준비: 세포 계대, 확장 및 배양 오염

선택하는 세포 배양 배지는 실험 설계에서 가장 중요한 측면 중 하나입니다. 선택은 배양할 세포의 유형과 배양 목적에 따라 달라져야 합니다. 서로 다른 세포주와 세포 유형은 매우 특정한 성장 요구 사항을 가지고 있으며, 선택한 세포의 성장 요구 사항을 충족시키기 위한 다양한 배지 조성물을 사용할 수 있습니다. 완제 배지를 구매하거나 실험실에서 분말 형태로 준비할 수 있습니다. 후자의 경우, 물은 세포와 함께 사용하는 배지, 완충액 및 첨가제의 주요 구성 요소이며, 물의 품질은 모든 세포 배양 실험에서 중요한 역할을 합니다.

세포가 건강하고 실험마다 일관되게 작동하도록 오염 물질이 없는 고품질의 물을 사용하십시오.

화학 물질 또는 엔도톡신, 무기 이온, 유기 화합물과 같은 육안으로 감지할 수 없는 생물학적 물질의 오염은 세포의 성장, 형태, 행동에 영향을 미칠 수 있습니다. 일반적인 수돗물에는 1-10 IU/mL의 엔도톡신 오염이 포함되어 있지만, 국제 표준은 세포 배양 용수에 0.1 IU/mL 미만의 엔도톡신 오염을 요구합니다. 이는 세포 배양에 사용하는 물에서 엔도톡신을 제거해야 함을 의미합니다. 적절한 수처리 시스템을 사용하면 일관되고 재현 가능한 세포 배양 실험을 위한 건강한 세포를 성장시킬 수 있습니다.

부착성 또는 부유성 세포주로 작업하든 간에, 배양된 세포는 정기적으로 계대배양 또는 아계대배양을 해야 합니다. 안타깝게도 계대배양은 배양 용기를 열고, 세포를 다루고, 새로운 배지와 구성 요소를 추가하는 과정에서 오염의 위험이 있습니다. 이러한 모든 단계는 오염원이 유입될 기회를 제공합니다.

적절한 무균 기술을 따르고, 신속하게 작업하며, 최상의 도구와 오염되지 않은 시약을 사용하면 세포 배양에 오염원을 유입할 가능성을 줄일 수 있습니다. 특히, 무균 필터 피펫과 피펫 팁을 사용하여 신속하고 효율적으로 작업할 수 있는 적절한 무균 피펫 기술을 사용하는 것이 필수적입니다.

오염을 실험 중단 전에 차단하세요. 세포 배양의 주요 도전 과제 중 하나는 오염 위험입니다. 오염은 다양한 형태로 발생할 수 있습니다: 박테리아, 효모, 곰팡이, 화학물질, 기타 생물학적 인자, 세포주 교차 오염 또는 이들의 조합. 오염은 세포의 성장, 형태, 행동에 영향을 미칠 수 있으며, 궁극적으로 실험 결과를 손상시키거나 프로젝트 진행을 지연시킬 수 있습니다.