면역 세포 기능을 위한 T-세포 기억

그림 2. 사이토카인 자극을 통해 높은 자가 재생 능력을 가진 기억 세포를 5일 동안 유지할 수 있다.

PBMCs (100K/well)를 'Core' 사이토카인(IL-4, 100 ng/mL 및 IL-7, 10 ng/mL)과 Dynabeads CD3/CD28(25K/well)와 함께 단일 배양에 파종했습니다. 세포를 다양한 조합의 사이토카인(IL-15, 10 ng/mL; IL-6, IL-21 및 IFNß, 100 ng/mL)으로 처리하고 iQue^® Human T Cell Memory Kit를 사용하여 분석하기 위해 2일 및 5일에 10 µL 샘플을 채취했습니다.

포함IFNß(해시 막대)IL-10의 생산을 증가시키고 CD8+ T 중심 기억 세포의 비율을 3배로 높입니다. 대체 인터루킨(예: IL-6)과의 병용은 IL-10 생산이나 T 세포 집단에 대한 증강 효과가 없습니다._CM 집단.

데이터는 양성 세포 치료의 생물 제조를 최적화하기 위해 설계된 대규모 패널 분석에서 나온 것입니다. 열 지도는 모든 처리에서 T_CM 세포를 보여줍니다. 청록색 상자로 윤곽이 그려진 것들은 IFNß로 처리되었으며 다른 처리 유형보다 높은 비율의 T_CM 세포를 가집니다.

그림 3. 고유한 자가 재생 잠재력을 가진 기억 세포가 T 세포에 CAR 발현이 유도될 때 항상 유지되는 것은 아니다.

HER-2 및 CD19 CAR-T가 해동되었다. 같은 공여자의 대조군 T 세포는 3일 동안 Dynabeads CD3/CD28로 활성화되었다. 세포는 T 세포 기억 항체 패널로 표현형을 평가하기 위해 라벨링되었다(5번 반복으로 100K/웰). T 세포가 다른 T 기억 표현형으로 발달하면서 표면 마커 발현 변화를 보여주는 개요. 나이브 T 세포(T_N)에서 줄기 세포 기억(T_SCM)을 거쳐 중심 기억(T_CM)으로, 전이성 기억(T_TM)을 거쳐 효과 기억(T_EM)으로, 최종 효과(T_TE) T 세포를 거쳐 세포 사멸까지. 활성화된 T 세포, HER-2 CAR-T 및 CD19 CAR-T 기억 표현형.

그림 4. T 세포 기억 발달은 공여자마다 다릅니다.

3명의 개별 공여자로부터 분리된 PBMC(120K/well)를 Ramos 세포(3:1 E__PH_0__ 비율)와 공동 배양하고, 점점 더 많은 수의 Dynabeads CD3/CD28로 활성화했습니다. 10 µL 샘플을 iQue^® 인간 T 세포 기억 키트를 사용하여 72시간에 분석했습니다.

(A) 기증자 1, (B) 기증자 2, (C) 기증자 3의 T 세포 기억 발달 각 단계의 단백질을 발현하는 CD3+ 세포의 비율을 보여주는 그래프. IL-10 방출도 표시됨. 청록색 막대는 활성제 없는 대조군. 회색 막대는 3가지 상승 농도의 다이나비즈(밝은색에서 어두운색): 웰당 60K, 120K, 480K 비즈

그림 5. 사전 결정된 게이트 iQue Forecyt^® T 세포 하위 집단의 자동 표현형 분석 활성화

PBMCs (120K/well)는 세 가지 다른 공여자로부터 다양한 밀도의 Dynabeads CD3/CD28로 활성화되었습니다. 분석은 iQue^® 인간 T 세포 기억 키트를 사용하여 3일째 수행되었습니다. 플롯은 중심 기억 (T_CM)에서 전이 기억 (T_TM)과 효과 기억 (T_EM)까지 T 세포 기억 집단을 분리하는 게이팅 전략을 보여줍니다. 히트맵은 각 공여자의 T 세포 중 T_EM 표현형을 나타내는 비율을 보여줍니다. 공여자 2는 1과 3에 비해 낮은 Dynabead 밀도에서 TEM 표현형 형성의 향상된 민감도를 보였습니다. (B)의 데이터는 농도 반응 곡선으로 요약되었습니다.

그림 6. iQue를 사용한 T 세포 표현형 및 사이토카인 분비 분석을 위한 쉬운 프로토콜iQue^® 인간 T 세포 메모리 키트.

세포 마커 발현 데이터와 상층액 사이토카인 농도는 혼합 세포 및 비드 기반 분석을 사용하여 단일 웰에서 획득됩니다. 이 간소화된 워크플로우는 추가 최적화 또는 희석이 필요 없으며 단 하나의 세척 단계만 포함하여 결과 도출 시간을 최소화합니다.