생물공정 최적화: 신속하고 정확한 감염 역가 측정 보장

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응용 노트: 렌티바이러스 역가 측정을 위한 실시간 생세포 분석

칼파나 반스, 제니퍼 J. 라비쉬, 필립 위제, 칼 플란츠 | 2022년 1월

개요

바이러스 벡터는 유전자 치료에서 핵심적인 역할을 하며, 특히 렌티바이러스 벡터(LV)는 CAR-T 세포 치료에 가장 널리 사용됩니다. 그러나 이러한 벡터의 품질 관리는 공정 개발 및 생산에 있어 중요한 병목 현상입니다. qPCR 및 유세포 분석과 같은 기존 방법은 처리량이 낮고 수작업이 많이 필요하다는 한계가 있습니다.

이러한 어려움을 극복하기 위해, 본 연구에서는 Incucyte® 생세포 분석 시스템을 활용한 새로운 실시간 이미지 기반 접근 방식을 소개합니다. 이 방법은 Incucyte® Fabfluor-488 항체 표지 및 Incucyte® 세포독성 염료를 이용하여 생세포 내 기능성 렌티바이러스 역가를 동역학적으로 정량화합니다. 이 혁신적인 솔루션은 신속하고 정확한 감염 역가 측정에 대한 요구를 충족시켜 공정 개발 및 최적화를 촉진합니다.


  • 애플리케이션 노트
  • 페이지 수: 9
  • 16분


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핵심 요약

  • 감염성 바이러스 역가의 고처리량 기능적 정량화를 위한 간단하고 신속하며 비침습적인 접근법
  • 실시간 동적 판독 및 통합 소프트웨어가 시간에 따른 형질전환 세포 추적을 가능하게 하는 방법
  • 실시간 항체 역가 분석, 공정 모니터링 및 렌티바이러스 벡터 생산 최적화에 대한 연구
  • 바이러스 벡터 개발 개선을 위한 최적의 처리 조건을 결정하기 위한 분석법의 유연성 및 적용 가능성

Incucyte® 렌티바이러스 역가 분석 워크플로우

HEK293T 세포를 검은색 벽면의 폴리-L-라이신 코팅 처리된 96웰 조직 배양 플레이트(Corning)에 접종하였다(웰당 6 x 10³개 세포, 50 μL). 2일째 되는 날, 폴리브렌(8 μg/mL) 존재 하에 렌티바이러스 벡터의 희석액 시리즈를 이용하여 세포를 형질전환시켰다. 형질전환 24시간 후, 형질전환 혼합물을 제거하고 검출 시약 혼합물(50 μL, 2.5 μg/mL FAC Incucyte® Fabfluor-488 표지 항-FMC63 scFv 항체 1:200 희석액, 50 μL, 0.5 mM FAC Incucyte® Opti-Green 배경 억제제, 50 μL, 250 nM FAC Incucyte® Cytotox Red)로 교체하였다.

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