Tcell Killing Kit

T 세포 살해

T세포 표현형 및 기능 백서를 읽어보세요.

T세포 사멸 – 세포 및 사이토카인 프로파일링

세포독성 T 림프구(CTL)는 면역 체계의 필수적인 구성 요소이며 감염된 세포와 악성 세포를 제거하는 데 중요한 역할을 합니다. CTL은 면역 체계의 기능성(CD8+) 하위 집단으로, 퍼포린을 이용하여 표적 세포막에 구멍을 만들어 그랜자임이 침투할 수 있도록 함으로써 표적 세포의 세포사멸을 유도합니다.

면역 세포 매개 세포독성은 단클론 항체, 이중특이성 T 세포 활성화제(BiTE), 키메라 항원 수용체(CAR) 및 T 세포 억제제(TRW)와 같은 다양한 치료제에 의해 유도될 수 있습니다. 면역 체계의 힘을 활용하는 것은 강력한 항암 전략으로 여겨지며 면역항암 분야에서 유망한 결과를 보여주고 있습니다. T 세포 표현형 및 세포독성 기능을 조사하는 데 사용되는 기존 기술은 다음과 같은 한계를 가지고 있습니다.

  • 사이토카인, 세포독성 및 마커 발현 측정을 위해서는 별도의 분석법과 장비가 필요합니다.
  • 세포독성을 측정할 때는 노동집약적이고 간접적인 방법(예: 크롬 방출 분석)을 사용하십시오.
  • 여러 출처의 데이터를 수동으로 분석하고 취합해야 합니다.
  • 프로토콜 최적화, 고정 및 반복 세척과 같은 단계를 포함하는 길고 시간이 많이 소요되는 워크플로우를 수반합니다.

iQue® 인간 T세포 사멸 분석 애플리케이션은 iQue® 인간 T세포 사멸 분석 키트를 활용하여 T세포 표현형 및 활성화 마커 발현, 표적 세포 사멸, 분비되는 이펙터 단백질 및 사이토카인의 정량 분석을 동시에 고처리량으로 수행합니다. iQue® 고처리량 스크리닝(HTS) 기술과 통합된 실시간 데이터 분석 기능을 결합하여 면역 치료제 개발 프로세스를 간소화하고 효율성을 높일 수 있는 솔루션을 제공합니다.

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T세포 사멸을 위한 솔루션

iQue® 인간 T세포 사멸 키트

인간 T세포 매개 살해 키트는 세포 표현형 및 기능 마커와 비드 기반 분비 단백질 프로파일 측정을 동일한 분석에서 간편하게 수행할 수 있도록 설계되었습니다. 이 단일 세척 분석법은 최소한의 작업 시간으로 다음과 같은 생물학적 정보를 제공합니다.

  • 살아있는 면역 세포는 형광 세포막 완전성 염색약을 사용하여 염색함으로써 죽은 세포와 구별됩니다.
  • 세포는 형광 항체 패널로 염색하여 CD3+ T 세포, CD3- 비T 세포, CD8+ T 세포독성 세포 및 CD3+ CD8- T 도우미 세포를 구분함으로써 면역표현형을 분석합니다.
  • 이 패널에는 CD25와 PD-1이라는 두 가지 서로 다른 T 세포 기능 마커도 포함되어 있습니다.
  • 최적화된 워크플로우를 통해 염증 유발 분비 사이토카인 IFNγ와 세포 사멸 촉진 세린 프로테아제 그랜자임 B를 동일한 분석 웰에서 측정할 수 있습니다.
  • 로딩 중...
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세포 계측 플랫폼을 통한 iQue® 고처리량 스크리닝(HTS)

새로운 치료용 항체를 발견하든, 특정 면역관문 억제제를 개발하든, CAR T세포 기능을 평가하든, 연구를 진전시키려면 생물학적으로 의미 있고 재현 가능하며 비용 효율적인 방식으로 더 많은 샘플을 신속하게 평가할 수 있어야 합니다.

iQue® HTS 플랫폼은 고정된 넓은 동적 범위를 활용하여 분비된 사이토카인의 표현형 및 기능 분석을 동시에 수행할 수 있으므로, 서로 다른 시점의 데이터 불일치나 후속 분석을 위해 샘플을 분할해야 하는 필요성을 없애줍니다.

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T세포 사멸의 주요 이점

생물학적 통찰력을 얻으세요

생리학적으로 적합한 모델에서 T세포 살해 능력을 평가합니다.

생산성을 높이세요

혼합 세포 및 비드 분석법을 이용한 마커 발현과 분비 사이토카인의 동시 측정

데이터 분석 간소화

실시간 데이터 분석 및 혁신적인 시각화 도구를 통해 정량적 결과를 신속하게 생성할 수 있습니다.

시간과 소중한 샘플을 절약하세요

기존 워크플로우를 하나의 소형화된 다중 분석법으로 통합

iQue® 인간 T 세포 사멸에 대한 예시 데이터

T 세포 살해에 대한 생물학적 이해를 얻으십시오.

CD8+ T 세포의 상태는 활성화 마커인 CD25와 소진 마커인 PD-1의 발현을 통해 분석할 수 있습니다. 또한, 두 가지 효과기 사이토카인(IFNγ 및 그란자임 B)은 동일한 웰에서 샌드위치 면역 분석법을 이용하여 2-plex Qbeads로 정량화합니다. T 세포 증식 또는 표적 세포의 동시 측정이 가능하지만, 본 그림에는 포함되어 있지 않습니다.


그림 1. iQue® 인간 T세포 사멸 키트 분석 원리 그림.

Incucyte® Nuclight Green으로 표지된 Ramos 세포를 PBMC(75,000개/웰)와 함께 공동 배양 실험에 15,000개/웰로 접종했습니다. CD3xCD19 BiTE 항체를 사용하여 활성화를 유도했습니다. 세포를 분쇄한 후, 세포 및 상층액 샘플을 iQue® Human T Cell Killing Kit를 사용하여 분석했습니다. 표적 세포의 생존율은 6일 동안 농도 의존적으로 감소했습니다. CD8+ 세포에서 T 세포 활성화 및 소진 마커의 발현은 3일까지 증가하다가 이후 감소하기 시작했습니다. IFNγ 및 그란자임 B 분비도 측정했습니다.


그림 2. CD3xCD19 이중특이성 T세포 활성화제(BiTE) 항체는 6일 동안 농도 의존적인 세포 사멸, 표지자 발현 및 사이토카인 방출을 유발한다.

마커 발현과 분비된 사이토카인을 동시에 평가합니다.

Incucyte® Nuclight Green으로 표지된 Ramos 세포를 PBMC(75,000개/웰)와 함께 공동 배양 실험에 15,000개/웰로 접종했습니다. Immunocult CD3/CD28/CD2를 사용하여 활성화를 유도했으며, 사용된 최고 농도는 권장 자극 농도(세포 1,060개/mL당 25µL)에 해당합니다. 세포를 분쇄한 후 세포 및 상층액 샘플을 채취하여 iQue® Human T Cell Killing Kit를 사용하여 분석했습니다. CD8+ 세포에서 후기(CD25) T 세포 활성화 발현을 확인했습니다. CD8+ 세포에서 PD-1(T 세포 소진) 발현을 확인했습니다. (C) IFNγ 및 그란자임 B 분비를 측정했습니다.


그림 3. Immunocult CD3/CD28/CD2 활성제는 농도 및 시간에 따라 T 세포 활성화, 소진 및 살해 지표에 변화를 일으킨다.


신속한 정량적 결과를 위한 실시간 분석 및 혁신적인 시각화 도구

세 명의 공여자로부터 얻은 PBMC(120,000개/웰)를 Incucyte® Nuclight Green으로 표지된 Ramos 세포(40,000개/웰)와 함께 배양하고, 다양한 농도의 Dynabeads CD3/CD28로 활성화시켰습니다. 3일째에 iQue® Human T Cell Killing Kit를 사용하여 분석을 수행했습니다. 중첩 플롯은 양성 대조군(Dynabeads 대 PBMC 비율 4:1)과 음성 대조군(Dynabeads 없음) 간의 CD25 발현 차이를 보여줍니다. 히트맵은 Dynabeads에 대한 각 공여자의 PBMC에서 CD25 발현 반응을 나타냅니다. 공여자 2는 공여자 1 및 3에 비해 낮은 Dynabead 농도에서 향상된 민감도를 보였습니다. 데이터는 농도 반응 곡선으로 요약되었습니다.


그림 4. iQue Forecyt®의 사전 설정된 게이트를 통해 T 세포 하위 집단의 자동 표현형 분석이 가능합니다.


기존 워크플로우를 소형화된 다중 분석법으로 간소화하세요

혼합 세포 및 비드 기반 분석법을 사용하여 단일 웰에서 세포 마커 발현 데이터와 상층액 사이토카인 농도를 측정합니다. 이 간소화된 워크플로는 추가적인 최적화나 희석이 필요 없으며, 단 한 번의 세척 단계만 포함하므로 결과 도출 시간을 최소화합니다.


그림 5. iQue® 인간 T세포 사멸 키트를 이용한 T세포 표현형 및 사이토카인 분비 분석을 위한 간편한 프로토콜.

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iQue® 인간 T세포 사멸 키트: 면역세포 표현형 및 기능

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T세포 사멸 관련 자주 묻는 질문

iQue® 인간 T세포 사멸 키트는 활성화 마커(CD25), 소진 마커(PD-1), 세포막 완전성, 세포 수, 분비된 염증성 사이토카인 IFNγ 및 세포 사멸 유도 세린 프로테아제 그란자임 B를 포함한 다양한 지표를 하나의 고함량 분석에서 분석하는 다중 분석법을 사용합니다. 각 분석 웰에 구성 요소와 생존율 염색 시약을 첨가하고 세포 및 상층액 샘플 혼합물과 함께 배양합니다. 사전 설정된 게이팅 전략을 통해 세포와 비드의 형광 신호를 분리하고, T세포 집단 및 사이토카인 농도에 대한 데이터를 나타내기 위해 해당 템플릿을 자동으로 채웁니다.


이 분석법은 최소 1 x 10⁶ 세포/mL의 접종 밀도를 사용하여 검증되었으므로, 분석 시작 시 이 밀도를 권장합니다. 그러나 드문 세포 현상/세포 아집단이 예상되는 경우, 통계적 유의성을 확보하기 위해 세포 수를 늘려야 합니다. 첨가하는 세포 수에 따라 사이토카인 수치가 여전히 검출 가능한지 확인하는 것도 중요합니다. 사이토카인 수치가 표준 곡선의 선형 구간에 대해 측정하기에는 너무 높은 경우, 시료를 희석해야 할 수도 있습니다.


iQue® 인간 T 세포 사멸 키트는 IFNγ 및 그란자임 B 검출을 위한 iQue QBeads®와 함께 제공됩니다. 그러나 이 키트는 해당 사이토카인이 배양 상층액으로 분비되었을 때만 측정이 가능합니다.


전체 분석 시간은 약 3시간이며, 실제 작업 시간은 약 30분입니다.


시료는 특정 고정액(예: 1% PFA)으로 고정할 수 있습니다. 그러나 고정이 생물학적 결과에 미치는 영향을 이해하는 것이 중요합니다. 메탄올을 사용한 고정은 비드 기반 사이토카인 검출에 영향을 미치므로 권장하지 않습니다. 고정 및 추가 세척 단계에서 세포 손실이 발생하여 최종 이벤트 획득에 영향을 줄 수 있으며, 추가적인 최적화가 필요할 수 있습니다. 상당한 세포 손실이 관찰될 경우, 세포 부착 방지 플레이트(예: Greiner® #651970 또는 Greiner® #781970)에서 고정을 수행하면 고정으로 인한 세포 손실이나 고정 관련 세포가 플레이트 바닥에 달라붙는 현상을 줄일 수 있습니다.