실시간 라이브 세포 분석을 통한 B 세포 적응 면역 이해

B세포

B 세포는 적응 면역 체계의 중심에 있으며 침입성 병원체에 대항하는 항원 특이적 면역글로불린 생산을 담당합니다. B 세포 활성화 및 증식은 항체 분비에 중요하지만 지속적인 자극은 B 세포 백혈병 및 호지킨 림프종 및 비호지킨 림프종과 같은 림프종의 생존 및 성장으로 이어질 수도 있습니다.

Incucyte® 생세포 분석 시스템은 활성화 및 클러스터링, 항체 내재화 분석을 포함한 B 세포의 주요 기능을 평가하고 세포사멸 및 면역 세포 사멸 분석을 통해 B 세포 암의 세포 사멸을 평가하는 데 사용되었습니다.


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면역학 탐구

활성화 및 클러스터링

B 세포주인 WIL-2NS 세포의 증식은 위상차 영상을 통해 정량화되었습니다.  예상대로 시작 합류점은 파종 밀도에 따라 달라집니다.  합류 측정의 검증은 웰당 알려진 양의 세포를 시딩하여 정착시킨 다음 위상차 알고리즘을 사용하여 정량화함으로써 달성되었습니다.  또한, 이후 세포를 투과화하고 ATP 함량을 결정하여 2차 판독을 제공했습니다.  합류율(%)과 세포 수 또는 ATP 측정 사이에 매우 강한 상관관계가 관찰되었습니다.

아포토시스(Annexin V Green)

Incucyte® Annexin V Green 시약이 있는 상태에서 차량 또는 캄프토테신(1μM)에 노출된 후 24시간 후에 촬영한 WIL2-NS B 림프종 세포의 대표 이미지.  시간 경과에 따라 Incucyte® Annexin V Green 시약에서 나오는 녹색 형광의 증가가 나타나며, 이는 캄프토테신에 의해 유도된 외부화된 포스파티딜세린의 시간 및 농도 의존적 ​​증가를 나타냅니다.

면역 세포 살해

치료되지 않았거나 IL-2(10ng/ml) 및 IL-12(10ng/mL) 또는 Rituxan(15ng/mL~100ug/mL)이 있는 면역 세포가 있는 상태에서 NucLight® Red 핵 마커를 발현하는 Ramos B 림프구의 혼합 상 및 형광 이미지. 세포 독성은 적색 형광 강도의 손실을 기준으로 정량화되었습니다.

항체 내재화 정량화

Raji(B 세포 유사) 세포(30K/웰)를 Incucyte® FabFluor 표지된 Rituxan(10ng/mL ~ 10μg/mL)으로 처리했습니다. HD 위상 및 적색 형광 이미지는 12시간 동안 20x 대물렌즈를 사용하여 30분마다 캡처되었습니다. 모든 데이터는 최소 4개 웰 ± SEM의 평균으로 표시되며 시간 경과 데이터는 정규화된 빨간색 영역(빨간색 영역/위상 영역)으로 표시됩니다.