싸토리우스 DNA 생산
플라스미드 DNA (pDNA)는 재조합 단백질, 바이러스 벡터, 그리고 첨단 생물치료제 개발을 포함한 많은 유전자 공학 추구의 중요한 출발점을 나타냅니다. 유전자 치료와 DNA에서의 지속적인 진전은 임상 응용에 적합한 신뢰할 수 있는 pDNA 생산 공정에 대한 수요 증가로 이어졌습니다.
플라스미드는 박테리아에서 자연적으로 발견되는 원형 DNA 분자입니다. 이들은 세균 게놈 DNA와 독립적으로 복제되며(에피좀), 이러한 특성으로 인해 유전자 공학의 벡터로 이상적으로 적합합니다. 정제된 pDNA는 아데노 연관 바이러스(AAV) 및 렌티바이러스 벡터 생산, 전사(IVT) 반응 중, 그리고 직접 유전자 전달과 같은 과정의 원료로 사용될 수 있습니다.
싸토리우스는 pDNA 생산 전반에 걸쳐 효율적인 제조를 위한 다양한 도구를 제공합니다. 아래에서 박테리아부터 최종 여과까지의 플라스미드 DNA 제조 과정을 살펴보고, 모든 단계를 안내하는 솔루션을 발견해보세요.
pDNA의 크기, 전단 민감성, 일부 오염 물질과의 유사성으로 인해 높은 수율을 회수하는 것은 까다로울 수 있습니다.
플라스미드 DNA를 분리하는 데 필요한 일반적인 단계
pDNA 정제를 위한 2단계 플랫폼
관심 유전자는 pDNA에 삽입되며, 일반적으로 전기천공법을 통해 숙주 박테리아(주로 대장균)에 도입됩니다. 숙주 세포는 발효 과정 중에 복제되어 플라스미드의 사본을 만들고 원하는 서열을 대량 생산합니다. 세포가 원하는 밀도에 도달하면 수확되고, pDNA는 일반적으로 알칼리 용해법으로 추출됩니다. 용해액은 이후 정제되고, pDNA는 크로마토그래피를 사용하여 정제됩니다. 마지막으로 플라스미드는 농축 및 여과된 후 제품의 충분한 순도를 보장하기 위한 품질 관리 조치를 거칩니다.
업스트림 공정의 목적은 숙주 세포 집단을 이용하여 가능한 한 많은 플라스미드 DNA(pDNA)를 생성하는 것입니다. 일반적으로 E. coli는 빠르게 증식하고 높은 수율의 pDNA를 생산할 수 있기 때문에 사용됩니다. 고생산성 클론을 선택하여 시드 트레인을 형성하며, 이는 생산 배양기를 접종하는 데 충분한 세포 수를 제공합니다. 배양 후 세포는 보통 원심분리를 통해 수확됩니다.
세포 성장을 최적화하고 간단하고 신뢰할 수 있는 방식으로 플라스미드 수율을 최대화할 수 있는 확장 가능한 생산 플랫폼
싸토리우스는 모든 생산 규모에서 미생물 발효를 위한 다양한 솔루션을 제공합니다.
10~200L의 용기 크기를 가진 컴팩트한 바이오프로세스 시스템으로, E. 콜라이의 고밀도 발효 요구사항을 충족합니다(>50 OD).
전문가와 상담하기
세포 용해의 목적은 플라스미드 DNA(pDNA)를 추출하고 세포 잔해와 게놈 DNA를 제거하는 것입니다. 숙주 세포를 수확한 후, 세포 펠렛을 수산화나트륨(NaOH) 용액으로 용해하고 이후 아세트산 칼륨으로 중화합니다. 결과적인 침전물에는 숙주 세포 단백질 및 DNA를 포함한 불순물이 포함됩니다.
알칼리 용해로 수집된 물질에는 숙주 세포의 오염 물질과 함께 pDNA가 포함되어 있습니다. 정제 과정은 고밀도 세포 배양에서 pDNA를 정제하고 세포 잔해와 불순물을 제거합니다.
최고 밀도의 세포 용해물에서도 불순물을 분리할 수 있는 최적의 pDNA 정제 솔루션
싸토리우스는 공정 개발부터 대규모 상업 생산까지 다양한 접선류 여과(TFF) 소모품을 제공합니다. 당사의 중공 섬유 모듈은 특히 고세포 밀도 환경에서 세포 용해물을 명확히 하기 위한 완전히 확장 가능한 플랫폼을 제공합니다. 중간 또는 낮은 세포 농도에 권장됩니다.
pDNA의 농축, 오염물질 제거, 완충액 교환 단계는 pDNA 생산에 필수적이지만, pDNA의 큰 크기와 전단 민감성으로 인해 도전적일 수 있습니다. 최신 혁신 기술은 저전단 작업과 완전 밀폐 공정을 결합하여 밀폐 시스템 내에서 최고 수준의 회수율을 허용하고, pDNA 제조를 위한 이상적인 환경을 조성합니다.
대형 민감 분자를 위한 맞춤형 농축 솔루션
싸토리우스는 생체분자의 농축/투석에 적합한 강력한 제품 포트폴리오를 제공합니다. 당사의 중공 섬유 일회용 흐름 조립체는 플라스미드 DNA를 농축하기 위한 완전히 확장 가능한 시스템을 나타냅니다
바이오의약품으로서 pDNA는 순도, 효능 및 수율에 대한 엄격한 요구 사항의 적용을 받습니다. pDNA 캡처는 다운스트림 공정에서 중요한 단계로, 대부분의 오염 물질을 제거하면서 pDNA를 농축합니다.
대용량 분자에 적합하고 민감하며 전단력이 낮은 pDNA 포집 공정
싸토리우스의 전문 과학자들이 개발한 pDNA 정제를 위한 엔드 투 엔드 솔루션입니다.
컬럼은 pDNA의 효과적인 정제를 위한 플러그 앤 플레이 플랫폼의 첫 번째 단계를 나타냅니다
슈퍼코일드(SC) pDNA를 개방형 원형(OC) 및 선형 DNA로부터 분리하기 위해 추가적인 폴리싱 크로마토그래피 단계가 필요합니다. 제약용 pDNA는 순도, 균일성, 효능에 대해 엄격한 요구사항을 가지며, SC pDNA는 가장 안정적이고 효율적이며 생물학적으로 활성이 높은 형태입니다
균일한 pDNA 추출물을 안정적으로 생산하는 효율적이고 강력한 폴리싱 크로마토그래피 솔루션
싸토리우스의 제품은 포괄적인 pDNA 정제 솔루션입니다. 컬럼은 두 번째 단계를 형성합니다.
최종 무균 여과 단계는 미생물 오염을 방지하고 환자 안전을 보장하는 데 매우 중요합니다. 혁신적인 위험 완화 전략은 마지막 여과 단계부터 일회용 백 보관까지 전체 작업의 무결성을 보호할 것입니다.
대형, 전단에 민감한 pDNA 분자에 적용 가능한 무균 여과 솔루션
싸토리우스는 귀하의 애플리케이션에 가장 첨단의 무균 필터를 제공합니다. 이 제품군은 최저 여과 비용으로 모든 유형의 제품에 완벽하게 적용되는 가장 폭넓은 PES 멤브레인 조합을 포함하고 있습니다
분석은 pDNA 정제 과정 전반에 걸쳐 불순물의 존재를 확인하고 제품을 정량화하는 데 필수적입니다. 제공되는 정보는 공정 제어, 강건성, 그리고 높은 제품 품질을 지원합니다.
pDNA 샘플의 포괄적인 평가를 제공하는 분석 솔루션
싸토리우스는 pDNA 샘플을 모니터링하고 제어할 수 있는 완전한 솔루션을 제공합니다.
당사의 제품은 플라스미드 DNA의 신속하고 재현 가능한 HPLC 모니터링 및 정량화, 그리고 다양한 플라스미드 DNA 이소형의 분리를 위해 설계되었습니다.
싸토리우스는 과학자들이 자체 플라스미드 DNA 정제 프로세스를 개발하고 생산으로 전환할 수 있도록 즉시 사용 가능한 플라스미드 DNA 정제 팩을 만들었습니다. HiP2 플랫폼은 음이온 교환 크로마토그래피와 소수성 상호작용 크로마토그래피의 두 단계를 통해 효율적으로 플라스미드 DNA를 회수할 수 있게 합니다.
플라스미드 DNA 정제 중 모노리스의 폴리싱 크로마토그래피 성능에 대해 자세히 알아보기
애플리케이션 노트 다운로드
모든 불순물의 탁월한 제거는 이소형 분리를 포함한 고순도의 균일한 pDNA 샘플을 생성합니다
대용량 플라스미드에서도 회수율과 용량을 저하시키지 않고 신속한 처리 수행
공정에 신속하고 쉽게 통합할 수 있는 상세 프로토콜과 즉시 사용 가능한 두 개의 컬럼이 포함된 툴박스
약한 음이온 교환 크로마토그래피를 사용하여, CIMmultus® 디에틸아민(DEAE)은 pDNA를 농축하고 대부분의 오염된 숙주 세포 단백질, mRNA, 그리고 게놈 DNA를 제거합니다.
싸토리우스의 2단계 플라스미드 프로세스 팩에서 초기 캡처를 수행합니다
다른 정제 방법에서 얻은 명확화된 용해물 또는 부분 정제된 플라스미드를 처리하는 데 사용할 수 있습니다
단일 피크에 집중된 pDNA 분자에 대한 높은 수용 능력
대부분의 불순물은 결합하지 않으며(RNA는 NaCl의 첫 번째 증가 후 용출되는 예외)
pDNA 크기는 제한 요인이 아닙니다
11 kb 이상의 pDNA의 경우, 6 μm 채널을 권장합니다
싸토리우스 멤브레인 추출물의 pDNA 크로마토그램을 CIMmultus® DEAE에 적용했습니다. pDNA는 RNA 및 기타 오염 물질로부터 효과적으로 분리됩니다.
싸토리우스 CIMmultus® C4 고밀도 리간드 (HLD) 부틸 변형 모노리식 컬럼은 잔여 게놈 DNA, 엔도톡신, 개방형 원형 (OC) 및 선형 pDNA 이소형을 제거하고, 슈퍼코일드 (SC) pDNA를 분리합니다.
2단계 플라스미드 공정 팩의 폴리싱 단계를 수행합니다
고염 농도에서 pDNA 결합 촉진
비-DNA 오염물질의 나머지 제거
초고리 pDNA를 다른 이소형으로부터 분리하는 것을 용이하게 합니다
pDNA 정제는 결합-용출 및 샘플 변위 모드 모두에서 수행될 수 있습니다
견적 요청
싸토리우스 CIMmultus® C4 HLD에 적용된 포획 pDNA의 크로마토그램. 잔여 오염 물질이 제거되고, SC pDNA가 OC pDNA로부터 효율적으로 분리됩니다.
mRNA 분자가 어떻게 제조되는지, 그리고 당사의 도구가 모든 단계에서 귀하의 공정을 최적화하는 데 어떻게 도움을 줄 수 있는지 알아보세요.
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