종양 침윤 림프구: 왜 연구해야 할까요?

Incucyte^® 생세포 분석 시스템과 iQue^® HTS 세포 계측 플랫폼을 모두 사용하여 종양 침윤 림프구를 분석할 수 있도록 하는 프로토콜의 개략도.

• 자극에 대한 면역 세포 침윤 정도를 정량화합니다.
• 종양 미세환경의 영향을 파악하기 위해 침윤 세포와 비침윤 세포 간의 활성화 프로파일의 표현형적 차이를 밝혀낸다.

그림 2. (A) 유방암 스페로이드로의 CD3+ PBMC 침윤의 농도 의존적 증가. 

BT474 세포(웰당 4,000개 세포)로 스페로이드를 72시간 동안 배양한 후, 말초혈액 단핵세포(PBMC, 웰당 20,000개 세포)와 CD3/CD28 다이나비드를 첨가했습니다. CD3/CD28 다이나비드로 PBMC를 활성화시키면 CD3 T세포가 농도 의존적으로 유방암 스페로이드 내부로 침투합니다. 다이나비드 농도가 가장 높은 20,000개에서 PBMC가 종양 스페로이드를 사멸시키기 시작하면서 스페로이드가 공격받음에 따라 침투량이 감소했습니다. 각 데이터는 평균 ± 표준오차(n=8)를 나타냅니다.

침윤되지 않은 세포를 수집하여 표지했습니다. 그런 다음 구형체를 분리하고 침윤된 세포를 표지했습니다. 침윤된 세포는 CD69(초기), CD25(중기) 및 HLA-DR(후기) 활성화 표지자를 훨씬 높은 수준으로 발현합니다. 각 데이터는 평균 ± 표준오차(SEM)를 나타내며, 8회 반복 측정했습니다.

그림 3. 종양 구형체로의 T세포 침윤은 세포 유형 특이적이며 기질 세포에 의해 조절된다.. 

A549, SKOV-3 또는 BT474 세포(웰당 5,000개 세포)로 스페로이드를 72시간 동안 배양한 후, 사전 활성화된(CD3/CD28 Dynabeads) 말초혈액 단핵세포(PBMC, 웰당 25,000개 세포)를 첨가했습니다. 데이터는 암 유형별로 3명의 공여자로부터 얻은 결과입니다. CD3+ 세포 침윤은 암 유형에 따라 다릅니다. CD8:CD4 비율 또한 암 유형에 따라 차이가 있으며, 이는 치료 결과 및 병리학적 완전 관해(pCR) 가능성을 예측하는 지표입니다. BT474 세포 단독 또는 CCD1068SK 섬유아세포와 1:1로 혼합하여 72시간 동안 스페로이드를 형성한 후, 사전 활성화된 PBMC를 접종했습니다. 섬유아세포를 첨가하면 스페로이드 내 CD3+ 세포 침윤이 60% 이상 크게 감소합니다.

여러 플레이트에서 데이터를 병렬로 수집 및 분석하여 더 빠르게 답을 얻으세요.

그림 4. 통합 iQue Forecyt^® 소프트웨어는 빠른 분석을 가능하게 하여 데이터 처리 시간을 단축합니다.. 

TCA 키트는 사전 정의된 게이팅 템플릿을 제공하여 "설정 후 그대로 두는" 간편한 사용 환경을 제공합니다. 양성(녹색) 및 음성(빨간색) 집단을 정의하여 게이팅을 조정할 수 있으며, 이는 플레이트 뷰 판독값을 자동으로 업데이트합니다. 플레이트 뷰는 사용하기 쉬운 마법사를 통해 농도 반응 곡선으로 변환할 수 있습니다.

빠른 샘플링 속도는 더 많은 반복 실험을 가능하게 하여 변동성이 큰 생물학적 특성과 관련된 일부 문제를 완화합니다.

그림 5. CD3 세포 침윤은 스페로이드 해리 후 iQue^® HTS 플랫폼을 사용하여 정량화하여 반복 횟수의 영향을 평가했습니다.. 

iQue^®의 높은 처리량 용량을 활용하면 데이터 수집 시간을 늘리지 않고도 반복 측정 횟수를 늘릴 수 있으므로 다양한 생물학적 효과를 연구하는 데 도움이 됩니다.

96웰 플레이트:

• 4회 반복 (4회마다 세척, 4회마다 흔들기, 5초간 음미) 21분 32초
• 8회 반복 (8회마다 세척, 4회마다 흔들기, 5초 간격으로 음미) 19분 08초