신경 활동을 측정하는 이유는 무엇일까요?

• - Incucyte^® Neuroburst Orange Lentivirus를 사용하여 다양한 신경 세포 유형에서 유전적으로 코딩된 형광 칼슘 센서를 발현합니다.
• - 수천 개의 세포에서 단기적인 칼슘 유입 속도 변화를 자동으로 포착 및 분석하고, 세포 형태를 정성적으로 모니터링합니다.
• - 세포가 배양기 안에 그대로 있는 동안 96웰 플레이트의 각 웰에 있는 모든 활성 객체의 종단적 변화를 정량화합니다.
• - 실험실에서 검증된 생세포 시약, 확립된 프로토콜 및 맞춤형 소프트웨어를 사용하여 표현형 정보에 대한 전례 없는 접근성을 확보하세요. 초보 사용자도 쉽게 사용할 수 있습니다.

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96웰 마이크로플레이트에 웰당 20,000개의 세포를 접종한 CNS.4U iPSC 유래 신경세포(Ncardia)에 Incucyte^® Neuroburst Orange Reagent를 감염시켜 시간에 따른 신경 활동을 관찰했습니다. 15일차와 44일차에 촬영한 3분 길이의 동영상은 신경 활동(칼슘 진동)의 자발적인 발달을 보여주며, 위상차 이미지는 세포 형태를 정성적으로 관찰할 수 있게 해줍니다. 45일 동안 24시간 간격으로 3분씩 촬영한 동영상은 Incucyte^® Neuroburst Orange Reagent의 지속적인 발현을 보여줍니다. 주황색 형광 신호의 변화 양상을 정량화한 결과, 실험 기간 동안 활성 세포 수가 증가하고, 후기 시점에서는 평균 상관관계(연결성)도 이에 상응하여 증가하는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 기능적이고 성숙한 신경망이 발달했음을 의미합니다.

Incucyte^® rCortical Neurons 일차 뉴런을 Incucyte^® rAstrocytes와 함께 공동 배양 모델에서 웰당 15,000개 세포로 접종한 후, Incucyte^® Neuroburst Orange Lentivirus를 감염시켰습니다. Vessel View는 8일째 동영상 촬영 중에 얻은 96웰 플레이트 각 웰의 활성 객체(범위 이미지) 요약을 보여주며, 마이크로플레이트 전체에 걸쳐 활성 차이를 나타냅니다. 범위 이미지에서 마스킹(보라색으로 표시)을 통해 각 활성 객체를 식별하는 작업은 통합된 Incucyte^® Neuronal Activity Analysis Software Module을 사용하여 수행됩니다. 특정 시점에 촬영된 동영상의 96웰 요약 추적 이미지는 버스트 강도, 활성 객체 수(왼쪽 삽입 값) 및 평균 상관관계(오른쪽 삽입 값)에 대한 96웰 전체의 모습을 보여줍니다.

iCell GlutaNeurons(Cellular Dynamics International) 세포를 PEI/라미닌으로 코팅된 96웰 배양 플레이트에 웰당 30,000개씩 접종하고, 쥐 성상세포(웰당 15,000개)와 함께 공동 배양했습니다. 뉴런은 배양 2일째(DIV 2)에 Incucyte^® Neuroburst Orange 렌티바이러스로 형질전환시켰고, 20일 동안 자발적인 신경 활동을 분석했습니다. 시간에 따른 평균 버스트율과 평균 상관관계의 종단적 동적 변화에 대한 운동학적 정량 분석(중앙 그래프) 결과, 신경망 성숙 과정에서 버스트율이 증가하여 5일째에 최고치를 나타냈습니다. 시간 경과 데이터는 또한 상관관계의 증가에서 알 수 있듯이 신경 시냅스 연결의 증가를 보여줍니다. 활성 객체 추적(모서리 추적)은 획득한 모든 동영상에 대한 신경 활동 및 연결성의 동적 변화에 대한 자세한 정보를 제공하며, 동영상 보기 도구를 통해 정성적으로 확인했습니다.

자동화된 데이터 수집 및 분석 기능과 당사의 혁신적인 시약 및 실험실 검증된 프로토콜을 결합하여 표현형 정보에 대한 전례 없는 접근성을 확보하십시오. 직관적인 인터페이스를 통해 신속한 실험 설정 및 분석이 가능하며, 연구팀 전체가 데이터와 이미지를 손쉽게 활용할 수 있습니다.

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