T세포 활성화 | 표현형 및 기능 키트

새로운 치료용 항체를 발견하든, 특정 면역관문 억제제를 개발하든, CAR T세포 기능을 평가하든, 연구를 진전시키려면 생물학적으로 의미 있고 재현 가능하며 비용 효율적인 방식으로 더 많은 샘플을 신속하게 평가할 수 있어야 합니다.

iQue^® HTS 플랫폼은 고정된 넓은 동적 범위를 활용하여 분비된 사이토카인의 표현형 및 기능 분석을 동시에 수행할 수 있으므로, 서로 다른 시점의 데이터 불일치나 후속 분석을 위해 샘플을 분할해야 하는 필요성을 없애줍니다.

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다양한 T 세포 표현형은 3가지 활성화 마커(CD69(초기), CD25(후기), HLA-DR(더 후기))의 발현을 기준으로 분석됩니다. 2가지 효과기 사이토카인(IFNγ 및 TNFα) 또한 동일한 웰에서 샌드위치 면역 분석법을 이용하여 2-plex Qbeads로 정량화됩니다. T 세포 증식 또는 표적 세포의 동시 측정이 가능하지만, 본 그림에는 포함되어 있지 않습니다.

그림 1. 인간 T세포 활성화 키트 검사 원리 모식도.

PBMC에 다양한 키나제 억제제(20 µM)를 1시간 동안 처리했습니다. 그런 다음 CD3/CD28 다이나비드를 첨가하여 24시간 동안 활성화를 유도했습니다. 10 µL 샘플을 T 세포 활성화 세포 및 사이토카인 프로파일링 키트와 iQue^® HTS 플랫폼을 사용하여 분석했습니다.

그림 2. 키나아제 억제제 스크리닝을 통해 인간 T세포 활성화 양상의 다양성을 확인할 수 있다.

CD4+CD69+ 게이팅 전략의 플레이트 뷰. 녹색 상자는 배지만 투여한 대조군을 나타냅니다. 빨간색 상자는 사이클로스포린 투여 대조군을 나타냅니다. 노란색 상자는 그래프 B-D에 표시된 화합물을 나타냅니다(1: 룩솔리티닙; 2: 비신돌릴말레이미드 I; 3: AZD 7762).

CD4+ 및 CD8+ 세포에서 CD69, CD25 및 HLA-DR의 발현. 말초혈액 단핵세포에서 IFNγ 및 TNFα 사이토카인의 분비.

SKOV-3 세포(웰당 4천 개)를 3명의 공여자로부터 얻은 말초혈액 단핵세포(웰당 1만 개)와 함께 공동 배양했습니다. CD3/CD28 다이나비드를 사용하여 세포 활성화를 유도했습니다. 4일 후, 부착 세포 분리 프로토콜에 따라 세포를 분리하고 T 세포 활성화 세포 및 사이토카인 프로파일링 키트를 사용하여 분석했습니다. 초기(CD69), 후기(CD25) 및 더욱 후기(HLA-DR) T 세포 활성화 마커의 발현을 측정했습니다. 각 공여자별 IFNγ 분비량도 분석했습니다.

그림 3. 서로 다른 공여자로부터 분리한 말초혈액 단핵세포(PBMC)의 활성화 양상 및 사이토카인 방출량의 변동성을 정량화함.

Ramos 세포(웰당 40,000개)에 서로 다른 세 명의 공여자로부터 얻은 PBMC를 3:1의 이펙터 대 타겟 비율로 접종했습니다. CD3/CD28 Dynabeads를 첨가하여 T 세포 활성화를 유도했습니다(최고 농도 비율: Dynabeads 4: PBMC 1, 1:2 연속 희석). 60시간 후, iQue^® 인간 T 세포 활성화 키트를 사용하여 세포를 분석했습니다. 양성 대조군(Dynabeads 4:1)과 음성 대조군(Dynabeads 없음)을 사용하여 템플릿 게이트의 위치를 확인했습니다. 히트맵은 각 PBMC 공여자(n=3)에 따른 활성화 마커 CD25 발현 양성 CD8 세포독성 T 세포의 비율을 보여줍니다. 그림 B의 데이터는 농도 반응 곡선으로 나타냈습니다.

그림 4. iQue Forecyt^®의 사전 정의된 게이트를 통해 인간 T 세포 하위 집단의 자동 표현형 분석이 가능합니다.