면역 세포 기능을 위한 T 세포 기억

그림 2. 사이토카인 자극은 높은 자가 재생 능력을 가진 기억 세포를 5일 이상 유지할 수 있게 한다.

PBMC(100,000개/웰)를 ‘Core’ 사이토카인(IL-4, 100ng/mL 및 IL-7, 10ng/mL)과 Dynabeads CD3/CD28(25,000개/웰)과 함께 단일 배양했습니다. 세포에 다양한 사이토카인 조합(IL-15, 10ng/mL; IL-6, IL-21 및 IFNβ, 100ng/mL)을 처리하고 2일차와 5일차에 10µL 샘플을 채취하여 iQue^® Human T Cell Memory Kit를 사용하여 분석했습니다.

포함 사항IFNß(해시 막대)이는 IL-10 생성을 증가시키고 CD8+ T 중심 기억 세포의 비율을 3배 증가시킵니다. 다른 인터루킨(예: IL-6)과의 병용은 IL-10 생성이나 T 세포 비율 증가에 영향을 미치지 않습니다._CM 인구.

표시된 데이터는 입양 세포 치료제의 생물학적 제조를 위한 배양 조건을 최적화하기 위해 설계된 대규모 패널 분석 결과입니다. 히트맵은 테스트된 모든 치료법에서 T 세포의 분포를 보여줍니다. 청록색 상자로 표시된 부분은 IFNβ로 처리된 경우이며, 다른 치료법보다 T 세포 비율이 더 높습니다.

그림 3. CAR 발현이 T세포에 유도될 때 높은 자가 재생 잠재력을 가진 기억 세포가 항상 유지되는 것은 아니다.

HER-2 및 CD19 CAR-T 세포를 해동했습니다. 동일한 공여자로부터 얻은 대조군 T 세포는 Dynabeads CD3/CD28을 사용하여 3일 동안 활성화시켰습니다. 세포는 T 세포 기억 항체 패널로 표지하여(5회 반복, 웰당 10만 개) 표현형을 평가했습니다. T 세포가 다양한 T 기억 표현형으로 발달함에 따라 표면 마커 발현이 변화하는 과정을 도식적으로 나타냈습니다. 미분화 T 세포(naive T)에서 줄기세포 기억 T 세포(Stem Cell Memory T), 중심 기억 T 세포(Central Memory T), 전환 기억 T 세포(Transitional Memory T), 효과기 기억 T 세포(Effector Memory T), 최종 효과기 T 세포(Terminal Effector T)를 거쳐 세포 사멸에 이르는 과정을 보여줍니다. 활성화된 T 세포, HER-2 CAR-T 및 CD19 CAR-T 세포의 기억 표현형을 나타냅니다.

그림 4. T세포 기억 발달은 기증자마다 다릅니다.

서로 다른 3명의 공여자로부터 분리한 PBMC(웰당 120,000개)를 Ramos 세포(E:T 비율 3:1)와 함께 배양하고, Dynabeads CD3/CD28의 양을 점차 증가시키면서 활성화시켰다. 72시간 후 10µL 샘플을 iQue^® Human T Cell Memory Kit를 사용하여 분석하였다.

(A) 공여자 1, (B) 공여자 2, (C) 공여자 3의 그래프는 T 세포 기억 발달의 각 단계에서 단백질을 발현하는 CD3+ 세포의 비율을 보여줍니다. IL-10 분비량도 함께 나타냈습니다. 청록색 막대는 활성제를 첨가하지 않은 대조군입니다. 회색 막대는 다이나비즈의 농도가 증가하는 세 가지 조건(밝은 색에서 어두운 색 순)을 나타냅니다: 웰당 60,000개, 120,000개, 480,000개.

그림 5. 미리 정해진 게이트iQue Forecyt^®는 T 세포 하위 집단의 자동 표현형 분석을 가능하게 합니다.

세 명의 공여자로부터 얻은 PBMC(120K/well)를 다양한 밀도의 Dynabeads CD3/CD28로 활성화시켰습니다. 3일째에 iQue^® Human T Cell Memory Kit를 사용하여 분석을 수행했습니다. 그림은 T 세포 기억 집단을 중심 기억(T), 전환 기억(T), 효과기 기억(T)으로 구분하는 데 사용된 게이팅 전략을 보여줍니다. 히트맵은 각 공여자로부터 얻은 T 세포 중 T 표현형을 나타내는 세포의 비율을 보여줍니다. 공여자 2는 공여자 1 및 3에 비해 낮은 Dynabead 밀도에서 TEM 표현형 형성에 대한 민감도가 향상된 것으로 나타났습니다. (B)의 데이터는 농도 반응 곡선으로 요약되었습니다.

그림 6. T 세포 표현형 및 사이토카인 분비 분석을 위한 간편한 프로토콜이퀘^® 인간 T세포 기억 키트.

혼합 세포 및 비드 기반 분석법을 사용하여 단일 웰에서 세포 마커 발현 데이터와 상층액 사이토카인 농도를 측정합니다. 이 간소화된 워크플로는 추가적인 최적화나 희석이 필요 없으며, 단 한 번의 세척 단계만 포함하므로 결과 도출 시간을 최소화합니다.