Vivapure^® S 이온 교환막 흡착제를 이용한 식물 캘러스로부터의 과산화효소의 신속한 분리 – 응용 노트

이온 교환 크로마토그래피는 단백질 생화학에서 가장 널리 사용되는 기술 중 하나입니다. 그러나 여러 시료를 동시에 분석하는 데 필요한 속도와 성능을 제공하는 상용 장비가 부족한 실정입니다. 최근 저희 연구실에서는 포도나무 캘러스에서 유래한 40 kDa 염기성 퍼옥시다아제에 관심을 갖게 되었습니다. 이 효소는 병원균 침입에 대한 세포벽의 신속한 방어에 중요한 역할을 합니다. 하지만 캘러스 배양에서 이 퍼옥시다아제의 수율이 낮아 소량만 정제할 수 있었기 때문에 상세한 연구가 제한적이었습니다.

본 연구에서는 이 과산화효소를 더 많이 분비하는 캘러스 배양체를 선별하여, 이를 대규모 정제에 더욱 편리한 조직 공급원으로 활용하고자 합니다. 이를 위해 양이온 교환 크로마토그래피를 이용하여 다른 세포벽 과산화효소로부터 이 과산화효소를 분리하고, SDS-PAGE 및 과산화효소 활성 측정을 통해 다양한 캘러스 배양체에서 이 과산화효소의 존재량을 정량화할 계획입니다.

다양한 포도나무 시료에 대한 초기 분석에서는 기존의 SP-Sepharose 컬럼 크로마토그래피를 사용했습니다. 그러나 이 방법은 시간이 많이 소요되고 하루에 처리할 수 있는 시료의 양이 매우 적다는 것을 알게 되었습니다. 또한 소량 시료의 분획에는 적합하지 않아, 대신 설폰산계 수지를 이용한 배치 정제 방식을 시도했습니다. 이 경우, 목표 단백질의 높은 회수율을 얻기 위해 수지를 광범위하게 세척해야 했고, 이로 인해 시료가 희석되었습니다.

본 응용 자료는 Plant Biochemistry, ITQB NOVA, Oeiras와의 협력 하에 작성되었습니다.

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