T 세포 활성화 | 표현형 및 기능 키트

새로운 치료용 항체를 발견하거나, 특정 체크포인트 억제제를 개발하거나, CAR T-세포 기능을 평가하든 간에, 귀하의 연구를 앞으로 나아가게 하는 핵심은 생물학적으로 관련성 있고, 재현 가능하며, 비용 효율적인 방식으로 더 많은 샘플을 신속하게 평가할 수 있는 능력에 달려 있습니다.

iQue^® HTS 플랫폼은 고정된 넓은 동적 범위를 활용하여 분비된 사이토카인의 표현형과 기능적 분석을 동시에 수집할 수 있으며, 서로 다른 시점의 불일치나 후속 분석을 위해 샘플을 분할할 필요성을 제거합니다.

iQue^® HTS 플랫폼 탐색

서로 다른 T 세포 표현형에 대해 3가지 활성화 마커의 발현을 프로파일링합니다: CD69 (초기), CD25 (후기), 그리고 HLA-DR (더 후기). 2가지 효과 사이토카인(IFNγ와 TNFα)도 동일한 웰에서 샌드위치 면역분석 형식의 2-플렉스 Qbeads를 사용하여 정량됩니다. T 세포 증식 또는 인코딩된 표적 세포의 동시 측정이 가능하지만 이 그림에는 포함되어 있지 않습니다.

그림 1. 인간 T 세포 활성화 키트 분석 원리 설명.

PBMCs는 20 µM의 키나아제 억제제 패널로 1시간 동안 처리되었습니다. CD3/CD28 다이나비즈를 추가하여 24시간 동안 활성화를 자극했습니다. 10 µL 샘플은 T 세포 활성화 세포 및 사이토카인 프로파일링 키트와 iQue^® HTS 플랫폼을 사용하여 분석되었습니다.

그림 2. 키나아제 억제제 스크리닝은 인간 T 세포 활성화 프로파일의 변이를 강조합니다.

CD4+CD69+ 게이팅 전략의 플레이트 보기. 녹색 상자는 배지 대조군을 식별합니다. 빨간색 상자는 사이클로스포린 대조군을 식별합니다. 노란색 상자는 그래프 B-D에 표시된 화합물을 식별합니다 (1: 룩솔리티닙; 2: 비신돌일말레이미드 I; 3: AZD 7762).

CD4+ 및 CD8+ 세포의 CD69, CD25 및 HLA-DR 발현. PBMCs로부터 IFNγ 및 TNFα 사이토카인 방출

SKOV-3 세포를 3명의 공여자로부터 얻은 PBMCs(10K/well)와 공동 배양 분석에서 (4K/well)로 파종했습니다. CD3/CD28 Dynabeads로 활성화를 유도했습니다. 4일 후 부착성 세포 리프팅 프로토콜에 따라 세포를 들어올리고 T 세포 활성화 세포 및 사이토카인 프로파일링 키트를 사용하여 분석했습니다. 초기(CD69), 후기(CD25), 그리고 더 후기(HLA-DR) T 세포 활성화 마커의 발현을 확인했습니다. 각 공여자의 IFNγ 방출을 측정했습니다.

그림 3. 서로 다른 공여자로부터 분리된 PBMC의 활성화 프로파일 및 사이토카인 방출의 가변성 정량화

Ramos 세포(40K/well)를 3:1 효과세포-표적세포 비율로 세 명의 서로 다른 공여자로부터의 PBMC와 함께 배양했습니다. T 세포 활성화를 유도하기 위해 CD3/CD28 Dynabeads를 추가했습니다(최고 농도 비율 4 Dynabeads: 1 PBMC, 1:2 연속 희석). 60시간 후, 세포를 iQue^® Human T Cell Activation Kit를 사용하여 분석했습니다. 위치 게이트 확인을 위해 양성(4:1 Dynabeads) 및 음성(Dynabead 없음) 대조군을 사용했습니다. 히트맵은 각 PBMC 공여자(n=3)에 대해 활성화 마커 CD25 발현에 양성인 CD8 세포 독성 T 세포의 %를 보여줍니다. B의 데이터를 농도 반응 곡선으로 도시했습니다.

그림 4. iQue Forecyt^®의 사전 정의된 게이트는 인간 T 세포 부분집단의 자동 표현형 분석을 가능하게 합니다.