생물공정 최적화: 신속하고 정확한 감염 역가 측정 보장

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실시간 생세포 분석을 통한 렌티바이러스 역가 측정에 관한 응용 노트

Kalpana Barnes, Jennifer J. Labisch, Philip Wiese, Karl Pflanz | 2022년 1월

개요

바이러스성 벡터는 유전자 치료에서 중추적인 역할을 하며, 렌티바이러스 벡터(LV)는 CAR-T 세포 치료의 주요 선택입니다. 그러나 이러한 벡터의 품질 관리는 공정 개발 및 생산의 주요 병목 지점입니다. qPCR 및 유세포 분석과 같은 기존 방법은 낮은 처리량과 광범위한 수동 처리로 인해 제한적입니다.

이러한 과제를 극복하기 위해, 우리는 Incucyte® 생세포 분석 시스템을 사용하는 새로운 실시간, 이미지 기반 접근 방식을 소개합니다. 이 방법은 Incucyte® Fabfluor-488 항체 표지 및 Incucyte® 세포독성 염료를 활용하여 생세포에서 기능적 렌티바이러스 역가를 동역학적으로 정량화합니다. 이 혁신적인 솔루션은 신속하고 정확한 감염성 역가 결정의 필요성을 해결하여 공정 개발 및 최적화를 촉진합니다.


  • 응용 노트
  • 페이지 수: 9
  • 16분


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주요 포인트

  • 감염성 역가의 고처리량 기능적 정량을 위한 간단하고 신속한 비침습적 접근법
  • 실시간 동역학 판독 및 통합 소프트웨어가 시간에 따른 형질전환 세포 추적을 가능하게 하는 방법
  • 실시간 역가 인사이트, 공정 중 모니터링 및 렌티바이러스 벡터 생산 최적화 탐색
  • 바이러스 벡터 개발 개선을 위한 최적 처리 조건 결정을 위한 분석 유연성 및 적용성

Incucyte® 렌티바이러스 역가 분석 워크플로우

HEK293T 세포를 (6 x 103 개의 세포, 웰당 50 μL) 검은색 벽면의 96-웰 폴리-L-라이신 코팅된 조직 배양 처리 플레이트(Corning)에 파종했습니다. 2일째, 세포를 폴리브렌(8 μg/mL) 존재 하에 렌티바이러스 벡터의 희석 시리즈로 형질감염시켰습니다. 형질감염 후 24시간, 형질감염 혼합물을 제거하고 검출 시약 칵테일(50 μL, 2.5 μg/mL FAC Incucyte® Fabfluor-488 표지된 항-FMC63 scFv 항체 1:200 희석, 50 μL, 0.5 mM FAC Incucyte® Opti-Green 배경 억제제, 50 μL, 250 nM FAC Incucyte® Cytotox Red)로 대체했습니다.

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