용하여 단일 정자 세포의 검출과 분리를 자동화할 수 있게 한다. 시간이 많이 소요되는 수동 작업은 CellCelector 시스템을 사용하여 표준화된 조건으로 대체될 수 있다.

단일 정자 세포들이 20배 대물렌즈를 사용하여 밝은 시야 조명에서 관찰되고 분리되었습니다.

특수 현미경 측정 소프트웨어 기능을 사용하여 정자 세포의 크기를 약 5 x 33 µm로 결정했습니다.

더 나은 시야를 위해 사각형으로 표시된 영역이 확대되어 표시됩니다(오른쪽 하단).

단일 정자 세포 검출

단일 정자 세포의 감지는 라이브 이미지 화면에서 마우스 클릭으로 수동 모드로 수행하거나, 샘플 스캔 후 조정된 감지 매개변수(지름, 면적, 신장 등)를 사용하여 자동으로 수행할 수 있습니다.

기본 감지는 회색 값의 범위를 정의하여 수행됩니다. 대상 세포는 인접 세포와 배경에서 분리될 수 있습니다. 회색 값 임계값을 어떻게 설정했는지에 따라 전체 단일 정자 또는 정자 세포의 머리 부분만 감지될 수 있습니다.

단일 인간 정자 세포를 자동으로 감지하기 위한 매개변수 설정.

서로 다른 회색 값 범위(A & B)는 참조 이미지(C)를 기반으로 정자의 서로 다른 부분(D와 E, 녹색으로 표시된 감지 영역)을 감지할 수 있습니다. 지름, 면적, 신장(F)과 같은 추가 매개변수를 고려하면 스캔 결과를 더욱 개선할 수 있습니다(G와 H).

단일 정자 세포 분리

내경 30 µm의 붕규산 유리 모세관을 사용하여 단일 정자 세포를 분리했습니다. 60 nl 액체 부피를 사용하여 세포 바로 위에 흡입 압력을 개발함으로써, 세포를 바닥에서 분리하고 액체와 함께 유리 모세관으로 흡수시켰습니다. 분리된 정자 세포들은 2x9-웰 Ibidi-슬라이드의 개별 웰로 이동되었습니다. 각 단일 세포 분리는 선택 과정 전후에 촬영된 이미지로 자동 문서화되며, 이 이미지들은 데이터베이스에 저장됩니다.

단일 정자 세포 분리 직전(왼쪽)과 직후(오른쪽)의 현미경 이미지

데모, 문헌 또는 추가 정보 요청